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        貴州地區(qū)581 例男性人乳頭瘤病毒疑似患者感染狀況及基因型別分析

        2022-12-21 12:26:40耿見忠
        中國當(dāng)代醫(yī)藥 2022年32期
        關(guān)鍵詞:同年齡組尖銳濕疣年齡組

        耿見忠

        貴州安康醫(yī)學(xué)檢驗中心,貴州貴陽 550016

        人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)屬乳頭瘤病毒科,是一種通過直接或間接接觸污染物品或性傳播感染的人類雙鏈脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)病毒,不但具有宿主特異性,且具有組織特異性,能通過感染人類的皮膚及黏膜上皮細(xì)胞,引起人類皮膚的各種乳頭狀瘤或疣和生殖道上皮增生性損傷。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有一百多種基因型[1],其中感染人類生殖道及肛門的人乳頭瘤病毒可根據(jù)基因型別、致病力大小或致癌危險性大小分為低危型HPV 和高危型HPV。持續(xù)性的高危型HPV 感染是男性和女性感染相關(guān)癌癥的主要原因[2]。低危型HPV 感染與尖銳濕疣或低度鱗狀上皮內(nèi)病變等良性病變相關(guān)[3]。由于HPV 與宮頸癌的相關(guān)性,關(guān)于HPV 感染與女性生殖疾病的關(guān)系有大量報道,而針對男性HPV 感染流行情況的關(guān)注較少。大多數(shù)HPV 感染患者無臨床癥狀或表現(xiàn)為亞臨床感染狀態(tài),男性成為HPV 重要的傳染源。本研究回顧性分析581 例男性的HPV 基因分型,為貴州地區(qū)男性預(yù)防治療HPV 感染及分析其亞型分布情況提供科學(xué)依據(jù),也為國內(nèi)HPV 疫苗研制提供數(shù)據(jù)。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        收集2016 年1 月至2020 年4 月送檢至貴州安康醫(yī)學(xué)檢驗中心的581 例疑似尖銳濕疣男性患者樣本,患者來自貴州省不同地區(qū)的48 家醫(yī)院性或皮膚門診等科室,按照不同年齡分為五組:年齡<21 歲61例(10.50%),21~<31 歲247 例(42.51%),31~<41 歲154 例(26.51%),41~<51 歲84 例(14.46%),≥51歲35 例(6.02%)。所有送檢樣本均由臨床醫(yī)生采集,患者自愿接受HPV23 分型檢測,未排除女方因素所引起的HPV 感染。本研究經(jīng)貴州安康醫(yī)學(xué)檢驗中心倫理委員會審核批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號:[2021]L001)。

        1.2 儀器和試劑

        Hema9600 基因擴(kuò)增儀由珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司提供;亞能生物技術(shù)(深圳)有限公司提供的人乳頭瘤病毒基因分型(23 型)檢測試劑盒,該試劑盒同時檢測23 種HPV 亞型,包括18 種高危型:16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83;5 種低危型:6、11、42、43、81。

        1.3 方法

        1.3.1 HPV DNA 提取 充分?jǐn)噭訑D壓宮頸刷,將宮頸刷上的脫落細(xì)胞洗脫下來,然后將1 ml 含有脫落細(xì)胞的保存液轉(zhuǎn)移到1.5 ml 離心管中。以轉(zhuǎn)速13 000 r/min、離心半徑8.5 cm 離心10 min。棄上清,保留管底細(xì)胞,加入50 μl 裂解液懸浮沉淀,沸水浴加熱10 min 后,取出離心管,置于高速離心機(jī)中以轉(zhuǎn)速13 000 r/min、離心半徑8.5 cm 離心10 min,上清即為標(biāo)本DNA 溶液。

