胡世成，張奮搏，謝惠春，焦迎春

（青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海 西寧 810000）

如今，快節(jié)奏的生活環(huán)境使機(jī)體極易處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，如疲勞、缺氧、過(guò)量飲食、作息不規(guī)律等均會(huì)使機(jī)體發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)[1]。當(dāng)機(jī)體處于不利環(huán)境時(shí)，體內(nèi)活性氧自由基（reactive oxygen species，ROS）大量產(chǎn)生，其生成速率超過(guò)機(jī)體自身的清除速率，導(dǎo)致氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡，大量的ROS進(jìn)入細(xì)胞參與生化反應(yīng)，從而誘發(fā)氧化應(yīng)激[2]。研究發(fā)現(xiàn)在疲勞和缺氧狀態(tài)下，機(jī)體對(duì)氧氣的攝取和消耗增加，引起ROS的大量積累導(dǎo)致細(xì)胞膜和線粒體受損，使機(jī)體發(fā)生代謝紊亂、免疫力下降，甚至?xí)霈F(xiàn)器質(zhì)性病變[3]。因而有越來(lái)越多的研究者通過(guò)抗氧化劑來(lái)緩解氧化應(yīng)激作用，改善機(jī)體健康狀態(tài)[4]，同時(shí)也在不斷探索具有防護(hù)氧化應(yīng)激損傷作用的天然活性成分。

柴達(dá)木大肥菇[Agaricus bitorquis（Quél.）Sacc.]又稱雙層環(huán)傘菌，是一種生長(zhǎng)于青藏高原柴達(dá)木盆地的珍稀野生食用真菌[5]。柴達(dá)木大肥菇富含蛋白質(zhì)、纖維素及氨基酸等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，同時(shí)含有多糖、酚酸、萜烯等活性成分[6]，其中多糖是其主要的活性成分且含量較高。研究證實(shí)食用菌多糖具有多種活性功能，如抗氧化、抗腫瘤、抗炎及調(diào)節(jié)免疫等[7]。研究發(fā)現(xiàn)，柴達(dá)木大肥菇的菌絲體多糖、子實(shí)體多糖、發(fā)酵液多糖均具有抗氧化[8]、抗疲勞[9]、耐缺氧[10]等活性，其中從菌絲體中提取的胞內(nèi)多糖（intercellular polysaccharides，IPS）功能活性尤為突出，是柴達(dá)木大肥菇中極具開發(fā)潛力的組分之一。傅里葉紅外光譜和核磁共振光譜[8]的結(jié)果表明，胞內(nèi)多糖分子量約為120 kDa，主要由甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸組成，主鏈主要由D-葡聚糖構(gòu)成，支鏈由α-1，6糖苷鍵連接。然而，對(duì)IPS抗氧化應(yīng)激活性研究鮮見報(bào)道。綜上，本研究推測(cè)柴達(dá)木大肥菇多糖的抗氧化應(yīng)激作用可能與其調(diào)節(jié)機(jī)體應(yīng)激代謝和較強(qiáng)的抗氧化水平有關(guān)。

本研究以柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖為研究對(duì)象，借助小鼠力竭游泳及常壓缺氧模型誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，測(cè)定并分析實(shí)驗(yàn)小鼠運(yùn)動(dòng)及缺氧條件下機(jī)體代償代謝的相關(guān)生理生化指標(biāo)，解析柴達(dá)木大肥菇多糖抗氧化應(yīng)激活性與增強(qiáng)機(jī)體代謝的關(guān)聯(lián)機(jī)制，為柴達(dá)木大肥菇多糖作為天然抗氧化應(yīng)激功能食品因子的開發(fā)和青藏高原珍稀食用真菌資源研發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

