劉怡，張娜，吳萌萌，嚴(yán)馨，李姝，2，王松濤，沈才洪，黃敏，趙建*

（1.四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川 成都 610064；2.瀘州品創(chuàng)科技有限公司，四川 瀘州 646000；3.國(guó)家固態(tài)釀造工程技術(shù)研究中心，四川 瀘州 646000；4.四川省原子能研究院，四川 成都 610101）

苦蕎麥俗稱苦蕎，學(xué)名韃靼蕎麥[Fagopyrum tataricum（L.）Gaertn]，是蓼科（Polygonaceae）蕎麥屬（Fagopyrum Mill）雙子葉植物中的一種藥食兩用的小宗雜糧[1]。就其食用價(jià)值而言，被譽(yù)為“五谷之王”的苦蕎麥常作為飲料、酒類以及面食中的添加物[2]。就其藥用價(jià)值而言，苦蕎黃酮已被證實(shí)在人體抗氧化[3]、清除自由基、降“三高”[4-7]等方面均有作用，因此又被譽(yù)為“三降食品”。

目前，許多研究已證實(shí)長(zhǎng)期飲酒或是過度飲酒會(huì)對(duì)人體肝臟產(chǎn)生負(fù)面影響，造成肝臟解毒能力降低，最終誘發(fā)酒精性肝?。╝lcoholic liver disease，ALD）[8]。酒精性脂肪肝（alcoholic fatty liver，AFL）是 ALD 的早期階段，若未及時(shí)治療還會(huì)誘發(fā)一系列炎癥反應(yīng)。相關(guān)研究表明，長(zhǎng)期飲酒發(fā)展為酒精性脂肪肝?。╝lcoholic fatty liver disease，AFLD）的概率為 90%[9]。目前，在臨床上治療AFLD主要是通過戒酒和在戒酒過程中補(bǔ)充高蛋白食物以及多種維他命和葉酸來進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)支持。同時(shí)，還可以通過藥物來改善AFLD患者的臨床癥狀和生物化學(xué)指標(biāo)，但近40年來有關(guān)治療AFLD的藥物研究并未取得明顯進(jìn)展[10-11]。

前期研究了苦蕎總黃酮（total flavonoids of tartary buckwheat，TFTB）的制備及成分分析[12]，并證實(shí)了TFTB的體外抗氧化活性及解酒作用[13]。目前對(duì)于TFTB能緩解AFLD的機(jī)制研究尚不完全。因此，本實(shí)驗(yàn)采用0.9%乙醇和0.01%硫酸亞鐵體外誘導(dǎo)L-02細(xì)胞，擬進(jìn)一步探究TFTB是否具有體外抑制AFL細(xì)胞脂肪變性、氧化損傷以及降低細(xì)胞內(nèi)炎性因子的作用，為TFTB緩解AFLD的機(jī)制研究及苦蕎黃酮類解酒護(hù)肝產(chǎn)品的開發(fā)提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

苦蕎總黃酮：黃酮總含量為79.5%，由四川省資源微生物與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室制備；L-02細(xì)胞：四川省資源微生物與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保藏。

RPMI-1640培養(yǎng)基、0.25%乙二胺四乙酸-胰酶（ethylenediamine tetraacetic acid-trypsin，EDTA-trypsin）、胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）：美國(guó)賽默飛世爾科技公司；油紅O染液、二甲亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）：北京索萊寶科技有限公司；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）試劑盒、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate transaminase，AST）試劑盒、甘油三酯（triglyceride，TG）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）試劑盒、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒、總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）試劑盒、游離脂肪酸（nonestesterified fatty acid，NEFA）試劑盒：南京建成生物工程研究所；細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒（cell counting kit-8，CCK-8）：賽國(guó)生物科技有限責(zé)任公司；腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）試劑盒、白介素-6（interleukin-6，IL-6）試劑盒、白介素-8（interleukin-8，IL-8）試劑盒：上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

