靳淑委，張光波，常 羽，楊軍艷

（1.石家莊理工職業(yè)學(xué)院，河北石家莊 050228；2.石家莊科技信息職業(yè)學(xué)院，河北石家莊 050500；3.石家莊醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校，河北石家莊 050599；4.石家莊工程職業(yè)學(xué)院，河北石家莊 050000）

雞蛋是人類(lèi)飲食中重要的動(dòng)物蛋白和營(yíng)養(yǎng)成分來(lái)源之一。近年來(lái)，由于抗生素在家禽中的濫用，雞蛋中的藥物殘留引起了全世界關(guān)注（Vandemaele 等，2002）。此外，抗生素濫用還會(huì)導(dǎo)致腸道菌群失衡、腹瀉、免疫功能低下等問(wèn)題（Willing 等，2011）。中草藥是中國(guó)瑰寶，具有安全、高效、低殘留等特點(diǎn)，是動(dòng)物疾病預(yù)防或治療的常用添加劑。黃芪作為一種傳統(tǒng)中草藥，其主要有效藥物成分包括多糖、皂苷、黃酮類(lèi)、蒽醌類(lèi)、生物堿和多種氨基酸（Li 等，2014）。據(jù)報(bào)道，黃芪具有抗炎、抗病毒、抗氧化（Shahzad 等，2016）、增強(qiáng)免疫力等作用，已廣泛應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)。在過(guò)去的幾年里，黃芪多糖作為飼糧添加劑在畜禽生產(chǎn)中的應(yīng)用有大量研究。但黃芪提取物作為蛋雞飼糧添加劑的應(yīng)用還沒(méi)有系統(tǒng)評(píng)價(jià)。因此，本研究以黃芪提取物為添加劑，以期為中草藥添加劑在蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論支撐和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將360 只生理狀態(tài)接近58 周齡京粉1 號(hào)蛋雞隨機(jī)分成4 組，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15 只雞，飼喂不同濃度黃芪多糖（主要成分為0、500、1000、2000 mg/kg），預(yù)飼期1 周，正式期6 周。

1.2 飼養(yǎng)管理 飼養(yǎng)試驗(yàn)蛋雞采用3 層半開(kāi)放式立體雞籠，每個(gè)籠3 只雞，每天16 h 光照，8 h 黑暗。飼糧為干粉料，每天7：00、12：00 和18：00 各飼喂一次，撿兩次蛋。自由采食和飲水，試驗(yàn)雞群實(shí)施常規(guī)免疫。試驗(yàn)期間蛋雞自由采食和飲水。

1.3 生產(chǎn)性能與蛋品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)期間記錄試驗(yàn)雞死亡數(shù)和淘汰數(shù)，每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重。計(jì)算其產(chǎn)蛋率、平均日采食量、平均蛋重和料蛋比。

試驗(yàn)周期末，每個(gè)重復(fù)收集5 枚蛋用于檢測(cè)蛋品質(zhì)。用電子游標(biāo)卡尺測(cè)定蛋形指數(shù)，美國(guó)ORKA 蛋殼厚度儀測(cè)定蛋殼厚度；日本蛋殼強(qiáng)度計(jì)測(cè)定蛋殼強(qiáng)度；以色列蛋品質(zhì)分析儀測(cè)定其綜合蛋品質(zhì)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 樣品采集與抗氧化指標(biāo)檢測(cè) 在正式飼養(yǎng)42 d 后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)挑選1 只雞，共24 只。禁食12 h，自由飲水。肝臟同一位置取樣于離心管中，液氮保存，用于抗氧化酶活性和基因表達(dá)檢測(cè)。本試驗(yàn)所用的抗氧化檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自南京建成，其試驗(yàn)步驟根據(jù)相應(yīng)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），采用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)以“平均值”表示，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃芪提取物對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)的影響 由表2可知，與對(duì)照組相比，2000 mg/kg 黃芪提取物組蛋雞產(chǎn)蛋率顯著提高（P＜0.05）。黃芪提取物添加水平對(duì)蛋重?zé)o顯著影響（P＞0.05）。2000 mg/kg 黃芪提取物組較對(duì)照組顯著提高蛋黃比例（P＜0.05）。黃芪提取物對(duì)哈氏單位、蛋殼厚度和蛋殼強(qiáng)度均無(wú)顯著影響（P＞0.05）。

表2 日糧中添加不同水平黃芪提取物對(duì)生產(chǎn)性能的影響

2.3 添加黃芪提取物對(duì)肝臟抗氧化酶活性的影響 由表4可知，隨著飼糧AEP 水平的增加，肝臟中T-SOD 的活性呈二次增長(zhǎng)（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，2000 mg/kg AEP 組肝臟中GSH-Px活性顯著升高（P＜0.05）。隨著飼糧中AEP 添加量的增加，黃芪多糖對(duì)肝臟羥自由基和超氧陰離子清除能力呈線(xiàn)性增加（P＜0.05），MDA 水平呈線(xiàn)性降低（P＜0.05）。

