劉 妮，李 浪，王玉珠，高漸飛，吳應(yīng)海，陳 宵

(貴州科學(xué)院山地資源研究所，貴州 貴陽 550002)

1 引言

冬小包腳菇(VolvariellabrumalisHe sp.)俗稱低溫草菇、谷樁菌，隸屬擔(dān)子菌綱(Basidiomycetes)、傘菌目(Agaricales)、光柄菇科(Pluteaceae)、包腳菇(Volvariella)屬，是草菇屬中目前發(fā)現(xiàn)的唯一低溫型品種，其口感及外觀和同屬著名品種草菇(Volariellavolvacea)較為相似,但該菇子實體形成溫度在15 ℃左右,與喜高溫高濕環(huán)境的草菇有明顯區(qū)別。冬小包腳菇的發(fā)現(xiàn)填補(bǔ)了現(xiàn)有草菇屬均為中高溫型的缺陷，對草菇種群理論、生物遺傳學(xué)理論等的研究具有重要的科學(xué)意義，且對彌補(bǔ)草菇冬季市場具有重要意義。目前，冬小包僅在貴州省有分布報道，是貴州特有食用菌品種。冬小包腳菇其菇肉細(xì)嫩、味道鮮美、營養(yǎng)豐富，富含多種氨基酸及無機(jī)元素，具有很好的開發(fā)利用價值。野生冬小包腳菇在貴州發(fā)生于每年低溫季節(jié)11月份至翌年4月份，在收割水稻后，生長于種植小麥、油菜、蠶豆、馬鈴薯、豌豆等作物地里[1～3]。有關(guān)冬小包腳菇的研究，雖然前人進(jìn)行了一些探索，但主要集中在形態(tài)特征、野外生境、營養(yǎng)成分及栽培等方面[4～11]，有關(guān)培養(yǎng)基配方對冬小包腳菇菌絲生長的影響還未見報道。食用菌的培養(yǎng)基是保藏菌種的關(guān)鍵，同時也是生產(chǎn)上獲得高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)的重要前提[12～14]。目前，食用菌常使用的培養(yǎng)基主要為土豆葡萄糖培養(yǎng)基(PDA培養(yǎng)基)，同時也存在其他少數(shù)類型的培養(yǎng)基，例如用胡蘿卜、玉米、大米、小麥、黃豆芽等制作的培養(yǎng)基[15～21]，由于不同培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分和理化性質(zhì)存在一定差異，對食用菌菌絲生長影響也不盡相同[22～25]。因此，為了有效地開發(fā)利用冬小包腳菇，筆者在前人的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了冬小包腳菇菌絲培養(yǎng)基篩選試驗，探討了不同的培養(yǎng)基對冬小包腳菇菌絲生長的影響，旨在篩選出最適宜培養(yǎng)基，為冬小包腳菇人工規(guī)?；耘嗟於ɡ碚摶A(chǔ)，助推貴州特色冬小包腳菇產(chǎn)業(yè)規(guī)?；l(fā)展,填補(bǔ)我國草菇的冬季市場。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 冬小包腳菇

野生冬小包腳菇子實體采集于貴州省龍里縣油菜、小麥、蠶豆、豌豆、馬鈴薯等作物地里，經(jīng)組織分離、純化、培養(yǎng)獲得冬小包腳菇菌種，現(xiàn)保存于貴州省山地資源研究所實驗室。菌種轉(zhuǎn)接到PDA培養(yǎng)基上，活化后使用。

菌種活化：制備冬小包腳菇活化培養(yǎng)基平板數(shù)個,無菌環(huán)境下將試管母種接種到冬小包腳菇PDA培養(yǎng)基上,15 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20 d左右。

2.1.2 培養(yǎng)基

(1)胡蘿卜培養(yǎng)基：稱取 200 g 去皮胡蘿卜，切片，加水 1 L 煮熟，紗布過濾，再加 20 g 葡萄糖、20 g 瓊脂粉和水定容至 1 L，攪拌溶解后分裝至錐形瓶，120 ℃，0.13 kPa高溫高壓滅菌30 min左右，待其冷卻后在無菌環(huán)境下轉(zhuǎn)移至直徑為9cm 的培養(yǎng)皿中備用。