柴達(dá)木大肥菇菌種：青海大學(xué)食品科學(xué)與工程實(shí)驗(yàn)室保藏，編號(hào)CCTCCM-2018250-ZJU-CDMA-12；柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖[Agaricus bitorquis（Quél.）Sacc.intercellular polysaccharides，IPS]：青海大學(xué)食品科學(xué)與工程實(shí)驗(yàn)室制備。

健康昆明小鼠100只，雄性和雌性各半，小鼠體重為（25±5）g，購(gòu)自甘肅中醫(yī)學(xué)院，許可證號(hào)為 SCXK（甘）2011-0001。飼養(yǎng)環(huán)境適宜、通風(fēng)、安靜，溫度為18℃～25℃，濕度為35%～50%，實(shí)驗(yàn)所用飲用水、生理鹽水均進(jìn)行滅菌處理。

紅景天膠囊：北京同仁堂健康藥業(yè)股份有限公司；活性炭：上海麥克林生物技術(shù)有限公司；三氯甲烷、正丁醇（均為分析純）：天津市博迪化工有限公司；小鼠基礎(chǔ)飼料：江蘇協(xié)同生物公司；肝糖原（hepatic glycogen，HG）測(cè)定試劑盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）測(cè)定試劑盒、尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）測(cè)定試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）測(cè)定試劑盒、血乳酸（lactic acid，LAC）測(cè)定試劑盒、乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）測(cè)定試劑盒、一氧化氮（nitric oxide，NO）測(cè)定試劑盒、丙二醛（malonic dialdehyde，MDA）測(cè)定試劑盒、過(guò)氧化氫酶（catalase，CAT）測(cè)定試劑盒：南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設(shè)備

721N紫外可見分光光度計(jì)：上海佑科儀器儀表有限公司；R-1001VN旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司；SB-3200TDT超聲清洗器：寧波新芝生物科技股份有限公司；各型微量移液器：德國(guó)艾本德公司。

1.3 方法

1.3.1 多糖的制備

參考文獻(xiàn)[10]的方法，使用超聲輔助熱水浸提法[水溫 60℃、超聲功率 126 W、料液比 1∶36（g/mL）、提取時(shí)間15 min]提取得到胞內(nèi)粗多糖溶液，在胞內(nèi)粗多糖溶液中加入溶液體積6%的活性炭[11]，在溫度60℃條件下水浴脫色5 min，褐黃色粗多糖溶液脫色為淺黃色或無(wú)色多糖溶液為止。參考文獻(xiàn)[12]中的Sevage法脫除胞內(nèi)粗多糖溶液中的蛋白。取經(jīng)過(guò)上述處理后的粗多糖溶液，采用大孔樹脂吸附層析法純化[13]，以0.5 mL/min的流速洗脫，得到柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)純化多糖，-80℃凍干后備用。

1.3.2 模型建立與動(dòng)物分組

通過(guò)小鼠力竭游泳和常壓密閉缺氧處理建立氧化應(yīng)激模型。力竭游泳處理[14]使用小鼠負(fù)重游泳的方法，將每組小鼠稱重并進(jìn)行負(fù)重，負(fù)重質(zhì)量為小鼠體重的5%，然后將小鼠分別置于裝有25℃水的桶中，一桶一鼠，記錄小鼠力竭游泳時(shí)間；缺氧處理[14]使用常壓密閉缺氧的方法，將每組的10只小鼠，分別放入含有15 g氫氧化鈉的廣口瓶中，在瓶底放一張濾紙，將瓶口用凡士林密封，當(dāng)各組實(shí)驗(yàn)小鼠停止呼吸，處死并記錄存活時(shí)間。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均符合動(dòng)物倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。

