張炯慧

新疆福海縣畜牧獸醫(yī)站，新疆 福海 836400

牛支原體是引起牛支原體肺炎的重要病原體，致病力強(qiáng)。牛支原體的感染呈世界性分布，常與關(guān)節(jié)炎、乳腺炎、結(jié)膜炎和耳炎有關(guān)。感染牛支原體的牛是主要傳染源，可以通過(guò)呼吸道排出病菌，傳染給健康牛，引發(fā)呼吸系統(tǒng)疾病。牛支原體肺炎嚴(yán)重危害牛群健康以及養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)效益[1]。因此，養(yǎng)殖戶應(yīng)采取科學(xué)的方法進(jìn)行防治，降低牛支原體肺炎感染率，并及時(shí)治療病牛，保證牛群的健康成長(zhǎng)。因此，如何有效防治牛支原體肺炎已成為許多學(xué)者與養(yǎng)殖戶關(guān)注的重點(diǎn)。

1 牛支原體概述

1.1 牛支原體介紹

牛支原體是牛群養(yǎng)殖中相對(duì)常見(jiàn)的致病性病原體，多寄生在病牛的鼻腔或乳腺中，通?？蓮牟∨５姆尾坎≡钪兄苯臃蛛x，或是從病牛的淋巴結(jié)組織中檢出。因?yàn)槿鄙偌?xì)胞壁，所以抗熱能力偏弱，對(duì)高溫敏感，伴隨溫度升高，存活力減弱，處于無(wú)陽(yáng)光狀態(tài)下可存活數(shù)日，處于20 ℃溫度中可存活1～2 周，在37 ℃環(huán)境中可存活1 周，在糞便中可存活37 d[2]。

1.2 流行病學(xué)

牛支原體是牛群較易感染的病原菌，可引發(fā)地方流行性疫情，其中肉牛及奶牛感染率更高，而水?；蛐◇w型反芻動(dòng)物感染率較低，不會(huì)感染人，牛支原體感染的潛伏期不明。我國(guó)牛支原體肺炎感染和暴發(fā)與運(yùn)輸密切相關(guān)，一般是在牛群運(yùn)輸至目的地后1 周發(fā)作[3]。部分牛群在運(yùn)輸至目的地后第2天便發(fā)病，部分架子牛在抵達(dá)目的地10 d 后發(fā)病。牛支原體肺炎可以同時(shí)與其他病原體形成混合感染，長(zhǎng)途運(yùn)輸、飼養(yǎng)方法以及環(huán)境變化等因素也是誘發(fā)該病的主要因素。

2 病例介紹

2.1 病例資料與病理變化

2020 年11 月中旬，本地區(qū)養(yǎng)殖戶分批次從外地引入肉牛48 頭，1 周后少數(shù)牛發(fā)病，部分牛在到達(dá)目的地第2 天即發(fā)病。所有病牛臨床癥狀相近：①病情嚴(yán)重的病牛，停止反芻；②體溫明顯升高，大部分病?？蛇_(dá)41.5 ℃左右；③呼吸困難，被迫采用腹式呼吸，期間自動(dòng)伸頸，前肢分開(kāi)，同時(shí)發(fā)出呻吟；④喜歡保持臥姿，按壓肋骨有痛感反應(yīng)；⑤伴發(fā)陣發(fā)性咳嗽，且在清晨與夜間尤為劇烈，外流鼻液呈透明或膿性，肺部聽(tīng)診肺泡音明顯減弱甚至消失，呼吸過(guò)程中有明顯的支氣管啰音及胸摩擦音；⑥后期病牛并發(fā)便血與關(guān)節(jié)炎，行走明顯障礙，關(guān)節(jié)內(nèi)有膿腫；⑦病情相對(duì)較輕的病牛，精神抑郁、毛粗亂，體型消瘦，容易出現(xiàn)干性短咳嗽；⑧犢牛病情相對(duì)嚴(yán)重，病死率多達(dá)25%。養(yǎng)殖戶初期應(yīng)用青霉素、鏈霉素以及磺胺類藥物進(jìn)行簡(jiǎn)單治療，但無(wú)明顯效果?？傆?jì)有2 頭病牛死亡，針對(duì)其中1 例病牛進(jìn)行解剖，病理變化如下所示：牛支原體肺炎病變位置主要集中在胸腔及肺部，臨床表現(xiàn)為肺部壞死，間質(zhì)增寬，產(chǎn)生大理石樣病變。胸膜顯著增厚，胸腔內(nèi)積液混濁，且混合了纖維素塊的黃色液體。胸膜和肺部患處產(chǎn)生粘連，心包含積液，液體相對(duì)澄清，呈黃色；支氣管與淋巴結(jié)明顯腫大，且存在出血癥狀；肺部存在化膿性壞死灶，呈廣泛分布的特點(diǎn)；其他病變與并發(fā)感染有關(guān)，病例肝臟表面存在化膿性壞死灶以及蟲(chóng)移行痕跡；腸系膜淋巴結(jié)腫大，呈暗紅色，切面汁液較多，有液體外滲。