CO2培養(yǎng)箱（3111）、連續(xù)波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Multiskan go）、生物安全柜（1389）：美國(guó)賽默飛世爾科技公司；低速離心機(jī)（TDZ5B-WS）：上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司；倒置顯微鏡（DIAPHOT）：日本尼康公司；紫外分光光度計(jì)（UV-2600）：日本島津公司。

1.3 方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)

用RPMI-1640培養(yǎng)液（含10%FBS）對(duì)37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)生長(zhǎng)狀態(tài)正常的L-02細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，每2 d～3 d 換液 1 次；每 4 d～6 d，使用 0.25%EDTA-胰酶37℃消化3 min～5 min，待細(xì)胞呈流沙狀脫落時(shí)停止消化，進(jìn)行傳代培養(yǎng)和細(xì)胞凍存[14]。

1.3.2 CCK-8法篩選AFL細(xì)胞模型乙醇誘導(dǎo)濃度

取T25培養(yǎng)瓶中融合度達(dá)80%的L-02細(xì)胞，使用0.25%EDTA-胰酶37℃消化3 min～5 min，待細(xì)胞呈流沙狀脫落時(shí)停止消化，計(jì)數(shù)后接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi)，使每孔細(xì)胞數(shù)為5×103個(gè)。置于5%CO2、37℃條件下培養(yǎng)24 h后，設(shè)置乙醇組、硫酸亞鐵組、空白對(duì)照組。乙醇組：L-02細(xì)胞懸液中乙醇體積終濃度分別為0.1%、0.5%、0.9%、1.3%、1.7%；硫酸亞鐵組：L-02細(xì)胞懸液中FeSO4質(zhì)量終濃度為0.01%；空白對(duì)照組：僅含L-02細(xì)胞懸液。于上述條件下培養(yǎng)48 h后，每孔加入10 μL CCK-8，再培養(yǎng) 50 min，使用連續(xù)波長(zhǎng)酶標(biāo)儀檢測(cè)并記錄各孔OD450值，計(jì)算細(xì)胞活性，計(jì)算公式為細(xì)胞活性/%=[（實(shí)驗(yàn)組OD值-空白OD值）/（空白對(duì)照組OD值-空白OD值）]×100[15]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每組3個(gè)復(fù)孔。

1.3.3 AFL細(xì)胞模型的建立

取T25培養(yǎng)瓶中融合度達(dá)80%的L-02細(xì)胞，按照1.3.2中的消化條件進(jìn)行消化，計(jì)數(shù)后接種于6孔培養(yǎng)板內(nèi)，使每孔細(xì)胞數(shù)為6×105個(gè)。細(xì)胞貼壁后，將實(shí)驗(yàn)設(shè)為空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、模型組?？瞻讓?duì)照組：僅含L-02細(xì)胞懸液；陰性對(duì)照組：L-02細(xì)胞懸液中FeSO4質(zhì)量終濃度為0.01%；模型組：向陰性對(duì)照組中添加乙醇，使乙醇體積終濃度為1.3.2中篩選濃度。5%CO2、37℃條件下培養(yǎng)，2 d換液1次，4 d傳代1次。誘導(dǎo)至第4代，命名為H4。使用油紅O染色法并測(cè)定各組細(xì)胞上清液中TG、AST、ALT含量以檢測(cè)AFL細(xì)胞模型是否構(gòu)建成功[16]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每組3個(gè)復(fù)孔。

1.3.4 CCK-8法篩選TFTB作用濃度

參考1.3.2中的方法，設(shè)置以下組別，空白對(duì)照組：僅含L-02細(xì)胞懸液；實(shí)驗(yàn)組：L-02細(xì)胞懸液中TFTB質(zhì)量終濃度分別為 10、20、40、80、160、320 μg/mL[17]。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每組3個(gè)復(fù)孔。

1.3.5 TFTB處理模型組細(xì)胞

參考1.3.3中6孔培養(yǎng)板接種方法接種細(xì)胞，待細(xì)胞貼壁后設(shè)置以下組別?？瞻讓?duì)照組：僅含L-02細(xì)胞懸液；處理前H4組：僅含H4組細(xì)胞懸液；TFTB處理組：向H4組細(xì)胞懸液中添加TFTB，使TFTB作用濃度為1.3.4中篩選濃度。37℃、5%CO2的條件下培養(yǎng)，2 d換液1次，觀察16 d并收集各組細(xì)胞上清液。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每組3個(gè)復(fù)孔。

