謝宜名 岳璐茜 李宗莉 張?jiān)戮?孫向紅

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，山東 青島 266555)

臨床上慢性萎縮性胃炎(Chronic atrophic gastritis，CAG)是消化系統(tǒng)常見病、難治病及多發(fā)病，全球發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，患者主要臨床表現(xiàn)為上腹部不適、脹滿、噯氣、納差等[1-3]。CAG伴腸上皮化生是胃癌的癌前病變，目前尚未發(fā)現(xiàn)有特異性藥物可扭轉(zhuǎn)CAG向胃癌的轉(zhuǎn)變。近年來，傳統(tǒng)中醫(yī)藥在治療CAG方面取得了較大進(jìn)展[4-5]，中藥逆萎康(雪膽15 g，黃芪10 g，老龍皮10 g，朱砂七6 g，半枝蓮15 g，海螵蛸10 g)是根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)研制出的中藥制劑，并且已經(jīng)申請了中國專利(專利號201210315363)，經(jīng)過臨床應(yīng)用多年，患者療效顯著[6]，但是部分患者會出現(xiàn)惡心等不良反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)旨在通過對逆萎康組方進(jìn)行優(yōu)化，以消除或減輕患者服用后出現(xiàn)的惡心等的不良反應(yīng)?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料來源

健康昆明種小鼠鼠130只，雌雄不限，體質(zhì)量為18～22 g，由青島市食品藥品檢驗(yàn)研究院動物中心提供。中藥雪膽150 g，黃芪100 g，老龍皮100 g，朱砂七60 g，半枝蓮150 g，海螵蛸100 g，生姜60 g，陳皮60 g，半夏60 g，由青島大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科提供；水楊酸鈉由國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供；高嶺土由北京索萊寶生物科技有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1小鼠急性胃炎模型的制備 選取小鼠10只，每天中午分別以0.2 mL水楊酸鈉乙醇混合溶液(40 mg水楊酸鈉溶于100 mL體積分?jǐn)?shù)為0.60的乙醇溶液中)灌胃1次，每次灌胃后禁食2 h，連續(xù)灌胃10 d，期間觀察小鼠精神及體質(zhì)量變化情況。于第11天處死所有小鼠，取胃黏膜組織，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)40 g/L甲醛溶液固定，石蠟包埋，常規(guī)切片，蘇木精-伊紅(HE)染色，光鏡下觀察胃黏膜組織的病理組織學(xué)改變。

1.2.2組方中致嘔成分的篩選 選取小鼠70只，隨機(jī)分為7組，每組10只。7組小鼠先按照上述方法制備急性胃炎模型，然后分別灌胃雪膽(15 g)煎煮液(雪膽組)、黃芪(10 g)煎煮液(黃芪組)、老龍皮(10 g)煎煮液(老龍皮組)、朱砂七(6 g)煎煮液(朱砂七組)、半枝蓮(15 g)煎煮液(半枝蓮組)、海螵蛸(10 g)煎煮液(海螵蛸組)、生理鹽水(生理鹽水組)，每天中午定時灌胃0.2 mL，灌胃后禁食2 h，連用14 d，每天記錄所有小鼠食用高嶺土和鼠糧的質(zhì)量及小鼠體質(zhì)量，并計(jì)算高嶺土/鼠糧比值。

1.2.3組方優(yōu)化 選取小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只。5組小鼠先均按照上述方法制備急性胃炎模型，然后分別灌胃原逆萎康組方煎煮液(A組)、原逆萎康組方朱砂七減半煎煮液(B組)、原逆萎康組方加生姜(6 g)煎煮液(C組)、原逆萎康組方加陳皮(6 g)煎煮液(D組)、原逆萎康組方加半夏(6 g)煎煮液(E組)，每天中午定時灌胃0.2 mL，灌胃后禁食2 h，連用11 d，每天記錄所有小鼠食用高嶺土和鼠糧的質(zhì)量及小鼠體質(zhì)量，并計(jì)算高嶺土/鼠糧比值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

小鼠急性胃炎模型制備過程中，每次灌胃液灌胃后，小鼠表現(xiàn)為明顯不安，連續(xù)灌胃數(shù)天后小鼠嚴(yán)重萎靡，毛發(fā)灰暗，體質(zhì)量減輕。第11天時處死小鼠，病理切片示小鼠胃黏膜下水腫，甚至部分黏膜出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤(圖1A)、糜爛(圖1B)、淺潰瘍(圖1C)等急性炎癥改變。

