唐國超，張 軼，金庭輝，齊亞銀，王晨豫，魏 勇

1 沙灣天潤生物有限責(zé)任公司，新疆沙灣832100 2 新疆天澳牧業(yè)有限公司，新疆奎屯 833200 3 石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子 832000

0 引言

產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種革蘭氏陽性厭氧菌，普遍存在于不同環(huán)境中，屬于條件致病菌，在一定條件下可引起家畜和人類腸道疾病，嚴(yán)重威脅畜牧業(yè)健康發(fā)展和人類食品安全[1]。產(chǎn)氣莢膜梭菌具有7 種毒素型（A、B、C、D、E、F和G），產(chǎn)生6 種主要毒素，即α、β、ε、ι、CPE和NetB[2]，主要影響反芻動(dòng)物。該病的初步診斷可以根據(jù)臨床病史、臨床體征以及肉眼和顯微鏡下的變化來確定，但進(jìn)一步確診需要細(xì)菌的分離鑒定及分型。近年來，隨著抗生素殘留奶飼喂?fàn)倥Ｒ约皵嗄虪倥Ｈ巷曃鼓Ｊ降耐茝V，導(dǎo)致犢牛梭菌病的發(fā)病率逐漸增加[4，5]，由于其發(fā)病快、死亡率高，不僅給獸醫(yī)臨床治療帶來了很大困難，而且給食品安全帶來了嚴(yán)重的威脅[6，7]。

2022年7月下旬，新疆塔城地區(qū)某規(guī)?；翀龅臓倥Ｈ撼霈F(xiàn)疑似產(chǎn)氣莢膜梭菌的感染，發(fā)病率高、死亡快，造成了較大的經(jīng)濟(jì)損失。為了查明發(fā)病原因，本試驗(yàn)采用現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查、病理剖檢以及實(shí)驗(yàn)室的組織涂片、染色鏡檢等方法，對本次病例進(jìn)行確診，并建立了綜合防控方案，有效的控制了該次疫病的蔓延。

1 材料

1.1 牧場情況

本次試驗(yàn)所采樣牧場為現(xiàn)代規(guī)?；翀?，共舍飼荷斯坦牛共計(jì)3000 頭左右。本次發(fā)病牛群均為6～12月齡育成期公牛，牧場人員使用泌乳牛剩料、窖儲(chǔ)對該牛群進(jìn)行飼喂，每天1～2 次。

1.2 儀器設(shè)備和試劑

超凈工作臺，上海鴻都電子科技有限公司；4 ℃冰箱、-20 ℃冰箱，海信容聲冰箱有限公司；移液器，英國Bibby科技有限公司；光學(xué)顯微鏡，日本OLYMPU公司。

革蘭氏染液、瑞氏染色液，杭州微生物試劑有限公司；松柏油，深圳市奧斯微光學(xué)儀器有限公司；齊佳康疫苗，北京生泰爾科技有限公司；元吉消毒液，廣東瑞吉生物科技有限公司；克洛生，美國建明公司。

2 方法

2.1 現(xiàn)場診斷

現(xiàn)場與管理人員溝通，了解牛群發(fā)病史、發(fā)病年齡、發(fā)病特點(diǎn)、往年發(fā)病率和發(fā)病季節(jié)；檢查牛群環(huán)境情況，包括環(huán)境清潔程度、空氣質(zhì)量、溫度、病牛隔離情況等；觀察感染牛群的癥狀，包括精神狀態(tài)、體溫、食欲等，跟進(jìn)治療情況和效果，并做好記錄；解剖病死牛，觀察內(nèi)臟病理變化情況，并采集組織、器官樣本。

2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

病死牛組織、臟器使用瑞氏染色；剩料進(jìn)行革蘭氏染色，在顯微鏡下（10×100倍）觀察。

3 結(jié)果

3.1 現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果

發(fā)病牛群為6～12月齡的荷斯坦育成公牛。發(fā)病季節(jié)在7月下旬，環(huán)境氣溫在24～38 ℃，該圈舍為簡易圍欄沒有遮陽棚設(shè)施，主要飼喂成母牛剩余的飼草料、秸稈等。發(fā)病率為16.35%（34/208），病死率為11.76%（4/34），最后淘汰無治療價(jià)值犢牛30 頭。結(jié)果見表1。