        1.3.2 HPV DNA 擴(kuò)增及雜交 取DNA 提取物上清液5 μl,陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品同步處理,反應(yīng)總體系為25 μl。PCR 反應(yīng)條件:50℃15 min;95℃10 min;94℃30 s,42℃90 s,72℃30 s,共40 個循環(huán);最后72℃延伸5 min。擴(kuò)增完成后95℃變性10 min,將變性產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至全自動核酸分子雜交儀上進(jìn)行雜交、孵育和顯色。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

        采用SPSS 20.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料用率()表示,多組間比較采用χ2檢驗或Fisher 精確概率法,以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義,組間兩兩比較以P<0.005 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 HPV 檢測結(jié)果

        581 例送檢樣本中有445 例HPV 陽性,總感染陽性率為76.59%(445/581),其中單一低危型HPV 感染陽性率為23.41%(136/581);單一高危型HPV 感染陽性率為6.37%(37/581);高危低危混合型HPV 同時感染陽性率39.59%(230/581),占整個檢出陽性樣本的51.69%。低危型HPV 多重感染陽性率和高危型HPV多重感染陽性率分別3.44%(20/581)、3.79%(32/581)(表1)。

        表1 HPV 感染分布情況

        2.2 HPV 感染的基因亞型分析

        445 例感染者23 種HPV 亞型均被檢出,檢出率前五位HPV 亞型依次是HPV6 亞型33.91%(197/581)、HPV11 亞型32.53%(189/581)、HPV52 亞型12.91%(75/581)、HPV16 亞型10.84%(63/581)、HPV55 亞型9.47%(55/581)(表2)。

        表2 23 種HPV 亞型檢出分布情況

        2.3 不同年齡組HPV 亞型感染情況

        不同年齡組的單一感染陽性率、混合感染陽性率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);<21 歲年齡組的單一感染陽性率低于21~<31 歲年齡組、31~<41歲年齡組,混合感染陽性率高于31~<41 歲年齡組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.005)。不同年齡組的HPV 感染陽性率、低危感染陽性率及高危感染陽性率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表3)。

        表3 不同年齡組HPV 感染類型分布情況[n(%)]

        2.4 不同年齡組主要HPV 亞型分布情況

        不同年齡組的HPV11 型、HPV16 型感染陽性率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);各年齡組的HPV16 型感染陽性率兩兩比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.005),其中<21 歲年齡組和31~<41 歲年齡組及41~<51 歲年齡組的HPV16 型感染陽性率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.683、7.410,P=0.006、0.006);21~<31 歲年齡組的HPV11 型感染陽性率高于31~<41 歲年齡組及41~<51歲年齡組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.005)。各年齡段的HPV6 型感染陽性率、HPV52 型感染患者陽性率及HPV81 型感染陽性率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表4)。

        表4 不同年齡組主要HPV 亞型分布情況[n(%)]

        3 討論

        男性HPV 感染除引起尖銳濕疣外,還可引起男性泌尿系統(tǒng)及其他系統(tǒng)腫瘤,如部分口腔癌及肛門癌、陰莖癌等[4]。有文獻(xiàn)報道男性HPV 感染可影響男性精液質(zhì)量,導(dǎo)致男性特發(fā)性不育等[5]。由于不同人群和地域HPV 感染分布比較復(fù)雜,本研究采用PCR 擴(kuò)增及反向斑點雜交技術(shù)進(jìn)行HPV23 基因分型檢測,其中檢測18 種高危型分別為HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、82,5種低危型HPV6、11、42、43、81,對貴州省581 例男性疑似尖銳濕疣患者皮損拭子或組織進(jìn)行基因分型檢測和分析。

