鄧沛汶 潘俊均 修寧寧 隋 洪（通訊作者）

（東莞康華醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 東莞 523000）

隨著抗生素的發(fā)展和臨床的廣泛使用，在兒童急性呼吸道感染（Acute respiratory infection，ARI）中由病毒引起感染的比例明顯高于細(xì)菌感染[1]。同時(shí)已有報(bào)道，引起呼吸道感染的病毒中可在不同區(qū)域和季節(jié)呈現(xiàn)一定的差異[2]。通過(guò)對(duì)兒童在一年四季中感染呼吸道病毒的主要類(lèi)型進(jìn)行研究，可及時(shí)了解到本地區(qū)兒童呼吸道病毒感染情況，不僅給臨床提供診斷依據(jù)，同時(shí)可提前對(duì)該種病毒進(jìn)行預(yù)防以減少感染，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集本院兒內(nèi)科和新生兒科2019年1月至2019年12月因呼吸道感染而住院兒童3953例，其中男孩2404例，女孩1549例。一年四季分組如下：春季公歷3～5月，夏季公歷6～8月，秋季公歷9～11月，冬季公歷11月～次年2月。

1.2 儀器與試劑：奧林巴斯BX51 熒光顯微鏡，試劑盒Diagnostic Hybrids 7 項(xiàng)呼吸道病毒檢測(cè)試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集與處理：經(jīng)培訓(xùn)后由護(hù)士對(duì)當(dāng)天入院兒童進(jìn)行采集標(biāo)本，采樣耗材使用美國(guó)進(jìn)口絨植拭子從鼻孔進(jìn)入后水平深入到鼻咽部順時(shí)針旋轉(zhuǎn)一圈后取出拭子裝進(jìn)配套管中迅速送檢。標(biāo)本接收后立即加入3mL 1X PBS 細(xì)胞保存液。

1.3.2 細(xì)胞玻片準(zhǔn)備：將加了細(xì)胞保存液的標(biāo)本放置渦旋振蕩器上充分震蕩10 秒，使絨植拭子上細(xì)胞脫落，用鑷子取出拭子丟棄，500g 離心5min，吸棄上清液，重復(fù)以上步驟洗滌2 次。在沉淀中加入500mL 細(xì)胞保存液反復(fù)吸吹以懸浮細(xì)胞層。每孔吸取25uL 加到8 孔玻片，小心放到40℃加熱板中烘干。待玻片全干后，放入預(yù)先冷卻丙酮中浸泡7min，進(jìn)行固定細(xì)胞。

1.3.3 免疫熒光染色：試劑盒中七種試劑分別滴一滴約25uL 到每一個(gè)孔中，留一孔不加任何試劑作為空白對(duì)照，將玻片放入黑色盒中放到37℃培養(yǎng)箱中孵育20min。40X PBS 洗滌液小心沖洗，再用反滲水沖洗一次，放到加熱板中烘干。滴上封閉油，蓋上蓋玻片，在暗房里使用熒光顯微鏡觀察，顯微鏡的激發(fā)峰490nm，發(fā)射峰為520nm。

1.3.4 結(jié)果判斷：每批次使用試劑盒配套的質(zhì)控片，與標(biāo)本同樣處理。200 倍顯微鏡下觀察，每孔中每視野找到≥2 個(gè)綠色熒光細(xì)胞即為陽(yáng)性，否則為陰性。陽(yáng)性細(xì)胞可被相應(yīng)的FITC 熒光素標(biāo)志的單克隆抗體識(shí)別，在細(xì)胞核和（或）細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)果綠色熒光，F(xiàn)luA、FluB 為胞核型或胞漿型，ADV 為顆粒樣的胞漿型、RSV 是胞漿型、PIVⅠ、Ⅱ、Ⅲ為胞漿型，陰性細(xì)胞被Evans Blue 染成紅色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：運(yùn)用SPSS12.0 軟件包處理數(shù)據(jù)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 七種病毒的檢出情況：在3953例患兒中七種病毒總檢出率是29.70%，男孩檢出率29.95%，女孩檢出率29.31%，兩組差異比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.185，P=0.667），詳見(jiàn)表1。

表1 七種呼吸道病毒的檢出情況

2.2 不同季節(jié)病毒的檢出情況：四個(gè)季度中春季檢出率28.35%，夏季檢出率24.80%，秋季檢出率57%，冬季檢出率44.79%，不同季節(jié)檢出率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=146.038，P＜0.05），詳見(jiàn)表2。

表2 不同季節(jié)呼吸道病毒的檢出情況

3 討論

在兒科里，由呼吸道病毒引起的ARI 很常見(jiàn)，而且ARI 也是引起嬰幼兒死亡的主要原因之一。有報(bào)道[3]，在兒童中由病毒引起呼吸道感染占70%～80%。目前，引起ARI 最常見(jiàn)病毒類(lèi)型有腺病毒（ADV）、甲型流感（FluA）、乙型流感（FluB）、副流感1 型（PIVⅠ）、副流感2 型（PIVⅡ）、副流感3 型（PIVⅢ）、合胞病毒（RSV）。呼吸道病毒的檢出方法有多種，病毒的分離培養(yǎng)是診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，本實(shí)驗(yàn)使用的直接免疫熒光法已廣泛在臨床試驗(yàn)室使用。

本研究主要收集東莞本地區(qū)2019年1月至2019年12月因呼吸道感染而入院的患兒共3953例，7 種呼吸道病毒的總檢出率為29.70%。本研究中3953例患兒在四個(gè)季節(jié)中陽(yáng)性檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中冬季的檢出率最高（44.79%），秋季最低（20.57%）。冬季的主要檢出類(lèi)型是FluA占冬季總檢出率51.80%，其次是RSV 占32.61%。流感病毒屬正粘病毒科，有A、B、C 三種類(lèi)型，A 型可引起大范圍的疾病傳播。流感病毒的感染有明顯的季節(jié)性，F(xiàn)luA 主要發(fā)生在冬季，易感人群集中在1～3歲。

不同地區(qū)兒童感染呼吸道病毒類(lèi)型有差異，本地區(qū)兒童感染病毒的高發(fā)季節(jié)是冬、春季，主要人群為＜3歲的小齡兒童，RSV 主要感染病毒類(lèi)型，1～3歲年齡階段感染率最高，3～12歲隨著年齡增長(zhǎng)，感染率降低。隨著社會(huì)環(huán)境改變，居住條件不同，人口遷移、一年四季環(huán)境氣候等多種因素，兒童感染呼吸道病毒類(lèi)型的改變也會(huì)有一定改變，定期對(duì)兒童呼吸道病毒感染類(lèi)型數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，可加深對(duì)本地區(qū)病毒流行特點(diǎn)的了解與認(rèn)識(shí)，可給臨床提供及時(shí)準(zhǔn)確診斷依據(jù)，從而給予患兒及時(shí)有效的治療，為患者爭(zhēng)取做到早期診斷，早期治療，同時(shí)也有助于防止抗生素的濫用[4]，減少患者醫(yī)療負(fù)擔(dān)、監(jiān)控疾病的大規(guī)模感染。