朱曉

（江蘇省邳州市疾病預防控制中心 檢驗科,江蘇 邳州 221300）

0 引言

食物中毒指食入帶有致病菌的食物, 或經某一途徑導致致病菌進入口腔, 引起機體的中毒反應[1]。該病是食源性疾病中最常見的一種, 具有明顯的人群廣泛性特點[2]。統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示, 近些年我國食品安全問題頻頻發(fā)生, 導致食物中毒事件的發(fā)生率隨之升高, 引起了社會的高度重視, 也成為了一種主要的社會問題[3]。該病的潛伏期短, 發(fā)病急促, 短時間內可能出現(xiàn)多個患者同時發(fā)病, 患者病后也常在短時間內出現(xiàn)明顯的惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛、暈厥等癥狀, 嚴重者會出現(xiàn)脫水, 若不積極治療, 還可能引起更嚴重的并發(fā)癥, 繼而危及生命安全[4-5]。食物中毒根據(jù)病原物質的差異, 可分為細菌性與非細菌性兩類, 以前者更為多見；二者相比, 細菌性食物中毒的病程更短, 恢復更快, 預后更好[6]。而對于細菌性食物中毒患者的治療, 找準病原菌是準確制定治療方案的基本前提[7]。病原學微生物檢驗可通過微生物檢驗技術, 對細菌性食物中毒性質進行查驗, 能夠及時找到確切的致病菌種, 且有助于了解生物性有害物質的食品種類與污染狀況, 可為疾控中心及早防控措施提供參考依據(jù)[8]。基于此, 本研究為了進一步探討細菌性食物中毒患者病原學情況及微生物檢驗效果, 就邳州市疾控中心由于細菌性食物中毒的60例患者的檢驗結果進行分析, 報道如下：

1 資料與方法

1.1 基本資料

選取2020年1月至2021年12月邳州市疾控中心由于細菌性食物中毒的60例患者作為研究案例, 其中男33例, 女27例；年齡18～59歲, 平均（33.62±7.23）歲；病程4～68h, 平均（27.23±10.11）；體質指數(shù)18～26kg/m2, 平均（22.15±1.36）kg/m2；食物類型：畜肉類與其制品23例, 蛋類19例, 奶類及其制品11例, 其他7例。

1.2 納入標準與排除標準

納入標準：（1）案例信息完整；（2）年齡18～59歲；（3）經相關檢查證實, 滿足細菌性食物中毒的診斷規(guī)定, 出現(xiàn)一定程度的惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛、暈厥等癥狀；（4）清醒, 配合采樣；（5）本研究符合倫理要求, 并獲得單位批準?；颊呒凹覍賹ρ芯恐榍彝狻?/p>

排除標準：（1）免疫缺陷疾??；（2）血液系統(tǒng)疾?。唬?）惡性腫瘤；（4）意識不清；（5）精神疾病、認知功能障礙；（6）孕產婦；（7）不愿意采樣。

1.3 方法

1.3.1 樣本來源

對所有患者進行檢驗和分析, 包括患者的糞便、嘔吐物、肛拭子、手拭子、食品、食品操作間（刀具、砧板、餐具等）的檢驗。由醫(yī)院專業(yè)的醫(yī)護人員采集樣本, 嚴格遵照《食品安全國家標準食品微生物檢驗標準匯編GB4789系列》《臨床微生物檢驗標準化操作》的有關規(guī)定執(zhí)行。樣本采集后置于無菌、陰涼干燥的環(huán)境下進行儲存, 盡快送至本疾控預防中心進行檢驗。

1.3.2 儀器與試劑

主要儀器：保溫箱、冰箱、恒溫水浴箱、電子天平、菌落計數(shù)器、PCR（熒光定量聚合酶鏈式反應）儀、顯微鏡、SC（亞硝酸鹽胱氨酸增菌液）, 20E、HE（瓊脂）平板、MMA（甲基丙烯酸甲酯）平板、兔血漿平板等。

主要試劑：3%的H2O2（過氧化氫）, 動力硝酸鹽培養(yǎng)基, 乳糖膽鹽發(fā)酵管, 緩沖葡糖糖蛋白陳水, 肉湯培養(yǎng)基, 瓊脂培養(yǎng)基等。