在滿足無(wú)特定病原體（specific pathogen free，SPF）級(jí)要求的動(dòng)物房，將100只小鼠放入飼養(yǎng)，保證通風(fēng)且安靜，雌雄分養(yǎng)，提供足夠的基礎(chǔ)飼料和滅菌飲用水，定期清理鼠籠和動(dòng)物房。適應(yīng)性喂養(yǎng)后，將小鼠隨機(jī)分為柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖低劑量組（intercellular polysaccharides low，IPSL）、中劑量組（intercellular polysaccharides middle，IPSM）、高劑量組（intercellular polysaccharides high，IPSH）、空白對(duì)照組（CONTROL）和陽(yáng)性對(duì)照組（RHODIOLA）5個(gè)組別。其中低、中、高劑量組是將純化后的胞內(nèi)多糖，制備成濃度分別為25、50、100 mg/kg的溶液，連續(xù)灌胃小鼠35 d；陽(yáng)性對(duì)照組采用紅景天膠囊并參考說(shuō)明書推薦用量配制成200 mg/kg的灌胃液，按小鼠體重10mg/kg的劑量灌胃，現(xiàn)用現(xiàn)配，連續(xù)灌胃35 d；空白對(duì)照組以同等體積的生理鹽水進(jìn)行灌胃。

1.3.3 生理生化指標(biāo)測(cè)定

待小鼠負(fù)重游泳結(jié)束，撈起小鼠并讓小鼠休息30 min。將小鼠用乙醚麻醉后通過(guò)眼球取血，同時(shí)將血清分離出來(lái)，置于-80℃冰箱中冷藏備用以檢測(cè)LAC和BUN含量以及LDH活性。取血后立即將小鼠解剖，取出小鼠肝臟，檢測(cè)MDA含量，SOD、CAT和GSH-Px的活性。待小鼠缺氧死亡后，通過(guò)眼球取血，摘取小鼠腦組織，迅速將小鼠腦組織放入液氮罐保存?zhèn)溆谩Ｖ蟀凑赵噭┖胁僮髡f(shuō)明，對(duì)小鼠體內(nèi)MDA、NO、BUN和LAC的含量以及LDH、SOD、CAT和GSH-Px的活性等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

通過(guò)SPSS 23.0處理數(shù)據(jù)及其標(biāo)準(zhǔn)差，差異顯著水平為P<0.05，差異極顯著水平為P<0.01；使用Origin（2018 C）軟件制作數(shù)據(jù)圖；數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 IPS對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間和缺氧存活時(shí)間的影響

IPS對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間和缺氧存活時(shí)間的影響結(jié)果見圖1。

圖1 IPS對(duì)小鼠力竭游泳時(shí)間和缺氧存活時(shí)間的影響Fig.1 Effect of IPS on exhaustive swimming time and hypoxia survival time in mice

力竭運(yùn)動(dòng)會(huì)增加氧氣的攝取和消耗，這會(huì)誘發(fā)應(yīng)激源活性氧的大量形成，導(dǎo)致信號(hào)傳導(dǎo)異?；蚣?xì)胞功能障礙，會(huì)在不同程度上對(duì)機(jī)體肝臟、骨骼肌等組織造成損傷[15]。小鼠力竭游泳時(shí)間是小鼠運(yùn)動(dòng)耐力的直接表現(xiàn)，同時(shí)也間接反映力竭運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對(duì)機(jī)體的損傷程度[16]。由圖1A可知，與空白對(duì)照組相比，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組小鼠力竭游泳時(shí)間均極顯著延長(zhǎng)（P<0.01），分別為 49.48、70.34、92.32 min，隨著劑量增加到100 mg/kg時(shí)，小鼠力竭游泳時(shí)間延長(zhǎng)率達(dá)到215.52%；其中胞內(nèi)多糖低劑量組時(shí)間短于陽(yáng)性對(duì)照組，無(wú)明顯差異。柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖可以提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力，延長(zhǎng)力竭游泳時(shí)間的結(jié)果與較多文獻(xiàn)報(bào)道一致，郭俊平等[17]發(fā)現(xiàn)桑黃多糖可以延長(zhǎng)疲勞小鼠運(yùn)動(dòng)時(shí)間，延長(zhǎng)率為70.62%；曹亮[18]研究發(fā)現(xiàn)羊肚菌多糖可以緩解小鼠疲勞狀態(tài)，力竭游泳時(shí)間延長(zhǎng)率達(dá)到188.05%。柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖延長(zhǎng)小鼠運(yùn)動(dòng)耐力效果較為突出，這可能是因?yàn)槠浞肿恿刻幱诰徑馄诨钚缘暮线m范圍。真菌多糖的分子量過(guò)大或者過(guò)小均會(huì)影響其生物活性功能的表現(xiàn)程度，如果分子量過(guò)小，真菌多糖的組成單一，則會(huì)無(wú)法形成產(chǎn)生活性的聚合結(jié)構(gòu)；如果分子量過(guò)大，則分子體積過(guò)大，會(huì)對(duì)多糖跨越多重細(xì)胞膜障礙進(jìn)入生物體內(nèi)發(fā)揮生物活性產(chǎn)生不利影響[19]。而不同的多糖所形成的活性最佳范圍不同，所以會(huì)出現(xiàn)不同物種間的差異。

