李大偉，劉正平，陳倩倩，毛楷凡，張岱州*

（1. 山東省藥學(xué)科學(xué)院 國家藥監(jiān)局藥物制劑技術(shù)研究與評價重點實驗室，山東 濟南 250101；2. 山東福瑞達醫(yī)藥集團有限公司 山東省黏膜與皮膚給藥技術(shù)重點實驗室，山東 濟南 250101）

伊潘立酮片原研藥物由美國Norvatis制藥公司研發(fā)，Vanda制藥公司生產(chǎn)，F(xiàn)DA于2009年5月6日批準上市，商品名為FANAPT[1]。伊潘立酮化學(xué)名為4’-[3-[4-（6-氟-1, 2-苯并異噁唑-3-基）哌啶基]丙氧基]-3’-甲氧基苯乙酮[2]，分子式為C24H27FN2O4，相對分子質(zhì)量426.48。伊潘立酮在三氯甲烷或二甲基甲酰胺中易溶，在乙腈中略溶，在甲醇或乙醇中微溶，在水中不溶。

FDA批準上市的FANAPT（Iloperidone Tablets）為口服無包衣片劑，規(guī)格分別為1 mg、2 mg、4 mg、6 mg、8 mg、10 mg、12 mg，用于治療成人精神分裂癥的急性發(fā)作[3]。根據(jù)FDA網(wǎng)站公布的FANAPT申報資料（臨床藥理學(xué)和生物藥劑學(xué)部分）中披露的信息，伊潘立酮為BCS分類II類，即低溶解性、高滲透性藥物。國內(nèi)目前尚無伊潘立酮片上市。本研究以6 mg片劑為研究對象，研究了原研和自制伊潘立酮片的溶出曲線，并對溶出曲線的區(qū)分力進行了研究，以為開展伊潘立酮片的仿制研究提供數(shù)據(jù)支持。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

8453型紫外分光光度計（美國Agilent公司）；SF-130B型粉碎機（上海天和制藥機械有限公司）；Retsch PM100型行星高能球磨儀（德國Retsch公司）；J-20型氣流粉碎機（意大利Tecnologia Meccanica）；ZP-21型旋轉(zhuǎn)壓片機（上海天和制藥機械有限公司）；PL203型精密天平，Mettler Toledo AT261型分析天平（梅特勒-托利多公司）；Sotax AT 7 smart型自動取樣溶出儀（瑞士SOTAX公司）；Mastersizer 2000激光粒度儀（英國馬爾文儀器有限公司）。

1.2 試藥

FANAPT伊潘立酮片（規(guī)格：6 mg，批號：V0227A001S4，Vanda Pharmaceuticals Inc.）；伊潘立酮對照品（山東省藥學(xué)科學(xué)院，批號：20170915）；伊潘立酮原料藥（山東省藥學(xué)科學(xué)院，批號：20180305）；伊潘立酮片（山東省藥學(xué)科學(xué)院，批號：20180509，20180511，2018051501，2018051502，2018051503，處方編號：1～5）；曲拉通，鹽酸，結(jié)晶乙酸鈉，磷酸二氫鉀，甲醇（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 pH值-溶解度曲線測定

按《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導(dǎo)原則》[4]中“溶出介質(zhì)配制方法”配制 pH值分別為 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 的溶出介質(zhì)。取過量伊潘立酮原料藥，氣流粉碎，置8支具塞試管中，分別加入各pH值的溶出介質(zhì)25 ml，置37 ℃水浴振蕩過夜，使之形成過飽和溶液，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，加相應(yīng)的溶出介質(zhì)稀釋，照紫外-可見分光光度法[5]，測定其吸收度，按外標法計算伊潘立酮在不同pH溶液中的溶解度，繪制伊潘立酮在不同pH值條件下的溶解度曲線，結(jié)果見圖1。

圖1 伊潘立酮的pH值-溶解度曲線

2.2 溶出曲線測定

2.2.1 原研片溶出曲線測定 取伊潘立酮原研片6片，按《中國藥典》2020年版四部通則中溶出度與釋放度測定法第二法（槳法）[5]測定溶出度。經(jīng)脫氣處理的溶出介質(zhì)的體積為500 ml，轉(zhuǎn)速為50 r/min，水溫為37 ℃，在規(guī)定的時間點取溶液10 ml（同時補充10 ml 溶出介質(zhì)），濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取伊潘立酮原料藥約24 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加無水甲醇約80 ml，超聲3 min，加無水甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。照紫外-可見分光光度法[5]，以水做空白，在229 nm（溶出介質(zhì)為0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液和水）或276 nm（溶出介質(zhì)為 pH 4.5醋酸-醋酸鈉緩沖液）處測定對照品溶液和供試品溶液的吸收度，按外標法計算每個時間點每片的溶出度和平均溶出度及相對標準偏差（RSD）。按下式計算溶出度。測定結(jié)果見表1。