A:胃黏膜炎細(xì)胞浸潤，B：胃黏膜糜爛，C：胃黏膜淺潰瘍，HE染色，200倍

7組急性胃炎模型制備成功的小鼠再連續(xù)灌胃各組藥物14 d后，雪膽組、黃芪組、老龍皮組、朱砂七組、半枝蓮組、海螵蛸組、生理鹽水組小鼠食用高嶺土/鼠糧的比值分別為1.58±1.42、1.92±1.13、0.98±0.73、5.40±2.49、1.17±1.75、2.17±1.40、1.81±0.83，單因素方差分析結(jié)果顯示，7組小鼠食用高嶺土/鼠糧的比值比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=13.92，P<0.05)；與生理鹽水組比較，僅朱砂七組小鼠該比值差異具有顯著性(P<0.05)，其他組小鼠該比值差異無顯著性(P>0.05)。

5組急性胃炎模型制備成功的小鼠再連續(xù)灌胃各組逆萎康藥物11 d后，A～E組小鼠食用高嶺土/鼠糧的比值分別為9.34±4.95、6.10±2.99、5.65±4.57、3.33±1.67、6.50±3.59，單因素方差分析結(jié)果顯示，5組小鼠食用高嶺土/鼠糧的比值比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.63，P<0.05)；D組小鼠該比值與A組比較，差異有顯著性(P<0.05)，其他組小鼠該比值比較差異無顯著性(P>0.05)。

3 討 論

CAG是一種以胃黏膜固有腺體數(shù)量減少或消失為病理特點(diǎn)的消化系統(tǒng)常見病，世界衛(wèi)生組織已經(jīng)認(rèn)識到CAG與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[7-9]。因此，此病被定義為胃癌的癌前病變，近年來本病的發(fā)病率呈逐年上升趨勢[10-12]。

中醫(yī)認(rèn)為，胃炎多屬中醫(yī)學(xué)“胃脘痛”“痞證”范疇，其病機(jī)主要由脾胃升降失司、寒熱虛實(shí)錯雜、氣機(jī)痞塞所致，氣機(jī)升降不利，胃氣不降而生熱，中焦痞塞，脾氣不升而生寒，飲邪擾胃而作嘔，胃氣虛弱而上下不能斡旋而作痛[13]。中藥逆萎康組方(雪膽15 g、黃芪10 g、老龍皮10 g、朱砂七6 g、半枝蓮15 g、海螵蛸10 g)正是根據(jù)CAG的病機(jī)而設(shè)計(jì)，其中雪膽具有清熱解毒，健胃止痛之功效，可消除胃氣不降而生之熱，緩解疼痛，消除癥狀為主藥；黃芪補(bǔ)氣升陽，利水消腫，老龍皮健脾利水，兩者助主藥補(bǔ)氣健脾為輔藥；朱砂七、半枝蓮清熱祛毒，利水消腫，朱砂七理氣活血止血通絡(luò)消積；海螵蛸制酸、斂瘡，收斂止血，可以中和胃酸以達(dá)到制酸止痛之目的，本治法以益氣健脾、清胃熱祛瘀毒為主，兼以補(bǔ)脾理氣活血制酸，標(biāo)本兼治，虛實(shí)共調(diào)[14-15]。全方共湊健脾益氣、清熱導(dǎo)滯、和胃止痛之功，前期的臨床研究和藥理試驗(yàn)也證實(shí)逆萎康組方對胃黏膜有明顯的保護(hù)作用[16]，臨床應(yīng)用多年，療效也非常顯著，但部分患者會出現(xiàn)惡心等不良反應(yīng)情況。

惡心是一種內(nèi)臟不舒適的感覺，最終以嘔吐達(dá)到高潮，目前國內(nèi)外應(yīng)用較多的嘔吐動物模型主要有雪貂、水貂、小型豬、錢鼠類等異食癖模型，其中雪貂是目前公認(rèn)較為理想的嘔吐模型動物。錢鼠是目前具有與人相似嘔吐現(xiàn)象的體質(zhì)量最小的哺乳動物嘔吐模型[17-18]。嚙齒類動物雖然沒有嘔吐反射，但在受到放射線照射、旋轉(zhuǎn)、催吐劑等能引起嘔吐的刺激時，表現(xiàn)出異食癖行為，研究證明其異食行為等同于其他種屬動物的嘔吐行為，因而可以將該異食癖行為視為惡心嘔吐反應(yīng)的表現(xiàn)，因該類動物易得、操作方便,目前較為常用[19-20]。本實(shí)驗(yàn)中使用常用的水楊酸鈉乙醇混合液灌胃小鼠[21-22]，連續(xù)10 d，病理切片可見小鼠胃黏膜下水腫，甚至部分黏膜出現(xiàn)炎細(xì)胞浸潤、糜爛、淺潰瘍等急性炎癥改變，說明小鼠急性胃炎模型制作成功。