2.1 兩組PDCD4表達(dá)率比較 良性對(duì)照組44例患者中，40例呈PDCD4陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為90.91%，EOC組92例患者中，42例呈PDCD4陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率為45.65%。兩組的PDCD4表達(dá)水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=25.465，P<0.05)。見圖1。

缺氧會(huì)誘導(dǎo)機(jī)體氧敏感性途徑活化，體內(nèi)的線粒體電子傳遞系統(tǒng)中可利用的氧氣減少，生成大量自由基，影響機(jī)體正常的氧化分解供能作用[20]。小鼠缺氧存活時(shí)間常用于評(píng)價(jià)緩解缺氧的作用[21]，是缺氧所引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)的觀測(cè)指標(biāo)。由圖1B可知，與空白對(duì)照組相比，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組小鼠缺氧存活時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P<0.05），分別為 46.09、48.53、50.33 min，隨著劑量的增加，小鼠缺氧存活時(shí)間呈上升趨勢(shì)；胞內(nèi)多糖干預(yù)組和陽(yáng)性對(duì)照組比較時(shí)，低劑量組缺氧存活時(shí)間短于陽(yáng)性對(duì)照組，無(wú)明顯差異，而中、高劑量組缺氧存活時(shí)間顯著延長(zhǎng)（P<0.05），其中胞內(nèi)多糖高劑量組是陽(yáng)性對(duì)照組的1.64倍。這與文獻(xiàn)研究結(jié)果一致，沙愛龍等[22]研究發(fā)現(xiàn)阿里紅多糖可以延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間至28.12 min，本研究中胞內(nèi)多糖高劑量組的結(jié)果是其1.79倍；曹亮[18]研究發(fā)現(xiàn)隨著羊肚菌多糖用量的增加，小鼠缺氧存活時(shí)間也隨之延長(zhǎng)。以上結(jié)果可能是因?yàn)槊總€(gè)多糖的分子量不同，而分子量是多糖具備生物活性的關(guān)鍵因素，這可能與多糖分子形成的高級(jí)構(gòu)型有關(guān)。

綜上可知，柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖可以較好地提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力，并且明顯延長(zhǎng)小鼠缺氧的存活時(shí)間，提高疲勞和缺氧所引起的氧化應(yīng)激條件下代償代謝水平，表明胞內(nèi)多糖對(duì)氧化損傷小鼠具有較好的保護(hù)作用。

2.2 IPS對(duì)小鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響

IPS對(duì)小鼠體內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT的活性以及MDA含量的影響結(jié)果見圖2。

圖2 IPS對(duì)小鼠體內(nèi)SOD、GSH-Px和CAT活性以及MDA含量的影響Fig.2 Effects of IPS on activities of SOD，GSH-Px and CAT and content of MDA in mice