式中，A為供試品溶液的吸光度；Wt為對照品質(zhì)量；S為供試品溶液的稀釋倍數(shù)；At為對照品溶液的吸光度；W為供試品標示量；St為對照品溶液的稀釋倍數(shù)。

由表1可見，原研產(chǎn)品在0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中，15 min溶出度均達85 %以上，屬于快速溶出，其區(qū)分力較弱；而在純化水中，其溶出度在120 min達85 %以上，在180 min達到完全溶出，溶出曲線呈平緩上升趨勢，可能具有較好的區(qū)分力，需通過試驗確認[6-9]。

表1 FANAPT（6 mg）的溶出曲線

2.2.2 不同粒度原料藥制備片劑溶出曲線的測定 伊潘立酮屬BCS分類2類，即低溶解性、高滲透性藥物，因此其原料藥的粒度為體內(nèi)吸收的限速步驟。分別采用萬能粉碎法、球磨粉碎法、氣流粉碎法得到不同粒度的原料藥，使用與原研產(chǎn)品相同種類的輔料制備自制片，并測定溶出曲線，以驗證各溶出介質(zhì)的區(qū)分力。

2.2.2.1 原料藥粒徑測定 分散介質(zhì)：水；分散劑：2 %曲拉通溶液；試驗條件：循環(huán)速率為220 r/min，超聲強度為15 %，超聲時間：60 s。

取少量樣品，加2 %曲拉通溶液后不斷攪拌，待攪拌成混懸液后，當背景正常時，取少量進行測定。遮光度為5 %～20 %，超聲60 s后測定。不同粉碎方法處理的原料藥粒徑測定結(jié)果見表2。

表2 不同方法粉碎后原料藥的粒徑測定結(jié)果/μm

2.2.2.2 自制片溶出曲線測定 按2.2.1項下條件及方法測定不同粒徑原料藥制備的伊潘立酮自制片溶出曲線，結(jié)果見表3。

2.2.2.3 溶出曲線相似性判定[10-11]根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度實驗技術(shù)指導(dǎo)原則》，處方1，2，3，4，5及原研產(chǎn)品FANAPT在0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中15 min時，溶出度均已超過85 %，判定為溶出行為相似。

對各處方在水中的溶出曲線分別與FANAPT進行f2相似因子的計算，當兩條溶出曲線f2值不小于50時，可認為溶出曲線相似。

式中，Rt為t時間參比樣品平均溶出量；Tt為t時間受試樣品平均溶出量；n為取樣時間點的個數(shù)。

選取時間點為30，60，90，120 min，經(jīng)計算，各處方的f2值分別為22.6，23.0，40.2，75.9，55.6。由結(jié)果可知，各處方在0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出曲線相似，無顯著差異，而在純化水中，經(jīng)f2因子比較，處方1、處方2和處方3均與參比制劑溶出曲線不相似，表明純化水作為溶出介質(zhì)可有效區(qū)分產(chǎn)品質(zhì)量，當產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性發(fā)生變化時，可有效檢出。

3 討論

仿制藥開發(fā)以原研產(chǎn)品作為參比制劑，在上市前需進行人體生物等效性試驗。由于成本及時間的原因，在開展生物等效性試驗之前，一般需要先通過體外評價來確定處方工藝。溶出曲線研究是固體制劑體外等效性評價的重要手段，而溶出曲線的區(qū)分力對于保證自研產(chǎn)品與原研產(chǎn)品的質(zhì)量和療效一致性尤為關(guān)鍵。根據(jù)參考文獻[6]，具有區(qū)分力的溶出曲線應(yīng)為較平緩上升的曲線，太快和太慢的溶出條件其區(qū)分力均不好。根據(jù)溶出曲線研究結(jié)果，伊潘立酮片在低pH條件下溶出較快，在近中性條件下溶出曲線較為平緩，因此選定純化水作為溶出介質(zhì)時，其區(qū)分力較好。伊潘立酮為BCS分類2類，即低溶解性、高滲透性，這類藥物的粒度對于體內(nèi)吸收起決定作用。研究中使用不同粒度范圍的伊潘立酮制備片劑，其在純化水介質(zhì)中的溶出行為存在明顯差異。因此，該條件下的體外溶出試驗可有效保證產(chǎn)品質(zhì)量，同時對生物等效性試驗具有指導(dǎo)意義。

綜上，本研究通過對原研產(chǎn)品進行溶出曲線研究，初步確定了有區(qū)分力的溶出條件，并通過制備含不同粒度范圍原料藥的自制片并測定溶出曲線進行了驗證。結(jié)果表明，以純化水為溶出介質(zhì)，槳法，50 r/min的溶出條件對本品的質(zhì)量具有良好區(qū)分力。