表1 牛群發(fā)病情況

3.2 臨診及剖檢結(jié)果

發(fā)病牛群初期具有輕微臨床癥狀，表現(xiàn)為流涎，流淚，結(jié)膜潮紅，體溫略有升高（39.5～40.0 ℃）；發(fā)病中期具有明顯的臨床癥狀，表現(xiàn)為步態(tài)不穩(wěn)，兩后肢或其中一肢行走困難，有可見的后肢皮下氣腫，觸診有捻發(fā)音，見圖1；發(fā)病后期表現(xiàn)為臥地不起，發(fā)病至死亡時(shí)間短3～10 h不等，見圖2。剖檢變化可見后腿部位皮下氣腫，局部肌肉溶解發(fā)黑，肺氣腫充血，肺泡潰瘍變化等。

圖1 病牛后肢皮下氣腫

圖2 病牛倒地不起

3.3 病死牛臟器鏡檢結(jié)果

將病死牛肝臟、肺臟、心臟、腸組織、腸道內(nèi)容物、腸系膜淋巴結(jié)等臟器進(jìn)行瑞氏染色鏡檢。鏡檢結(jié)果如圖3-8。鏡檢結(jié)果中均可觀察到革蘭氏染色陽性的粗大桿菌，兩端鈍圓，具有明顯的莢膜，為典型的產(chǎn)氣莢膜梭菌形態(tài)。

圖3 肝臟

圖4 肺臟

圖5 心臟

圖6 腸組織

圖7 腸道內(nèi)容物

圖8 腸系膜淋巴結(jié)

3.4 飼草料的涂片染色鏡檢結(jié)果

將牛群吃剩飼料中加入適量的超純水，充分混勻，取上清液涂在蓋玻片上進(jìn)行革蘭氏染色后鏡檢。鏡檢結(jié)果如圖9和圖10。在飼喂發(fā)病牛群的剩料中可觀察到疑似的菌株。

圖9 發(fā)病牛群剩料

圖10 窖儲(chǔ)

3.5 綜合防控

緊急免疫接種：對同群牛群進(jìn)行緊急免疫接種齊家康疫苗。

停喂剩草剩料：停止飼喂所有的剩草剩料，改為新鮮的TMR日糧。

加強(qiáng)消毒：所有運(yùn)動(dòng)場地面采用2%火堿噴灑消毒，采食通道采用過硫酸氫鉀噴灑，飲水采用元吉消毒。

治療：使用頭孢、青霉素400 萬/頭·次，肌內(nèi)注射，8 h一次，一天3 次，連續(xù)3 天，配合氟尼辛葡甲胺肌注，有一定的緩解。

添加劑拌料：對發(fā)病牛群日糧中添加克洛生，20 g/頭。連用1 周。

4 討論

產(chǎn)氣莢膜梭菌可引起家畜和人類腸道疾病，嚴(yán)重威脅畜牧業(yè)健康發(fā)展和人類食品安全。群體免疫是反芻動(dòng)物梭菌病的重要預(yù)防措施[8～10]。具有多重耐藥性的反芻動(dòng)物傳播的產(chǎn)氣莢膜梭菌分離株在中國新疆普遍存在，具有明顯的遺傳多樣性，新疆產(chǎn)氣莢膜梭菌反芻傳播菌株分為A型和D型[1]。本實(shí)驗(yàn)因病程緊急，還未進(jìn)行后續(xù)分型，只在鏡檢中觀察到不同形態(tài)的梭菌。此次治療過程中，使用大劑量抗生素，效果不理想，緊急免疫后動(dòng)物機(jī)體抗體效價(jià)達(dá)到具有保護(hù)力的水平需要一定時(shí)間。本次育成公牛發(fā)病原因初步懷疑和飼養(yǎng)密度過于擁擠，氣溫炎熱沒有遮陽防暑設(shè)施，飼喂剩草剩料、質(zhì)量欠佳的裹包玉米青貯等飼料有關(guān)。建議犢牛在3月齡進(jìn)行首次免疫，每半年進(jìn)行免疫1 次，以免造成損失。