GSH-Px、SOD及CAT是機(jī)體的抗氧化酶系，是常用來(lái)評(píng)價(jià)機(jī)體氧化及抗氧化體系是否處于平衡狀態(tài)的重要指標(biāo)[16]。MDA含量變化可以反映細(xì)胞膜受損傷的嚴(yán)重程度[23]。由圖2A可知，胞內(nèi)多糖干預(yù)組與空白對(duì)照組比較，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組小鼠肝臟中SOD活性增加極顯著（P＜0.01），且隨著胞內(nèi)多糖劑量的增加，作用效果越明顯；但胞內(nèi)多糖不同劑量組小鼠肝臟中SOD活性，均低于陽(yáng)性對(duì)照組且無(wú)明顯差異。由圖2B可知，與空白對(duì)照組相比，胞內(nèi)多糖低、中劑量組小鼠肝臟中GSH-Px活性差異顯著（P＜0.05），分別達(dá)到了15.34、17.08 U/mL，而胞內(nèi)多糖高劑量組小鼠肝臟中GSH-Px活性差異極顯著（P＜0.01），是空白對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組的1.63倍和1.35倍；由圖2C可知，相較于空白對(duì)照組，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組小鼠肝臟中MDA含量均極顯著降低（P＜0.01），其中小鼠肝臟中MDA含量隨著胞內(nèi)多糖劑量的增加而降低，胞內(nèi)多糖高劑量組含量降至0.55nmol/mg prot，降低了87.81%；由圖2D可知，將胞內(nèi)多糖3個(gè)劑量組與空白對(duì)照組進(jìn)行比較，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組小鼠肝臟中CAT活性均極顯著增加（P＜0.01），高劑量組小鼠肝臟中CAT活性達(dá)到177.05 U/mg prot，是空白對(duì)照組的1.34倍，是陽(yáng)性對(duì)照組的1.11倍。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)結(jié)果相一致，譚秀娟等[24]研究發(fā)現(xiàn)蕪根總多糖可以顯著提高缺氧小鼠體內(nèi)SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量；劉雨萌等[25]研究顯示枸杞子多糖可以有效提高缺氧小鼠體內(nèi)SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量。

綜合表明，柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖可以提升小鼠抗氧化能力，避免MDA的堆積[26]，從而降低氧化損傷，緩解小鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)。此外，一項(xiàng)針對(duì)山參多糖的小鼠抗疲勞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，山參多糖抑制有害代謝物積累以及減輕氧化損傷，可能與激活腺苷酸激活蛋白激酶（adenosine 5'-monophosphateactivated protein kinase，AMPK）信號(hào)通路、改善葡萄糖攝取和線粒體功能有關(guān)[27]，這為后續(xù)研究相關(guān)機(jī)制帶來(lái)啟發(fā)。

2.3 IPS對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響

圖3為IPS對(duì)小鼠血清中BUN、LAC含量以及LDH活性的影響結(jié)果。

圖3 IPS對(duì)小鼠血清中BUN和LAC含量、LDH活性的影響Fig.3 Effects of IPS on the contents of BUN，LAC and LDH activity in serum of mice