1.3.6 生化指標(biāo)檢測(cè)

對(duì)1.3.5中收集的各組細(xì)胞上清液進(jìn)行生化指標(biāo)檢測(cè)，測(cè)定 TG、ALT、AST、MDA、NEFA、T-SOD、GSH-Px水平，均按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。同時(shí)，采用酶聯(lián)免疫吸附法[18]測(cè)定各組細(xì)胞上清液中IL-6、IL-8、TNF-α水平。

1.4 數(shù)據(jù)處理

用GraphPad Prism 8進(jìn)行數(shù)據(jù)分析與作圖。數(shù)據(jù)表示為（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差），通過單因素方差分析（Oneway ANOVA）進(jìn)行組與組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較，p＜0.05表示具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 乙醇誘導(dǎo)濃度的確定

不同濃度的乙醇對(duì)L-02細(xì)胞的影響結(jié)果見表1。

表1 不同濃度的乙醇對(duì)L-02細(xì)胞生長(zhǎng)的影響Table 1 Effect of C2H5OH at different concentration on the growth of L-02 hepatocytes

由表1可知，在本實(shí)驗(yàn)中，空白對(duì)照組細(xì)胞活性設(shè)為100%。與空白對(duì)照組相比，0.01%硫酸亞鐵組細(xì)胞活性為100.77%，表明0.01%硫酸亞鐵對(duì)細(xì)胞活性無明顯影響；0.1%乙醇組細(xì)胞活性為100.54%，表明當(dāng)乙醇濃度為0.1%時(shí)對(duì)細(xì)胞活性無明顯影響，并且還可略微促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)；1.3%和1.7%乙醇組細(xì)胞活性分別為84.71%、77.28%，分別降低了15.29%和22.72%，差異高度顯著（p＜0.000 1），顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞體積增大、邊緣模糊、胞內(nèi)有較多雜質(zhì)，細(xì)胞大量脫壁，細(xì)胞活性明顯降低；0.5%和0.9%乙醇組細(xì)胞活性分別為96.11%、87.22%，雖然分別降低了3.89%、12.78%，但在顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)細(xì)胞體積只略微增大，活細(xì)胞數(shù)目仍然較多，脫壁細(xì)胞較少。阮雪青[19]的研究表明，構(gòu)建體外AFL模型時(shí)為在細(xì)胞功能衰退前獲得AFL的若干指標(biāo)，通常選擇較高乙醇濃度和較短誘導(dǎo)時(shí)間。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇0.9%乙醇濃度來構(gòu)建AFL細(xì)胞模型，該濃度乙醇對(duì)細(xì)胞形態(tài)及貼壁能力影響較小，且乙醇濃度適中，可縮短誘導(dǎo)時(shí)間，提高誘導(dǎo)效果。

2.2 細(xì)胞模型的鑒定

2.2.1 油紅O染色倒置顯微鏡觀察結(jié)果

油紅O染色倒置顯微鏡觀察結(jié)果見圖1。

圖1 倒置顯微鏡下油紅O染色結(jié)果Fig.1 Results of oil red O staining under inverted microscope

經(jīng)油紅O染色后，通過倒置顯微鏡可觀察到空白對(duì)照組（圖1A）與陰性對(duì)照組（圖1B）中有少數(shù)被染成橘紅色的脂滴正常分布于細(xì)胞內(nèi)；模型組（圖1C）細(xì)胞中出現(xiàn)大量橘紅色脂滴，呈連珠狀有序排列，集中分布于細(xì)胞膜周圍，表明0.9%乙醇和0.01%FeSO4共同誘導(dǎo)后的H4細(xì)胞產(chǎn)生了脂肪累積，AFL細(xì)胞模型構(gòu)建成功。

