張銳毅，王 超

（四川衛(wèi)生康復職業(yè)學院，四川 自貢 643000）

0 引言

人口老齡化加劇了對生產(chǎn)高營養(yǎng)價值食品的需求，尤其是新鮮水果和蔬菜［1］。但是，在這些新鮮水果和蔬菜中可能會殘留大量的農(nóng)藥。比如像印度這樣的發(fā)展中國家，農(nóng)業(yè)中大量使用殺蟲劑已經(jīng)成為一種非常普遍的做法，這些有害農(nóng)藥在水果和蔬菜中的殘留濃度顯著增加［2］。食品中殘留的農(nóng)藥對人類具有潛在的毒害，可能會導致嚴重的健康問題。在不同的農(nóng)藥暴露途徑中，最常見的暴露途徑是直接食用的生鮮食品［3］。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥具有穩(wěn)定性和高效性的特點，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛應用于病蟲害的防治［4］。例如，氯氰菊酯在果蔬農(nóng)產(chǎn)品的病害蟲防治方面得到廣泛應用，因其具有殺蟲能力強、藥效持久的優(yōu)點［5］。但是長期、廣泛使用后，擬除蟲菊酯類殺蟲劑會大量殘留于食品和周圍的環(huán)境，這會給人體的健康和自然環(huán)境帶來嚴重危害。擬除蟲菊酯類農(nóng)藥會影響人體的生殖器官和激素水平，引起腦組織的應激反應等［6-7］，所以嚴格把控新鮮水果和蔬菜以及由新鮮農(nóng)產(chǎn)品制成的食品中擬除蟲菊酯的殘留量至關重要［8］。

生鮮食品的農(nóng)藥殘留檢測是生鮮食品安全控制的一個重要環(huán)節(jié)，微生物酶技術廣泛應用于谷物、肉類、果蔬的加工與檢測。酶聯(lián)免疫分析法、化學發(fā)光免疫分析法等由于具有靈敏度高、特異性強等優(yōu)點，在食品安全的檢測中得到廣泛應用［9-10］。其中，食品檢測中常用的方法有酶聯(lián)免疫分析法和酶生物傳感器法，前者可用于果蔬中農(nóng)藥殘留的快速檢測，并對農(nóng)藥成分進行分析［11］，這種方法方便快捷、檢測成本低，對于保質(zhì)期要求較高的生鮮食品農(nóng)藥安全檢測，具有很好的實用性［12］。有學者將ELISA技術運用于尿白蛋白的檢驗，提出了一種尿白蛋白的競爭性酶聯(lián)免疫吸附方法（CELISA）［13］。袁利鵬等［14］建立了一種適用于水產(chǎn)品中組胺檢測的間接競爭性酶聯(lián)免疫分析方法（icELISA），該檢測方法的準確性和靈敏度高。在奶類制品中青霉素G殘留量的檢測中，王玉珍等［15］建立了一種有較高靈敏度和較強特異性的icELISA方法。Tang等［16］建立了一種競爭間接酶聯(lián)免疫吸附試驗（icELISA）和多試紙傳感器檢測方法，可以快速準確地對真菌毒素和殺蟲劑進行檢測。一種較新的免疫分析技術—開放式三明治酶聯(lián)免疫分析法可以對小分子物質(zhì)，如藥物、激素等，進行非競爭性的檢測，該方法靈敏度高、檢測范圍廣［17］。為了得到更準確的結果，在酶聯(lián)免疫法進行檢測時可以結合高效液相色譜法進行結果確認。通過氣相色譜/液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術可以檢測在水果和蔬菜的殺蟲劑殘留物，利用HPLC-MS液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法和酶聯(lián)免疫法可以對檢測人血清中的25-羥基維生素D［18-19］。在食品安全檢測中，可以利用生物酶與納米材料將信號進行放大來提高分析檢測的性能［20］。Ji等［21］利用介孔硅納米球制備了一種新型的酶—抗體偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物放大了標記信號，大大提高了酶聯(lián)免疫吸附試驗在檢測食品中農(nóng)藥和獸藥殘留量的準確度。

在此次研究中，利用間接競爭ELISA檢測方法對擬除蟲菊酯類農(nóng)藥及其在人體中的代謝產(chǎn)物進行檢測，并對該方法進行優(yōu)化，為生鮮食品中的農(nóng)藥殘留檢測提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀 器：AMR-100酶 標 儀（杭 州）、UV-5100紫外-可見光分光光度計（北京）、96孔白色發(fā)光板（深圳）、LYNX4000高速冷凍離心機（Thermo）、ZHP100M型恒溫振蕩培養(yǎng)箱（江蘇）。