(2)土豆培養(yǎng)基：稱取 200 g 去皮土豆，切片，加水 1 L 煮熟，紗布過濾，再加 20 g 葡萄糖、20 g 瓊脂粉和水定容至 1 L，攪拌溶解后分裝至錐形瓶，120 ℃，0.13 kPa高溫高壓滅菌30 min左右，待其冷卻后在無菌環(huán)境下轉(zhuǎn)移至直徑為9 cm 的培養(yǎng)皿中備用。

(3)大米培養(yǎng)基：稱取 200 g 大米，加水 1 L 煮熟，紗布過濾，再加 20 g 葡萄糖、20 g瓊脂粉和水定容至 1 L，攪拌溶解后分裝至錐形瓶，120 ℃，0.13 kPa高溫高壓滅菌30 min左右，待其冷卻后在無菌環(huán)境下轉(zhuǎn)移至直徑為9 cm 的培養(yǎng)皿中備用。

(4)玉米培養(yǎng)基：稱取 50 g 玉米粉，加水 1 L 煮熟，紗布過濾，再加 20 g 葡萄糖、20 g瓊脂粉和水定容至 1 L，攪拌溶解后分裝至錐形瓶，120 ℃，0.13 kPa高溫高壓滅菌30 min左右，待其冷卻后在無菌環(huán)境下轉(zhuǎn)移至直徑為9 cm 的培養(yǎng)皿中備用。

2.2 方法

培養(yǎng)方法：在超凈工作臺內(nèi)按無菌操作要求，將活化好的冬小包腳菇菌種分別接入胡蘿卜、土豆、玉米、大米四種培養(yǎng)基的中央，并做好標(biāo)記，用封口膜封好培養(yǎng)皿邊緣。平板接種后置于15 ℃的培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，每種處理3個重復(fù)。

觀察方法：觀察菌種生長情況，菌絲萌發(fā)8 d后每隔7 d進(jìn)行拍照記錄，對其菌落形態(tài)特征進(jìn)行宏觀觀察，同時采用劃線法測量菌落直徑，記錄菌絲生長情況，直至滿皿。菌絲生長速率：按菌絲生長速率=菌落平均直徑(mm)/培養(yǎng)時間(d)[26]，計算各菌株在供試培養(yǎng)基上的菌絲生長速度。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同培養(yǎng)基對冬小包腳菇菌落特征的影響

將活化好的冬小包腳菇菌種分別接入胡蘿卜、土豆、玉米、大米4種培養(yǎng)基上，在15 ℃黑暗條件下進(jìn)行培養(yǎng)，菌絲萌發(fā)8 d后每隔7 d定時觀察菌絲的生長形態(tài)，記錄菌絲顏色、菌絲致密程度、分布情況、老化變黑程度以及滿皿天數(shù)，并進(jìn)行拍照記錄，結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，冬小包腳菇菌絲在胡蘿卜、土豆、大米和玉米4種培養(yǎng)基上均能正常生長，說明4種培養(yǎng)基都能基本保障冬小包腳菇菌絲的生長所需，但菌落形態(tài)及生長速度存在差異。其具體不同生長階段形態(tài)特征見表1。

圖1 冬小包腳菇菌絲在不同培養(yǎng)基上的菌落特征

表1 冬小包腳菇菌絲不同生長階段形態(tài)特征

冬小包腳菇菌絲在胡蘿卜培養(yǎng)基上菌落比較濃密厚實，但分布不太均勻，菌絲顏色呈濃白色，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，菌落在不斷向外延伸擴(kuò)大，與此同時菌絲中部有逐漸老化變黑現(xiàn)象；在土豆培養(yǎng)基上菌落濃密厚實，分布均勻，菌絲顏色呈濃白色，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，菌落在不斷向外延伸擴(kuò)大，直至36 d時菌絲老化；在大米培養(yǎng)基上菌落稀疏單薄，分布均勻，菌絲顏色呈潔白色，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，菌落在不斷向外延伸擴(kuò)大，直至36 d滿皿；在玉米培養(yǎng)基上菌落稀疏單薄，分布均勻，菌絲顏色呈白色，隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，菌落在不斷向外延伸擴(kuò)大，直至29 d滿皿，與此同時菌絲中部伴有逐漸老化變黑現(xiàn)象。