1.3.3 檢驗方法

參照相關按照標準, 對樣本進行大腸埃希菌、蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌、志賀菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、沙門菌等的檢驗, 測定菌落群數(shù)、菌群數(shù)量。將樣本置于大小適宜的漿罐內, 添加酸堿值為7的無菌氯化鈉溶液, 充分混勻無菌氯化鈉溶液及樣本, 使用勻漿儀、嚴格遵照無菌操作原則執(zhí)行?；旌弦杭尤胫?5℃的培養(yǎng)基內。采取倒置法進行培養(yǎng), 3d后于高倍顯微鏡下觀察樣本中的細菌。檢驗過程實施嚴格的質量控制, 確保檢驗操作規(guī)范。檢驗結果根據(jù)患者的就餐史、飲食情況以及細菌性食物中毒的常發(fā)季節(jié)進行綜合性分析。

1.4 觀察指標

（1）分析樣本采集情況：（2）觀察統(tǒng)計檢出的病原菌情況, 包括大腸埃希菌、蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌、志賀菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、沙門菌；（3）分析血清型（大腸埃希菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、沙門菌）的分布情況。

1.5 數(shù)據(jù)分析

應用SPSS 22.0軟件, 計數(shù)資料以%表示, 行χ2檢驗, P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 樣本采集情況

共采集9 0份樣本, 其中糞便樣本4 2份（46.67%）, 嘔吐物5份（5.56%）, 肛拭子22份（24.44%）, 手拭子16份（17.78%）, 食品3份（3.33%）, 食品操作間2份（2.22%）。

2.2 檢出的病原菌情況

90例患者中, 致病菌的檢出率為53.33%（48/90）, 其中糞便、嘔吐物、肛拭子、手拭子、食品、食品操作間的檢出率依次為73.81%、60.00%、45.45%、12.50%、33.33%、50.00%；以糞便中的致病菌檢出率最高, 對比其他樣本的檢出率, 差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。致病菌中, 構成比從高到低依次為副溶血性弧菌（18.89%）、沙門菌（13.33%）、大腸埃希菌（11.11%）、蠟樣芽胞桿菌（4.44%）、變形桿菌（3.33%）、志賀菌/金黃色葡萄球菌（1.11%）；副溶血性弧菌的構成比明顯高于其他致病菌的構成比, 差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 檢出的病原菌情況[n(%)]

2.3 血清型的分布情況

對17株副溶血性弧菌、12株沙門菌、10株大腸埃希菌、1株金黃色葡萄球菌進行分離, 根據(jù)血清學檢查結果分析型的分布情況, 結果顯示, 副溶血性弧菌中O4：K8 型1株, O3：K6 型有13株, 其他3株；沙門菌中鼠傷寒沙門菌3株, 腸炎沙門菌9株；大腸埃希菌中侵襲性大腸細菌2株, 產毒性大腸埃希菌3株, 致病性大腸桿菌5株；金黃色葡萄球菌為A型。見表2。

表2 血清型的分布情況[n(%)]

3 討論

食品安全關乎國民健康, 也與國家的長治久安息息相關。盡管我國的食品安全水平逐漸提升, 但食物中毒事件依然時常發(fā)生。因此食品安全問題仍然是我國的社會問題, 需要引起全社會的關注與監(jiān)督。細菌性食物中毒不但和食物的生產、保存、運輸?shù)拳h(huán)節(jié)有關, 也和患者的飲食方式、結構及衛(wèi)生有關。細菌性食物中毒一年四季都可發(fā)生, 但秋季最為高發(fā), 原因與夏季溫度升高, 食物易變質, 秋季食入這些變質食物則可能引起食物中毒。細菌性食物中毒的食物來源一般是餐飲業(yè), 占比高達40%以上, 其后是家庭自制、街頭食物, 其中肉類、海鮮類食物最易造成食物中毒。細菌性食物中毒嚴重時會危及生命安全, 一旦發(fā)生, 應立刻送醫(yī)救治。對于表現(xiàn)輕微的惡心、嘔吐、腹瀉患者而言, 一般予以基礎對癥治療；對于癥狀嚴重, 出現(xiàn)中毒、水電解質紊亂、嚴重脫水者, 應及時進行鑒別診斷[9]。臨床實踐也證實, 在采取治療措施前, 準確的診斷是基本前提[10]。微生物檢驗是“醫(yī)生的醫(yī)生”, 可為臨床各種病菌性疾病的診治提供指導, 能夠在一定程度上提升診斷率, 減少漏診、誤診, 讓患者得到及時、正確的治療。微生物檢驗能夠為食物中毒診斷提供重要的參考依據(jù), 對治療方案的制定也有指導作用。微生物檢驗還能夠明確病原菌, 找到引起食物中毒的具體原因, 且能更全面的掌握疾病的發(fā)生規(guī)律, 有助于病情的有效控制, 繼而改善患者預后[11]。微生物檢驗同時具有操作簡單、經濟實用的特點, 采集較多的具有針對性的樣本后, 在嚴格質控的情況下進行檢驗, 可獲得較高的準確率。