血乳酸水平和尿素氮含量是對(duì)機(jī)體有氧代謝能力和疲勞程度的反映[28]。當(dāng)機(jī)體處于疲勞誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，機(jī)體發(fā)生代償代謝不能獲得充沛的能量，所以需要通過(guò)加強(qiáng)蛋白質(zhì)與氨基酸的代謝分解來(lái)補(bǔ)充缺失的能量，尿素氮便是此代謝過(guò)程的產(chǎn)物，隨著代謝時(shí)間的延長(zhǎng)其濃度也逐漸升高。LDH活性可以評(píng)價(jià)機(jī)體無(wú)氧代謝能力，同時(shí)也可以評(píng)價(jià)機(jī)體運(yùn)動(dòng)負(fù)荷強(qiáng)度和運(yùn)動(dòng)損傷程度[29]。由圖3A可知，與空白對(duì)照組相比，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組小鼠血清中BUN含量均顯著降低（P＜0.05），分別下降了 20.57%、44.22%、66.31%，其中胞內(nèi)多糖高劑量組小鼠血清中BUN含量下降至5.57 mmol/L；與陽(yáng)性對(duì)照組相比，胞內(nèi)多糖中劑量組小鼠血清中BUN含量顯著下降（P＜0.05），高劑量組極顯著下降（P＜0.01），低劑量組無(wú)明顯差異。由圖3B可知，與空白對(duì)照組相比，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組小鼠血清中的血乳酸含量均顯著降低（P＜0.05），且分別下降11.63%、16.64%、38.32%，其中，高劑量組下降效果最為突出；胞內(nèi)多糖干預(yù)組與陽(yáng)性對(duì)照組相比，胞內(nèi)多糖高劑量組小鼠血清中血乳酸含量下降了23.14%，下降至14.05 mmol/L，血乳酸濃度與機(jī)體疲勞程度呈正相關(guān)，當(dāng)機(jī)體過(guò)度運(yùn)動(dòng)后，血乳酸濃度上升從而使機(jī)體的疲勞感加劇[30]，如果此時(shí)從體外補(bǔ)充抗氧化劑，血乳酸濃度則會(huì)下降，從而緩解疲勞癥狀。由圖3C可知，與空白對(duì)照組相比，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組小鼠血清中LDH活性均顯著降低（P＜0.05）；而與陽(yáng)性對(duì)照組相比，低劑量組無(wú)顯著差異（P＞0.05），中、高劑量組差異極顯著（P＜0.01）。本研究結(jié)果與文獻(xiàn)結(jié)果一致，郝艷娟等[30]研究黃瓜籽對(duì)小鼠抗疲勞活性發(fā)現(xiàn)，黃瓜籽可以減少疲勞小鼠體內(nèi)BUN和LAC含量，分別降低至4.27 mmol/L和4.49 mmol/L，均能明顯提高疲勞小鼠運(yùn)動(dòng)耐力，但本研究結(jié)果較低，可能是因?yàn)椴煌现袪I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組成不同，黃瓜籽中富含脂肪酸等具有藥用價(jià)值的活性成分。譚秀娟等[24]研究發(fā)現(xiàn)，蕪根總多糖可以明顯降低疲勞小鼠體內(nèi)LDH活力，降至17.55 kU/L，這與本研究結(jié)果一致，且柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖的作用效果較為突出。

本研究表明，柴達(dá)木大肥菇多糖能夠明顯緩解小鼠負(fù)重運(yùn)動(dòng)造成的疲勞，有效提高小鼠代償代謝水平，且隨著使用劑量的增加，作用效果越突出。多糖可能是通過(guò)減少機(jī)體因過(guò)度運(yùn)動(dòng)所引起的代謝產(chǎn)物堆積，從而緩解運(yùn)動(dòng)疲勞造成的機(jī)體損傷[31]。

2.4 IPS對(duì)小鼠腦組織中NO的影響

圖4為IPS對(duì)小鼠腦組織中NO含量的影響結(jié)果。

圖4 IPS對(duì)小鼠腦組織中NO含量的影響Fig.4 Effect of IPS on NO content in brain tissue of mice