2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

1）細(xì)菌分類培養(yǎng)。無(wú)菌采用病死牛的肺臟血瓊脂平板，置于37 ℃環(huán)境下培養(yǎng)12～48 h，以了解細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況。

2）支原體分離培養(yǎng)。對(duì)牛肺臟組織予以研磨與過(guò)濾處理，依照10%的接種量把濾液接種至PPLO支原體培養(yǎng)基內(nèi)，置于37 ℃環(huán)境中培養(yǎng)，為期4 d，之后接種在支原體固體培養(yǎng)基，同樣置于37 ℃環(huán)境中培養(yǎng)，持續(xù)4 d，觀察菌落情況。

3）PCR 擴(kuò)增。采集病死牛肺部等器官并予以研磨處理。利用基因組RNA/DNA 提取試劑盒，提煉病料RNA/DNA，應(yīng)用特異性引物RT-RNA/DNADE 檢驗(yàn)牛支原體、化膿隱秘桿菌、牛傳染性鼻氣管炎病毒、牛冠狀病毒、牛病毒性腹瀉病毒以及溶血曼式桿菌等總計(jì)8 種病原，并通過(guò)電泳觀察結(jié)果。

4）藥敏試驗(yàn)。選用多西環(huán)素、氧氟沙星、林可霉素、阿莫西林以及頭孢拉定等總計(jì)12 種藥物開(kāi)展藥敏試驗(yàn)。

5）實(shí)驗(yàn)室結(jié)果。細(xì)菌分離鑒定方面，病死牛肺臟組織在血平板接種1～2 d 后并未發(fā)現(xiàn)菌落數(shù)生長(zhǎng)。支原體分離培養(yǎng)方面，接種的PPLO 支原體培養(yǎng)從玫瑰色轉(zhuǎn)為橘紅色。支原體固體培養(yǎng)基上形成針尖樣菌落，通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)煎蛋樣菌落。從PCR 擴(kuò)增結(jié)果而言，通過(guò)RT-RNA/DNA 檢驗(yàn)牛支原體、多殺巴氏桿菌、牛傳染性鼻氣管炎以及溶血曼氏桿菌等病毒，結(jié)果顯示，僅存在和牛支原體引物擴(kuò)增相符的條帶大小。藥敏試驗(yàn)結(jié)果方面，該支原體對(duì)馬波沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星以及恩諾沙星等敏感；對(duì)多西環(huán)素、氟苯尼考、替米考星、阿莫西林、林可霉素、頭孢拉定以及頭孢噻肟耐藥。

3 牛支原體肺炎的診斷

就本次案例而言，通過(guò)病牛臨床癥狀、解剖癥狀、細(xì)菌分離鑒定、支原體培養(yǎng)以及PCR 擴(kuò)增等檢驗(yàn)方式明確該病癥是因牛支原體感染所致。牛以呼吸道發(fā)病為主要臨床癥狀的因素較多，包括病毒，如牛冠狀病毒、牛副流感病毒3 型以及牛病毒性腹瀉病毒等；細(xì)菌，包括多殺巴氏桿菌、溶血曼氏桿菌等；支原體、寄生蟲(chóng)單獨(dú)或是聯(lián)合感染等。同時(shí)，一些外界環(huán)境因素也可能誘發(fā)呼吸道發(fā)病癥狀，如衛(wèi)生環(huán)境、交通運(yùn)輸環(huán)境等[4]。本次研究顯示致病原因含2 個(gè)方面：一是，病牛所在牛群由外省引入，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸，身體抵抗能力減弱，容易患??；二是，該養(yǎng)殖戶在我國(guó)新疆，氣候干燥，天氣炎熱，容易引發(fā)牛呼吸道病癥。本次病例解剖與試驗(yàn)中僅檢出牛支原體，證明該病例主要是因?yàn)榕Ｖгw感染引發(fā)。

牛支原體實(shí)驗(yàn)室診斷較為常用的方式包括血清學(xué)、病原學(xué)以及分子學(xué)。血清一般是用作流行病學(xué)調(diào)查以及前期診斷，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是牛支原體流行病學(xué)檢驗(yàn)中應(yīng)用最為廣泛的血清學(xué)檢驗(yàn)方式之一[5]。但是，不同試劑盒的特異性以及精確度也存在一定的差別。病原菌分離培養(yǎng)方式相對(duì)直觀、可靠與便捷，是診斷該病癥相對(duì)靠譜的方式，因?yàn)橹гw缺少細(xì)胞壁，所以對(duì)培養(yǎng)條件要求較為嚴(yán)格，培養(yǎng)難度較高，且需要較長(zhǎng)的時(shí)間，還需投入大量精力[6]。所以，檢驗(yàn)常用PCR、高通量芯片技術(shù)以及LAMP 予以診斷，利用設(shè)計(jì)特異性引物，包括uvrC 以及OPPD/F 等。雌激素可以精準(zhǔn)且迅速地區(qū)別牛支原體與其他支原體。就本次病死牛解剖即采用支原體分離培養(yǎng)技術(shù)以及PCR 鑒別診斷技術(shù)，結(jié)果顯示二者均從病例中檢測(cè)獲得牛支原體。