2.2.2 細(xì)胞上清液肝功能指標(biāo)驗(yàn)證

TG是人體內(nèi)含量最多的脂類，其含量通常保持在一定范圍內(nèi)，過度飲酒會(huì)導(dǎo)致TG升高，產(chǎn)生脂肪累積[20]。AST和ALT常被用來反映肝細(xì)胞損傷程度，乙醇作用于L-02細(xì)胞導(dǎo)致AFLD發(fā)生發(fā)展的過程中會(huì)伴隨著細(xì)胞膜通透性增加，AST、ALT從細(xì)胞內(nèi)釋放，細(xì)胞上清液中AST、ALT水平升高[21]。當(dāng)L-02細(xì)胞經(jīng)乙醇誘導(dǎo)至第4代，各組細(xì)胞上清液中TG、AST和ALT的變化結(jié)果見表2。

由表2可知，與空白對(duì)照組比較，陰性對(duì)照組細(xì)胞上清液中 TG、AST、ALT 含量無顯著差異（p＞0.05）；模型組細(xì)胞上清液中TG、AST、ALT含量分別上升了185.71%、790.48%、193.44%，具有高度顯著差異（p＜0.0001）。以上結(jié)果表明，空白對(duì)照組細(xì)胞通過0.9%乙醇和0.01%FeSO4的誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化成模型組細(xì)胞，且胞內(nèi)產(chǎn)生了脂肪累積與變性，同時(shí)伴隨細(xì)胞膜的損傷，造成ALT、AST大量滲漏到細(xì)胞上清液中，與卜曉芬等[17]、Kong等[22]的研究結(jié)果一致。因此，經(jīng)0.9%乙醇和0.01%FeSO4誘導(dǎo)后的H4細(xì)胞上清液指標(biāo)發(fā)生變化且符合酒精肝指標(biāo)變化趨勢(shì)，AFL細(xì)胞模型構(gòu)建成功。

表2 各組細(xì)胞上清液TG、AST和ALT的變化Table 2 Levels of TG，AST and ALT in supernatant of cells

2.3 TFTB作用濃度的確定

使用 10、20、40、80、160、320 μg/mL TFTB 處理 H4細(xì)胞48 h后，H4細(xì)胞活性見表3。

表3 不同濃度的TFTB對(duì)H4細(xì)胞生長(zhǎng)的影響Table 3 Effect of TFTB at different concentration on the growth of H4cells

由表3可知，與空白對(duì)照組相比，TFTB濃度大于80 μg/mL時(shí)，H4細(xì)胞活性下降明顯且低于80%，差異高度顯著（p＜0.000 1）；10、20、40 μg/mL TFTB 處理組細(xì)胞活性分別為102.53%、99.92%、96.37%，對(duì)H4細(xì)胞分裂生長(zhǎng)無顯著影響（p＞0.05），但低濃度的TFTB會(huì)延長(zhǎng)處理時(shí)間，降低作用效果；而80 μg/mL TFTB處理組細(xì)胞活性為84.55%，雖有所降低，但顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)活細(xì)胞數(shù)目仍較多且形態(tài)與空白對(duì)照組接近。同時(shí)，該作用濃度適中，節(jié)約處理時(shí)間，提高作用效果。因此，選擇80 μg/mL作為TFTB的作用濃度。

2.4 TFTB對(duì)AFL細(xì)胞的影響

2.4.1 TFTB對(duì)AFL細(xì)胞上清液中肝功能指標(biāo)TG、AST、ALT水平的影響

各組細(xì)胞上清液中TG、AST和ALT的變化見表4。

表4 各組細(xì)胞上清液TG、AST和ALT的變化Table 4 Levels of TG，AST and ALT in supernatant of cells