為確定組方中的致嘔成分，本研究首先制備小鼠急性胃炎模型，然后將組方中的6種成分分別煎煮后灌胃小鼠，結(jié)果顯示與生理鹽水組比較，僅朱砂七組小鼠食用高嶺土/鼠糧的比值差異具有顯著性，其他組小鼠食用高嶺土/鼠糧的比值差異均無顯著性，因此可初步判斷原組方中引起惡心嘔吐的主要成分是朱砂七，以此為基礎(chǔ)進(jìn)行后續(xù)的組方優(yōu)化。

中醫(yī)研究發(fā)現(xiàn)，生姜、陳皮和半夏均具有止嘔的作用[23-25]，生姜抗嘔吐機(jī)制可能與參與調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)P物質(zhì)和5-HT有關(guān)[26]；陳皮對動物胃腸運(yùn)動主要表現(xiàn)為抑制作用，其抑制效應(yīng)主要通過膽堿能受體、5-HT受體、腎上腺素受體介導(dǎo)及對平滑肌的直接抑制作用[27]；半夏止嘔可能與其提高Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)水平有關(guān)[28]。因此，本研究采取的逆萎康組方優(yōu)化方案如下：在原逆萎康組方的基礎(chǔ)上減少朱砂七的含量，或者分別加入生姜、陳皮、半夏(姜半夏)，共獲得4組優(yōu)化組方，分別是原逆萎康組方朱砂七減半、原逆萎康組方加生姜6 g、原逆萎康組方加陳皮6 g、原逆萎康組方加半夏6 g。本研究首先制備小鼠急性胃炎模型，然后分別將4組優(yōu)化組方煎煮后灌胃小鼠，結(jié)果顯示，與A組相比較，D組小鼠食用高嶺土/鼠糧的比值差異有顯著性，其他組小鼠食用高嶺土/鼠糧的比值差異均無顯著性，因此可判斷原逆萎康組方中加入陳皮的效果最好。分析原因可能為陳皮性溫，可中和朱砂七寒性，并抑制動物的胃腸運(yùn)動。朱砂七導(dǎo)致惡心嘔吐的原因，可能與朱砂七性寒有關(guān)，原逆萎康組方朱砂七的劑量減半后，其致惡心程度并沒有明顯改善，因此新組方中仍保留朱砂七的原來劑量。

總之，本研究通過模型小鼠篩選出逆萎康組方中導(dǎo)致惡心的主要成分，并優(yōu)化了逆萎康組方，配制出治療慢性萎縮性胃炎的新組方。在新組方中加入陳皮后是否會影響其原有療效，或者對CAG患者是否更加有效，還需后續(xù)進(jìn)行更深入的研究，為逆萎康臨床應(yīng)用的安全性與有效性提供更多的實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。

利益沖突聲明：所有作者聲明不存在利益沖突。

ConflictsofInterest：All authors disclose no relevant conflicts of interest.

倫理批準(zhǔn)和動物權(quán)利聲明：本研究涉及的所有動物實(shí)驗(yàn)均已經(jīng)通過青島大學(xué)附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物福利與倫理委員會的審核批準(zhǔn)(文件號AHQU-MAL20180328)。

EthicsApprovalandAnimalRight：All experimental animal protocols in this study were reviewed and approved by The Animal Care and Welfare Committee of The Affiliated Hospital of Qingdao University(Approval Letter No.AHQU-MAL20180328).

作者貢獻(xiàn)：謝宜名、孫向紅、李宗莉參與了研究設(shè)計(jì)；謝宜名、岳璐茜、張?jiān)戮齾⑴c了論文的寫作和修改。所有作者均閱讀并同意發(fā)表該論文。

Contributions：The study was designed byXIEYiming,SUNXianghong, andLIZongli.The manuscript was drafted and revised byXIEYiming,YUELuxi, andZHANGYuejun.All the authors have read the last version of the paper and consented submission.