微生物檢驗的主要流程包括采集樣本、觀察并培養(yǎng)樣本菌落, 再觀察其發(fā)展過程。微生物檢驗可檢出多種致病菌種, 并能明確菌群的種類、數(shù)目。在樣本的采集中, 應盡可能多的采集樣本, 任何可能性的樣本均不可放過, 如患者的嘔吐物、食物、糞便、肛拭子等, 多樣本檢驗能夠起到聯(lián)合診斷的目的, 因為可為臨床診斷提供更詳細的參考依據(jù)[12]。本研究對患者采集糞便、嘔吐物、肛拭子、手拭子、食品、食品操作間（刀具、砧板、餐具等）樣本進行檢驗, 結果顯示, 糞便的致病菌檢出率（73.81%）最高, 其后依次是嘔吐物、肛拭子、手拭子、食品、食品操作間, 因此臨床上針對細菌性食物中毒的微生物檢驗, 應優(yōu)先采集糞便, 配合嘔吐物、肛拭子的檢驗結果以明確診斷。值得一提的是, 對于嘔吐物的檢驗, 可能會存在患者將食物全部吞咽或食物已受污染的情況, 這會大大降低檢驗結果的準確性[13]。致病菌種中, 當前認為副溶血性弧菌、沙門菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄是細菌性食物中毒的主要致病菌, 且不同致病菌感染患者的臨床癥狀存在一定的差異[14]。本研究結果顯示, 副溶血性弧菌是造成細菌性食物中毒最常見的病菌, 其構成比為18.89%, 明顯高于沙門菌、大腸埃希菌、蠟樣芽胞桿菌、變形桿菌、志賀菌/金黃色葡萄球菌, 提示副溶血性弧菌是造成細菌性食物中毒的高危菌種, 應加強其監(jiān)測。從血清學檢查結果分析發(fā)現(xiàn), 副溶血性弧菌以O3：K6 型最常見, 占比76.47%, 沙門菌以腸炎沙門菌（75.00%）多見, 大腸埃希菌以致病性大腸桿菌（50.00%）最多見。

細菌性食物中毒的危害性大, 會對患者的身心健康構成不良影響, 應積極防治?？偨Y相關文獻, 認為應從如下幾方面做起：（1）對細菌性食物中毒患者及時進行微生物檢驗, 快速找出病原菌。進行微生物檢驗樣本的采集時, 應做到“全面”和“量多”, 盡量將檢驗范圍覆蓋到全部可能引發(fā)細菌性食物中毒的病菌感染源。標本采集后應盡快送檢, 無法立即送檢時, 并根據(jù)規(guī)范要求妥善儲存。從檢驗前的準備到檢驗結果分析, 形成一套滿足臨床實踐的質控管理制度, 以提高檢驗結果的準確性, 且應嚴格按照相關規(guī)定進行檢驗, 做好操作流程、環(huán)節(jié)的質控, 以避免檢驗結果的誤差[15]；（2）副溶血性弧菌是造成細菌性食物中毒的高危菌種, 應加強食物加工質量方面的宣教工作, 盡量不食入大量的生冷食物與海鮮食品。近幾年因大腸埃希菌感染引起的細菌性食物中毒也較常見, 應強化對食品經營機構的衛(wèi)生管控, 制定完善的整治、管理制度, 一旦發(fā)現(xiàn)衛(wèi)生不合格、質量不過關, 應讓其在限期內做好整頓, 整頓后再次檢查, 合格后方可重新營業(yè)。

綜上所述, 對較多的樣品進行有針對性的微生物檢驗, 有助于對細菌性食物中毒患者病原菌種類和血清型的判斷, 能夠提高污染源控制效果；因此需要積極對微生物進行檢驗。