由表4可知，與處理前H4組比較，經(jīng)80μg/mL TFTB處理后細(xì)胞上清液中TG、AST、ALT高度顯著減少（p＜0.000 1），分別降低了15.00%、61.50%和68.71%。表明經(jīng)80 μg/mL TFTB處理后，可抑制乙醇誘導(dǎo)后L-02細(xì)胞脂肪變性與堆積，也可減輕肝細(xì)胞的損傷程度。袁葉飛等[15]在體外構(gòu)建的AFL細(xì)胞模型中觀察到趕黃草總黃酮能明顯降低細(xì)胞內(nèi)TG水平且能明顯緩解脂肪變性。閆帥峰等[23]通過構(gòu)建大鼠AFLD模型，證明了苦蕎能夠減少脂肪在大鼠肝臟中的積蓄，但并未提出發(fā)揮效應(yīng)的成分。綜上，苦蕎中的黃酮成分能夠抑制體外誘導(dǎo)的AFL細(xì)胞模型脂肪變性與堆積。

2.4.2 TFTB對(duì)AFL細(xì)胞上清液中氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA、NEFA、T-SOD、GSH-Px水平的影響

MDA含量能夠反映機(jī)體抗氧化潛在能力與組織過氧化損傷程度，NEFA與機(jī)體的氧化應(yīng)激有關(guān)，當(dāng)NEFA處于較高濃度時(shí)，不僅會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷，機(jī)體氧化系統(tǒng)與抗氧化系統(tǒng)的平衡狀態(tài)也會(huì)發(fā)生變化。TSOD、GSH-Px則是生物體系中抗氧化系的重要組成成員。Masarone等[24]的研究表明，酒精長(zhǎng)期作用于肝臟可誘導(dǎo)肝臟氧化應(yīng)激，MDA、T-SOD和GSH-Px的水平變化可用來表示經(jīng)乙醇誘導(dǎo)后以及藥物作用后肝臟氧化損傷程度。Grummer等[25]認(rèn)為奶牛血液中NEFA升高會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激并伴隨脂肪肝的產(chǎn)生。各組細(xì)胞上清液MDA、NEFA、T-SOD和GSH-Px的變化見表5。

表5 各組細(xì)胞上清液MDA、NEFA、T-SOD和GSH-Px的變化Table 5 Levels of MDA，NEFA，T-SOD and GSH-Px in supernatant of cells

由表5可知，與空白對(duì)照組比較，處理前H4組細(xì)胞上清液中MDA水平顯著升高13.25%（p＜0.05），NEFA水平高度顯著升高 133.51%（p＜0.000 1），T-SOD、GSH-Px水平分別高度顯著降低18.00%、22.28%（p＜0.0001），表明乙醇能夠誘導(dǎo)L-02細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷。

與處理前H4組比較，TFTB處理組細(xì)胞上清液中MDA水平顯著降低 13.83%（p＜0.05），NEFA 水平高度顯著降低 47.51%（p＜0.000 1），T-SOD、GSH-Px水平分別高度顯著升高 17.44%、101.57%（p＜0.000 1），表明80 μg/mL TFTB可能是通過提高L-02細(xì)胞內(nèi)T-SOD和GSH-Px的酶活性以及降低MDA、NEFA的水平來提高細(xì)胞的抗氧化能力。Li等[26]研究結(jié)果表明，醉酒小鼠模型組肝臟中的MDA明顯升高，T-SOD、GSH-Px明顯降低，而經(jīng)枸杞色素和多糖治療后可逆轉(zhuǎn)前述情況。童鈺琴等[13]在體外抗氧化活性實(shí)驗(yàn)中觀察到苦蕎麩皮總黃酮對(duì)超氧陰離子自由基（O2-·）、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基及NO2-具有一定的清除能力，且在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)出量效關(guān)系。因此，TFTB可能通過提高L-02細(xì)胞內(nèi)T-SOD和GSH-Px的酶活性并降低MDA、NEFA水平來抑制O2-·、DPPH·及NO2-等的產(chǎn)生，從而提高細(xì)胞的抗氧化能力，改善AFL細(xì)胞氧化損傷，因此具有緩解AFLD的潛能。

