文│鄧祝新 魏莎 覃孝杰 許鵬 李芳芳 李美珍 何復(fù)明 方奕雄 黃麗云 彭燕（廣西壯族自治區(qū)畜禽品種改良站）

廣西武鳴綠世界生態(tài)農(nóng)業(yè)投資有限公司培育的武鳴墨羊是一種適應(yīng)性強(qiáng)、抗病力強(qiáng)、肉質(zhì)細(xì)膩，具有高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的雜交羊品種。武鳴墨羊是廣西隆林黑山羊和努比亞黑山羊多年雜交改良而來(lái)的后代。

為提高武鳴墨羊的經(jīng)濟(jì)效益，充分發(fā)揮優(yōu)良種公羊的種用價(jià)值和配種效能，減少生殖道疾病，筆者挑選具有優(yōu)良種用價(jià)值的公羊進(jìn)行采精和凍精制作，再利用羊的人工授精技術(shù)加快武鳴墨羊的品種改良過(guò)程。

一、墨羊的人工采精

準(zhǔn)備羊采精架，將其放在公羊欄舍的運(yùn)動(dòng)場(chǎng)內(nèi)，固定好采精位置，將一頭發(fā)情母羊牽到采精架內(nèi)保定好。把羊的采精筒設(shè)備消毒干凈、晾干。裝上集精杯，注水加壓（采精筒內(nèi)的水溫控制在40～45℃為宜）、采精筒內(nèi)壁涂上潤(rùn)滑劑待用。將公羊牽引到采精架上進(jìn)行采精，待公羊爬跨時(shí)，將采精筒套上公羊陰莖，讓公羊自己往前沖頂。公羊警惕性比較高，采精動(dòng)作必須要做到穩(wěn)、準(zhǔn)、快。采集精液結(jié)束后放水、放氣壓，迅速將精液送到稀釋間。

二、羊稀釋液的配制

目前使用效果比較好的稀釋液是采用法國(guó)卡蘇公司（BIOXCELL freezing medium for bull semen）的稀釋液，按照1:4的比例配制，使用雙蒸高壓滅菌蒸餾水，等溫混合均勻后放置于35℃的恒溫水浴鍋內(nèi)待用。

三、墨羊鮮精的鏡檢、密度、稀釋過(guò)程

質(zhì)量好的墨羊鮮精濃度一般在10億～20億/毫升。取5微升原精，在電子顯微鏡下觀察，如果看到云霧狀精液游動(dòng)，或者有密密麻麻的精液團(tuán)在蠕動(dòng)，則是非常理想的精液狀態(tài)。一般情況下筆者采集的原精為2～5毫升，第一步以1∶1稀釋?zhuān)缓笕?0微升鏡檢觀察，如果發(fā)現(xiàn)精液還是很濃稠，再次1倍量稀釋。使用卡蘇公司生產(chǎn)的牛羊精子密度儀（AccuRead），選一個(gè)清潔、消毒過(guò)的比色皿，在其中加入2.4毫升的（0.9%）氯化鈉溶液，放置于密度儀中調(diào)零，用移液槍吸取10微升的原精，注入含有2.4毫升氯化鈉溶液的比色皿中，混合搖勻，再放置于密度儀中進(jìn)行密度測(cè)量。為了結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)，筆者對(duì)墨羊凍精的稀釋要求是0.25毫升細(xì)管灌裝，容量為0.185～0.20毫升，總精子數(shù)在3500萬(wàn)，有效精子數(shù)在1200萬(wàn)，活力在0.3以上為合格，這樣的稀釋標(biāo)準(zhǔn)比較符合實(shí)際生產(chǎn)，在羊冷凍精液人工授精方面更有保證。

四、墨羊鮮精的分裝、封口與細(xì)管精液平衡

鮮精分裝：采用0.25毫升的細(xì)管。用一次性注射器從細(xì)管的棉花塞一端抽取精液，在細(xì)管封口端留1.5厘米，最后在細(xì)管留空的最末端使用熱熔封口機(jī)將細(xì)管末端熱熔封口，以不泄漏精液為封口標(biāo)準(zhǔn)。這樣就完成了一支精液的手工分裝，以此類(lèi)推，直到所有羊鮮精液分裝、封口全部完成，并且在細(xì)管上用筆填寫(xiě)、標(biāo)注公羊的信息編號(hào)。將封口完畢的細(xì)管精液按照公羊號(hào)分類(lèi)排版到專(zhuān)用的細(xì)管精液架子上，并且成排疊起來(lái)轉(zhuǎn)移到4℃的恒溫冰箱內(nèi)靜置3～4小時(shí)。

五、墨羊的冷凍精液制作過(guò)程

墨羊的冷凍精液采用熏蒸冷凍法現(xiàn)場(chǎng)制作。所用設(shè)備如下：液氮、液氮容器、泡沫箱、細(xì)管架子、鑷子、凍精提筒等。泡沫箱的規(guī)格是長(zhǎng)80厘米、寬50厘米、高60厘米，配備有泡沫箱蓋子。細(xì)管架的高度是35厘米。

將液氮倒入泡沫箱口30厘米的位置，等待液氮面穩(wěn)定在30厘米處后，從恒溫冰箱內(nèi)取一托已平衡好的墨羊細(xì)管精液與細(xì)管架子一起放入泡沫箱內(nèi)，細(xì)管精液整齊平鋪在細(xì)管架子上，此時(shí)細(xì)管精液與液氮面的實(shí)際高度維持在3～5厘米?？焖偕w上泡沫箱蓋子，壓緊不透氣，靜置等待15分鐘。

15分鐘后揭開(kāi)蓋子，迅速將細(xì)管架子上的細(xì)管精液全部收攏，瞬間浸泡到液氮內(nèi)，直到液氮沸騰穩(wěn)定下來(lái)，第一托細(xì)管精液冷凍結(jié)束，可打包入袋。以此類(lèi)推，一次一托，直到全部冷凍結(jié)束。

六、墨羊凍精的解凍

將水浴鍋溫度恒定在38～39℃。從液氮中取出一支墨羊凍精，空氣浴1秒，然后迅速浸泡到水浴鍋中搖晃解凍30秒以上，直至完全解凍。取出凍精擦干表面水分，減掉封口端，分別取10微升精液于載玻片上，蓋上蓋玻片，對(duì)3個(gè)視野進(jìn)行鏡檢，并進(jìn)行活力的綜合評(píng)分。要求：電子顯微鏡必須要有恒溫載物板進(jìn)行預(yù)熱。因?yàn)檠虻睦鋬鼍罕容^濃稠，也可以考慮在鏡檢時(shí)加入少許解凍液來(lái)觀察。

綜上所述，雖然武鳴墨羊的鮮精密度較高，但冷凍后大部分精子會(huì)有死亡情況。為做好羊的精液冷凍，必須保證羊鮮精活力要強(qiáng)、精液稀釋過(guò)程保持等溫、精液冷凍過(guò)程逐級(jí)降溫。