當(dāng)機(jī)體處于缺氧所引起的氧化應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，一氧化氮合酶催化生成的NO可對(duì)神經(jīng)起到毒性作用，造成損傷[32]。由圖4可知，與空白對(duì)照組相比，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組小鼠腦組織中NO含量差異顯著（P＜0.05），與陽(yáng)性對(duì)照組相比，低劑量組無(wú)明顯差異，中、高劑量組差異極顯著（P＜0.01）。人體腸道內(nèi)棲息著多種共生微生物，統(tǒng)稱為腸道菌群，其在盲腸和大腸中幫助人體發(fā)酵食用菌多糖等多種膳食纖維，產(chǎn)生的益生代謝產(chǎn)物短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids，SCFA），能夠影響人體的代謝、免疫和神經(jīng)等多個(gè)系統(tǒng)，其中丁酸鹽被證實(shí)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中重要的神經(jīng)調(diào)節(jié)劑[33]。與本文結(jié)果相似，Lanza等[34]發(fā)現(xiàn)炎癥小鼠補(bǔ)充丁酸鹽后脊髓組織的NO水平明顯降低，并推測(cè)是通過(guò)抑制核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）信號(hào)通路下游促進(jìn)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）的表達(dá)實(shí)現(xiàn)，也有另一項(xiàng)研究表明丁酸鹽能夠抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，從而降低腎病小鼠的腎臟氧化損傷[35]，基于此，推測(cè)柴達(dá)木大肥菇多糖同樣可能通過(guò)結(jié)腸發(fā)酵產(chǎn)生丁酸鹽的方式，影響腦組織中的NF-κB信號(hào)通路進(jìn)而降低NO含量。

3 結(jié)論

本文研究結(jié)果顯示，疲勞和缺氧可以明顯加劇小鼠的氧化應(yīng)激過(guò)程，引起小鼠抗氧化能力下降。通過(guò)氧化應(yīng)激損傷動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)發(fā)現(xiàn)，25、50、100 mg/kg劑量的柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖均能不同程度提高小鼠的抗氧化能力，緩解小鼠由疲勞和缺氧誘發(fā)的氧化損傷，改善小鼠氧化應(yīng)激程度，從而對(duì)小鼠產(chǎn)生保護(hù)作用。柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖組小鼠力竭游泳時(shí)間和缺氧存活時(shí)間均有所延長(zhǎng)，且呈劑量依賴性；肝臟抗氧化結(jié)果顯示，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組明顯降低了肝臟中MDA含量，升高了SOD、CAT和GSH-Px 3種抗氧化酶的活性，說(shuō)明不同劑量的胞內(nèi)多糖對(duì)肝臟的抗氧化能力均有增強(qiáng)作用。血清指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果顯示，胞內(nèi)多糖低、中、高劑量組能夠降低小鼠血清中LDH活性、BUN含量和LAC含量，說(shuō)明柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖可以降低機(jī)體由于運(yùn)動(dòng)損傷所引起的代謝產(chǎn)物積累，從而有效緩解過(guò)度運(yùn)動(dòng)造成的氧化損傷，提高疲勞狀態(tài)下代償代謝水平，起到保護(hù)機(jī)體的作用，具有抗氧化應(yīng)激活性。

以上結(jié)果說(shuō)明，柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖可以作為天然的抗氧化劑，具有顯著的抗氧化應(yīng)激活性，可以清除機(jī)體中多余的活性氧自由基，有效改善機(jī)體的氧化和抗氧化體系之間不平衡的狀態(tài)，逆轉(zhuǎn)抗氧化體系中酶類的活性，維持線粒體內(nèi)氧化磷酸化的正常進(jìn)行，提高機(jī)體抗疲勞和缺氧耐受性。關(guān)于柴達(dá)木大肥菇胞內(nèi)多糖的抗氧化應(yīng)激活性具體的作用機(jī)制、信號(hào)通路等需要進(jìn)一步研究。后期可以借助組學(xué)技術(shù)對(duì)內(nèi)源性抗氧化信號(hào)通路進(jìn)行研究，從多因子、多信號(hào)通路復(fù)雜調(diào)控機(jī)體內(nèi)在平衡的角度，對(duì)深層的機(jī)制進(jìn)行更系統(tǒng)、更全面的分析，闡明柴達(dá)木大肥菇多糖發(fā)揮作用的深層機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)為柴達(dá)木大肥菇多糖在食品、藥品領(lǐng)域的應(yīng)用提供了一定的理論參考。