2.4.3 TFTB對(duì)AFL細(xì)胞上清液中炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α 水平的影響

IL-6主要用于檢測(cè)積累性肝損傷，TNF-α可加速中性粒細(xì)胞的轉(zhuǎn)移導(dǎo)致活性氧增加，進(jìn)而造成肝臟的損傷[27]，這兩項(xiàng)指標(biāo)的升高意味著嚴(yán)重的肝病甚至惡性腫瘤[28]。IL-8是一種有效的趨化因子，由巨噬細(xì)胞、肝細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生，多項(xiàng)研究表明患有AFLD患者的血漿及肝臟中的IL-8水平會(huì)增加[29]。Li等[26]的研究發(fā)現(xiàn)AFLD模型小鼠血清中IL-6、TNF-α顯著上升（p＜0.05）。Wang等[30]的研究表明IL-8可通過蛋白激酶B/缺氧誘導(dǎo)因子-1α通路（protein kinase B/hypoxia inducible factor-1α pathway，Akt/HIF-1α pathway）加劇肝脂變性。各組細(xì)胞上清液中IL-6、IL-8和TNF-α的變化見表6。

表6 各組細(xì)胞上清液IL-6、IL-8和TNF-α的變化Table 6 Levels of IL-6，IL-8 and TNF-α in supernatant of cells pg/mL

由表6可知，與空白對(duì)照組比較，處理前H4組細(xì)胞上清液中IL-6、IL-8水平分高度顯著升高128.22%、595.68%（p＜0.000 1），TNF-α 水平升高 18.77%（p＞0.05），表明乙醇能夠誘導(dǎo)L-02細(xì)胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。

與處理前H4組比較，80 μg/mL TFTB處理組細(xì)胞上清液中IL-6水平下降8.31%（p＞0.05），IL-8水平高度顯著下降 32.61%（p＜0.000 1），TNF-α 水平顯著下降27.85%（p＜0.05），表明 80 μg/mL TFTB 能夠降低 AFL細(xì)胞產(chǎn)生炎性因子的水平，起到緩解相關(guān)炎癥反應(yīng)的作用。王雪等[31]在體外構(gòu)建小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW 264.7炎癥模型中觀察到天山堇菜總黃酮在0.78μg/mL～12.5 μg/mL 能明顯降低促炎癥因子 TNF-α、IL-6、IL-1β的水平，具有較好的抗炎活性。而本研究表明，80 μg/mL的TFTB能明顯降低AFL細(xì)胞上清液中炎性因子IL-6、IL-8、TNF-α的水平。由此可見，黃酮緩解相關(guān)炎癥反應(yīng)的作用濃度因黃酮來源不同而呈現(xiàn)較大的差異。胡一冰等[32]研究發(fā)現(xiàn)，苦蕎籽提取物也可緩解炎癥反應(yīng)，抑制小鼠耳腫脹及大鼠蛋清性足腫脹。目前，還未有文獻(xiàn)報(bào)道TFTB對(duì)體外誘導(dǎo)的AFL細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抑制作用。結(jié)合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，TFTB可通過降低炎性因子水平來緩解AFL細(xì)胞損傷，從而發(fā)揮保肝潛能。

3 結(jié)論

本文以TFTB為原料，以0.9%乙醇和0.01%FeSO4成功建立體外AFL細(xì)胞模型，研究了TFTB對(duì)AFL細(xì)胞的影響。研究結(jié)果顯示，80 μg/mL的TFTB可以減少酒精性脂肪肝L-02細(xì)胞上清液中TG、AST、ALT、MDA、NEFA的含量，并升高T-SOD、GSH-Px的含量，表明TFTB不僅可以抑制AFL細(xì)胞模型脂肪積累與變性，還可以減輕乙醇對(duì)肝細(xì)胞膜及肝細(xì)胞的氧化損傷，從而具有緩解AFLD的潛能。同時(shí)，80 μg/mL TFTB也可降低酒精性脂肪肝L-02細(xì)胞上清液中IL-8、TNF-α的含量，表明TFTB能夠緩解炎癥反應(yīng)。因此，在保健食品及相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)中，考慮其能夠改善AFLD的潛能及緩解炎癥的功效作用，為產(chǎn)品開發(fā)提供新的理論依據(jù)。