試劑：擬除蟲菊酯對照品（西安，99%）、擬除蟲菊酯單克隆抗體（無錫）、HRP標記的羊抗鼠IgG抗體（北京索萊寶）、雞卵清蛋白（OVA，Sigma，98%）、3，3′，5，5′-四甲基聯(lián)苯胺（廣州，99%）、3-苯氧基苯甲酸（3-PBA，日本，98%）、吐溫-20（廣州，96%）、明膠、吐溫-20（廣州，96%），咪唑（Sigma）、多聚辣根過氧化物（HRP）酶標記的鏈霉親和素（S-HRP，Thermo）。其余試劑均來自國藥集團，純度為分析級。ELISA緩沖溶液的配制與參考文獻方法相同［22］。顯色液TMB為實驗室前期自制。

1.2 試驗方法

1.2.1 擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的間接競爭ELISA檢測方法

1.2.1.1 包被抗原的合成與鑒定 雞卵清蛋白與3-苯氧基苯甲酸分別通過混合酸酐法與EDC法進行偶聯(lián)制備包被抗原。反應摩爾比（3-苯氧基苯甲酸∶雞卵清蛋白）分別為30∶1、45∶1和60∶1。使用200～400 nm之間的UV波長檢測雞卵清蛋白、3-苯氧基苯甲酸和包被抗原。

1.2.1.2 包被抗原、抗體親和常數(shù)的測定 各包被抗原、抗體的親和常數(shù)值Ka是利用非競爭ELISA方法進行測定的。將抗原和抗體分別稀釋至4和8個濃度，濃度1～10 μg/mL，進行兩兩交叉分布測定，每組平行3次。利用公式（1）計算Ka值。

式（1）中，每個數(shù)據(jù)組中2種包被抗原的濃度之比表示為n，n＞1；當OD450nm降至一半時所對應的抗體濃度分別表示為[Ab′]t和[Ab]t，單位為mol/L。

1.2.1.3 間接競爭ELISA方法的具體操作過程 包被：加入包被抗原，100 μL/孔，在37 ℃的恒溫環(huán)境下水浴2 h，然后用洗滌液洗滌3次，250 μL/孔。封閉：加入封閉液，100 μL/孔，在37 ℃的恒溫環(huán)境下封閉2 h，然后用洗滌液洗滌3次，250 μL/孔。競爭反應：先后加入擬除蟲菊酯對照品和抗體，50 μL/孔，在37 ℃的恒溫環(huán)境下水浴30 min，然后用洗滌液洗滌3次，250 μL/孔。顯色：將新鮮配制的顯色液置于37 ℃的恒溫環(huán)境下避光反應15 min，100 μL/孔，然后加入終止液50 μL/孔。測定：樣品的OD450nm值用酶標儀來進行測定。

1.2.1.4 建立擬除蟲菊酯標準抑制曲線 擬除蟲菊酯在不同質(zhì)量濃度下的OD450nm值采用間接競爭ELISA法進行測定，利用Origin軟件將檢測得到的結果進行Logistics函數(shù)擬合，可以得到擬除蟲菊酯的標準抑制曲線，利用標準抑制曲線計算擬除蟲菊酯的抑制中濃度（IC50）。

1.2.1.5 擬除蟲菊酯的交叉反應試驗 利用標準抑制曲線計算出其他擬除蟲菊酯的抑制中濃度，利用公式（2）計算抗體與所有擬除蟲菊酯和半抗原的交叉反應率（Cross-reactivity，CR）。