4 病牛治療方案

治療應(yīng)堅(jiān)持早診斷與早治療的基本原則，避免疫情進(jìn)一步擴(kuò)散。養(yǎng)殖戶需要對(duì)病牛進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，并采用抗菌藥物以及消炎藥物予以治療。急性：如果有超過(guò)30%的牛感染且需要治療，其他健康?？赡芴幱陔[性感染狀態(tài)，最好使用不同的抗生素進(jìn)行全群治療。對(duì)病牛肌肉注射恩諾沙星注射液，劑量為0.1 mL/kg，2 次/d，持續(xù)注射3 d，牛飼料中添加5%的多西環(huán)素以及20%的替米考星粉劑。另外，建議用維生素C 注射液、維生素K3注射液、5%葡萄糖生理鹽水注射液、能量合劑，以此控制病情的蔓延。慢性：肌肉注射抗生素，泰樂(lè)菌素4～10 mg/kg、土霉素10 mg/kg、螺旋霉素20 mg/kg、壯觀霉素20～30 mg/kg。

5 牛支原體肺炎防治措施

5.1 及時(shí)隔離

如果養(yǎng)殖人員發(fā)現(xiàn)牛群中已經(jīng)有感染牛支原體的病牛，必須及時(shí)對(duì)其進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，以限制病情的進(jìn)一步蔓延。并及時(shí)對(duì)所有牛進(jìn)行血清抗體檢驗(yàn)，如果有牛血清抗體顯示為陽(yáng)性，即證明該?？赡芑疾?，同樣需要隔離。隔離期間，養(yǎng)殖戶可以采用抗生素治療。如果病牛的臨床癥狀顯著，且存在惡化趨勢(shì)，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行撲殺，并予以無(wú)害化處理。

5.2 強(qiáng)化監(jiān)督管理

如果養(yǎng)殖場(chǎng)需要引入外地牛，養(yǎng)殖人員需要對(duì)牛進(jìn)行檢疫，在引種前預(yù)先調(diào)查病牛產(chǎn)地，嚴(yán)禁在病區(qū)或是隔離區(qū)內(nèi)引入，并對(duì)牛支原體、泰勒蟲(chóng)等病癥開(kāi)展檢疫接種，避免引入帶病菌的牛群，落實(shí)檢疫措施。另外，引入外地牛時(shí)，應(yīng)確保沒(méi)有疫情后才能實(shí)行混合飼養(yǎng)。

5.3 定期消毒

養(yǎng)殖戶應(yīng)嚴(yán)格落實(shí)衛(wèi)生消毒制度，定期對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)及其附近環(huán)境進(jìn)行消毒，建議采用25%的草木灰以及20%石灰乳噴撒養(yǎng)殖場(chǎng)，保證養(yǎng)殖場(chǎng)干燥度滿足要求。定期清潔養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)的糞便，并進(jìn)行無(wú)害化處理。保證良好的通風(fēng)環(huán)境，以免有害氣體的產(chǎn)生，進(jìn)而損害牛的呼吸道黏膜。另外，養(yǎng)殖戶應(yīng)保證滅蠅以及滅鼠等工作，以免產(chǎn)生病原傳播的問(wèn)題。

5.4 強(qiáng)化飼養(yǎng)管理

?；加信Ｖгw肺炎和環(huán)境等因素之間關(guān)系密切，養(yǎng)殖人員需要尤為重視飼養(yǎng)管理工作，確保牛舍的通風(fēng)良好，環(huán)境干燥，且需要重視冬季的防風(fēng)以及保暖工作。另外，養(yǎng)殖人員需要合理管控牛群的密度，結(jié)合年齡以及牛群來(lái)源分別飼養(yǎng)，避免病情蔓延。養(yǎng)殖場(chǎng)如果采用異地引種的方法，需要先調(diào)查引種牛相關(guān)信息，包括食欲、精神狀況以及養(yǎng)殖檔案，檢驗(yàn)牛排便狀況，確認(rèn)引種牛是否健康。在正式引種前，還需調(diào)查牛的集散地以及生產(chǎn)地，明確是否有防疫證明。另外，引種在進(jìn)入養(yǎng)殖場(chǎng)前，必須先隔離飼養(yǎng)，保證沒(méi)有問(wèn)題后才可引入牛場(chǎng)飼養(yǎng)。