        本研究中,581 例男性患者HPV 陽性檢出率為76.59%(445/581),與黃澤棋等[6]報道佛山地區(qū)陽性率77.6%(388/500)基本一致,高于張永樂等[7]報道浙江地區(qū)陽性率39.18%(228/582)、姜玲波等[8]報道山東省地區(qū)57.3%(1621/2 830)及袁利群等[9]湖南長沙地區(qū)23.23%(115/495)。HPV 陽性檢出率在不同地域存在差異性,主要原因可能與不同的樣本類型有關(guān),另外本研究只檢測常見的23 種亞型,而HPV 亞型數(shù)量有100 多種,取材樣本量少、未能取到足夠量的樣本等均可導(dǎo)致地域分布差異。對445 例陽性患者的感染類型進(jìn)行分析,感染類型以低高危型混合感染檢出為主,感染陽性率為39.59%(230/581),略低于戴永剛等[10]報道的單一感染43.33%(116/269),與張永樂等[7]報道的8.61%(50/582)、程連娜等[11]報道的5.33%(13/244)有較大差異。單一感染(包括單一低危型和單一高危型)感染陽性率為29.78%,與程連娜等[11]報道的31.15%(76/244)基本一致,低于鐘文英等[12]報道的62.46%(441/706),提示貴州地區(qū)男性HPV 感主要混合感染為主,建議同時檢測高危型和低危型,減少漏檢。

        貴州地區(qū)男性HPV 檢出率較高的7 種HPV 亞型分別是HPV 6、11、52、16、81、59、42 型,與國內(nèi)其他地區(qū)[7,13-14]報道的男性感染率較高的7 種HPV 亞型不一致,對HPV 感染各亞型進(jìn)行分析,其中低危型依次為:HPV6 型、HPV11 型、HPV81 型。其中HPV6/11 陽性率為66.44%(386/581),高于張永樂等[7]報道的23.02%(138/582);低于余雪姣等[15]關(guān)于衢州地域男性尖銳濕疣患者的HPV6/11 陽性率81.09%(459/566),雖然不同地區(qū)之間陽性率有差異,但男性HPV 感染亞型均以HPV6 和HPV11 感染為主。高危HPV 分別為HPV16型、HPV52 型、HPV59 型。高危型與貴州地區(qū)女性HPV感染亞型比較[16-17]分析,HPV16、52 型排名一致,提示男性HPV 感染與女性感染存在一定關(guān)聯(lián),但由于本研究未排除女方因素所引起的HPV 感染,其關(guān)聯(lián)性及感染因素有待進(jìn)一步研究。據(jù)報道四價疫苗(HPV6/11/16/18 型)可預(yù)防90%的外陰部尖銳濕疣[18]。九價疫苗(HPVV6/11/16/18/31/33/45/52/58)早在2016年納入美國國家免疫規(guī)劃,能減少女性宮頸癌發(fā)病率90%以上[19],男性接種疫苗可以進(jìn)一步阻斷HPV 的傳播。但國內(nèi)對男性HPV 疫苗關(guān)注較少,本研究為男性HPV 感染提供流行病材料。

        本研究中按照5 個年齡段進(jìn)行統(tǒng)計分析,各年齡段的HPV 感染陽性率比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但是21~<41 歲的感染率略高于其他年齡段,與國內(nèi)報道[4,6-7,20-22]基本一致,與該年齡段性活躍、機(jī)體免疫狀態(tài)等因素有關(guān)[23]。各年齡段單一感染和混合感染陽性率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其中<21 歲年齡組的混合感染陽性率(38/61)最高,提示低年齡組更容易發(fā)生混合感染。對各年齡段主要HPV 亞型分布情況進(jìn)行分析,各年齡段的HPV11 型及HPV16 型感染陽性率比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),其中<20 歲和21~<31 歲年齡組高于其他年齡組,提示低年齡段更容易感染HPV11 型及HPV16 型,其原因有待進(jìn)一步研究。

        綜上所述,貴州地區(qū)男性疑似尖銳濕疣患者HPV 感染以低危感染為主,以多重感染和單一低危感染為主要感染類型;HPV 感染主要以低危6、11 型為主,高危HPV 以52、16 和59 型為主。本研究分析本地區(qū)男性HPV 感染狀況及基因分型,加強(qiáng)本地區(qū)HPV 的篩查工作,為HPV 疫苗提供一定流行病學(xué)依據(jù),為男性自身相關(guān)疾病的防治提供指導(dǎo)性意義。

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