對比可以發(fā)現(xiàn)，在相同的培養(yǎng)條件下，冬小包腳菇菌絲在不同的培養(yǎng)基上生長速度不一，所以菌株長滿平皿的時間也不盡相同，胡蘿卜和土豆培養(yǎng)基上菌絲濃白，菌落相對比較濃密厚實，但分布不太均勻，菌絲體直徑小，生長速度較慢；在大米和玉米培養(yǎng)基上菌落稀疏單薄，分布均勻，菌絲體直徑大，生長速度較快，菌絲顏色呈潔白色，此外隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，胡蘿卜和玉米培養(yǎng)基上菌絲老化變黑程度較為嚴(yán)重。因此，從菌絲生長的整體水平來看，在大米培養(yǎng)基上菌絲生長效果最好，菌落分布均勻，生長速度較快，而且不容易老化，有利于冬小包腳菇菌絲的生長。

3.2 不同培養(yǎng)基對冬小包腳菇菌絲生長速率的影響

在不同培養(yǎng)基上，相同培養(yǎng)條件下，冬小包腳菇的生長速度略有差異。菌絲萌發(fā)8 d后采用劃線法每隔7 d定時測量菌落直徑，按菌絲生長速率=菌落平均直徑(mm)/培養(yǎng)時間(d)，計算出各菌株在供試培養(yǎng)基上的菌絲生長速度，最終計算得出其平均生長速度，結(jié)果如表2所示。由表可知，在胡蘿卜、土豆、大米和玉米培養(yǎng)基上菌絲平均生長速度分別為0.24 cm/d、0.26 cm/d，0.27 cm/d、0.32 cm/d，其中菌絲生長速度較快的是玉米培養(yǎng)基，其次是大米、土豆培養(yǎng)基，胡蘿卜培養(yǎng)基上菌絲生長速度相對較為緩慢。冬小包腳菇菌絲在29 d、36 d時分別在玉米和大米培養(yǎng)基上達(dá)到滿皿，菌絲生長長度達(dá)到9 cm，而在胡蘿卜和土豆培養(yǎng)基上36 d時仍一直沒有達(dá)到滿皿。

表2 冬小包腳菇菌絲在不同培養(yǎng)基上的菌絲生長速度

4 討論與結(jié)論

不同培養(yǎng)基對冬小包腳菇菌絲的生長有一定的作用，由于不同培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分和理化性質(zhì)存在一定差異，對冬小包腳菇菌絲生長影響也不盡相同。研究結(jié)果表明：冬小包腳菇菌絲在不同的培養(yǎng)基上冬小包腳菇菌絲均能正常生長，說明4種培養(yǎng)基都能基本保障冬小包腳菇菌絲的生長所需，但菌落形態(tài)及生長速度存在差異。在胡蘿卜和土豆培養(yǎng)基上冬小包腳菇菌絲濃白，菌落相對比較濃密厚實，但分布不太均勻，菌絲體直徑小，生長速度較為緩慢；在大米和玉米培養(yǎng)基上冬小包腳菇菌落稀疏單薄，分布均勻，菌絲體直徑大，生長速度較快，菌絲顏色呈潔白色，此外隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加，胡蘿卜和玉米培養(yǎng)基上冬小包腳菇菌絲老化變黑程度較為嚴(yán)重?？偟膩碚f，在大米培養(yǎng)基上冬小包腳菇菌絲生長效果最好，菌落分布均

勻，生長速度較快，而且不容易老化，有利于冬小包腳

菇菌絲的生長。