2.4 添加不同濃度黃芪提取物對(duì)肝臟基因表達(dá)的影響 由表4可知，與對(duì)照組相比，2000 mg/kg AEP 組SOD1、SOD2 和GPX4 mRNA 表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）。與500 mg/kg 組相比，2000 mg/kg 組肝臟中SOD1、SOD2 和GPX4 mRNA 表達(dá)量顯著升高（P＜0.05）。Nrf2 mRNA 表達(dá)量隨飼糧中AEP 添加量的增加呈線(xiàn)性增加（P＜0.05）。

表3 日糧中添加不同水平黃芪提取物對(duì)蛋品質(zhì)的影響

表4 不同濃度黃芪提取物對(duì)肝臟抗氧化活力的影響 U/mg prot

表5 不同濃度黃芪提取物對(duì)肝臟基因表達(dá)的影響

3 討論

有研究表明，發(fā)酵黃芪可以顯著提高蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)（Shi 等，2020）。在本研究中，飼糧添加黃芪多糖對(duì)蛋重、飼糧消耗量、料蛋比、哈氏單位和蛋殼強(qiáng)度均無(wú)影響，但可顯著提高產(chǎn)蛋率和蛋黃比例。這與本試驗(yàn)結(jié)果相似，可能原因是AEP 可改善蛋雞抗氧化性能，進(jìn)而增加產(chǎn)蛋率。

在正常生理?xiàng)l件下，自由基和抗氧化酶在體內(nèi)呈動(dòng)態(tài)平衡關(guān)系（Poprac 等，2017）。一旦平衡被打破會(huì)發(fā)生連鎖反應(yīng)，在體內(nèi)誘發(fā)氧化損傷。SOD 和GSH-Px 在預(yù)防氧化應(yīng)激中發(fā)揮了重要作用（Mates 等，1999），SOD 可有效清除體內(nèi)自由基，GSH-Px 可通過(guò)促進(jìn)體內(nèi)H2O2的分解降低活性氧水平（Shang 等，2018）。有研究表明，蛋雞日糧中添加2% 發(fā)酵黃芪可以改善蛋雞血漿SOD、過(guò)氧化氫酶和GSH-Px 的活性（Shi 等，2020）。在本研究中，飼糧添加AEP 可以提高蛋雞肝臟抗氧化酶活性，原因可能是AEP 可通過(guò)改善蛋雞抗氧化酶活性以消除體內(nèi)過(guò)多自由基。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，AEP 可以提高內(nèi)源性抗氧化酶的活性，這與王翠菊等（2021）的結(jié)果相似。其原因是AEP 可以通過(guò)自身氧化來(lái)抵抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷。在高劑量AEP 組中，AEP 可有效清除體內(nèi)活性氧，預(yù)防氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷，減少對(duì)內(nèi)源性抗氧化酶的需求。在低劑量AEP 組中，較低的補(bǔ)充水平可能不足以有效清除自由基，原因是AEP 主要通過(guò)提高內(nèi)源性抗氧化酶活性以維持體內(nèi)活性氧水平的動(dòng)態(tài)平衡。此外，抗氧化酶活性的增加可能與基因表達(dá)的增加有關(guān)（Tiedge 等，1997）。此前有研究表明，添加100 mg/kg 的AEP 可以提高大鼠體內(nèi)SOD2 和過(guò)氧化氫酶的mRNA 表達(dá)水平（Farag 等，2019）。

Nrf2 是基本區(qū)域亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子家族的一員，在調(diào)節(jié)抗氧化反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子中發(fā)揮重要作用（Li 等，2009）。在正常生理?xiàng)l件下，Nrf2與細(xì)胞骨架上的Kelch 樣ECH 相關(guān)蛋白-1 結(jié)合（Nuo 等，2021）。Nrf2 的表達(dá)通過(guò)核易位提高抗氧化酶系統(tǒng)的防御能力（Qi 等，2018）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，Nrf2 的表達(dá)隨飼糧中AEP 水平的增加呈線(xiàn)性增加，抗氧化酶基因的mRNA 表達(dá)在隨AEP升高而增加，一個(gè)原因可能是大劑量添加AEP 能更有效地提高抗氧化酶活力，提高了抗氧化能力。另一個(gè)原因是抗氧化酶的基因mRNA 表達(dá)可能受NRF2 以外因素的調(diào)節(jié)（Mlakar 等，2012）。高劑量AEP 的加入可能通過(guò)上調(diào)Nrf2 mRNA 的表達(dá)來(lái)提高抗氧化酶活性。

綜上所述，飼糧添加黃芪提取物黃芪多糖（AEP）可提高肝臟組織中SOD1、SOD2、GPX1 和GPX4 mRNA 的表達(dá)，進(jìn)而通過(guò)上調(diào)抗氧化酶基因的mRNA 表達(dá)來(lái)提高抗氧化酶活性。本研究結(jié)果表明，飼糧添加AEP 可通過(guò)上調(diào)編碼酶的基因mRNA 表達(dá)來(lái)提高抗氧化酶活性。

4 結(jié)論

黃芪提取物- 黃芪多糖能提高產(chǎn)蛋率、蛋黃比例和蛋雞抗氧化性能，在本試驗(yàn)條件下，黃芪提取物最適添加濃度為2000 mg/kg。