式（2）中，P代表IC50時的基準物質(zhì)；A代表IC50時的類似物。

1.2.2 擬除蟲菊酯代謝產(chǎn)物3-苯氧基苯甲酸的檢測方法 在前期獲得3-苯氧基苯甲酸納米抗體的基礎上，進行3-苯氧基苯甲酸納米抗體生物素化試驗。用碳酸緩沖液將包被原稀釋至試驗所需的濃度，向酶標板中以100 μL/孔的劑量加入稀釋溶液，并在37 ℃恒溫水浴中放置過夜。第2天用300 μL含0.005%吐溫-20的咪唑—磷酸鹽緩沖溶液（IPBS）洗滌2次，然后將酶標板置于吸水紙上拍干。接下來，在酶標板上加入蛋白封閉液120 μL/孔，置于37 ℃恒溫水浴中靜置3 h，然后倒掉液體并在吸水紙上將酶標板拍干，在37 ℃溫度下進行干燥后用于試驗或者置于4 ℃環(huán)境下密封保存?zhèn)溆谩Ｓ眠溥颉姿猁}緩沖溶液將3-苯氧基苯甲酸納米抗體和3-苯氧基苯甲酸標準品稀釋至試驗中所需的濃度，將各為50 μL的抗體稀釋液和3-苯氧基苯甲酸標準品溶液加入至酶標板中，在37 ℃恒溫水浴中孵育40 min，然后將酶標板洗滌5次后置于吸水紙上拍干。用咪唑—磷酸鹽緩沖溶液將S-HPR稀釋至試驗所需的濃度，向酶標板中加入100 μL/孔，在37 ℃恒溫水浴中孵育30 min，然后將酶標板洗滌5次后置于吸水紙上拍干。向酶標板中加入100 μL/孔的TMB顯色液，在37 ℃恒溫水浴中反應10 min，然后向每孔中加入10% H2SO4終止液50 μL，用酶標儀測定酶標板各孔在波長450 nm處的吸光值。

2 結果與分析

2.1 擬除蟲菊酯類農(nóng)藥檢測方法結果與分析

2.1.1 包被抗原的鑒定 3-苯氧基苯甲酸作為包被半抗原是根據(jù)擬除蟲菊酯的母核結構來進行選取的。與雞卵清蛋白（277 nm）相比，包被抗原的特征吸收波長（288 nm）出現(xiàn)紅移，這是由于3-苯氧基苯甲酸（291 nm）起生色團作用造成的，掃描結果如圖1所示。包被抗原的特征吸收波長出現(xiàn)紅移表明包被抗原偶聯(lián)成功。

圖1 包被抗原紫外掃描圖譜

2.1.2 包被抗原的篩選

2.1.2.1 包被抗原與抗體最佳工作濃度的測定 ELISA中包被抗原和抗體的最佳工作濃度采用方陣滴定法確定。根據(jù)檢測方法的要求，最佳工作濃度為所有濃度中抗原、抗體用量較少且1.2≤OD450nm≤1.5。經(jīng)過測定，可以得到抗體和包被抗原的最佳工作濃度，抗體為0.25 μg/mL，包被抗原的特性見表1。

2.1.2.2 包被抗原與抗體的親和常數(shù)測定 抗原與抗體結合力的大小可以用親和常數(shù)Ka來反映，一般認為抗體的親和常數(shù)在107～1012L/mol范圍內(nèi)時親和力較高。6種包被抗原與抗體的Ka值結果見表1，親和常數(shù)均大于107L/mol ，表明抗原與抗體結合能力強。在試驗范圍內(nèi)，反應摩爾比越大，親和常數(shù)越大，親和力越高。此外，對通過不同方法制備的包被抗原與抗體親和力進行比較，混合酸酐法比EDC法中的親和力更高。

表1 包被抗原的最佳工作濃度與親和常數(shù)

2.1.2.3 交叉反應篩選最佳包被抗原 交叉反應的結果通過間接競爭ELISA方法進行測定。在所有的包被抗原中，MA2包被可以識別8種擬除蟲菊酯，數(shù)量最多且靈敏度最高。對包被抗原中的各項指標進行綜合比較可得，偶聯(lián)方法和反應比對Ka值、工作質(zhì)量濃度、靈敏度以及交叉反應均有顯著影響。通過混合酸酐法制備得到的包被抗原比通過EDC法得到的包被抗原用量少，更容易與抗體結合，識別的擬除蟲菊酯數(shù)量最多且靈敏度最高。同時，混合酸酐法在不同反應比的條件下得到的包被抗原指標也具有差異性。綜合分析，本次試驗中選擇了反應比為45∶1的MA2作為最佳包被抗原進行方法建立。

2.1.3 間接競爭ELISA方法的條件優(yōu)化

2.1.3.1 對照品稀釋液溶劑與濃度的優(yōu)化 擬除蟲菊酯類易溶于有機溶劑，進行對照稀釋液的配制時，在不添加對照的情況下，選擇不同的有機溶劑，考察其是否會對抗原抗體的結合能力產(chǎn)生影響。結果顯示，試驗中選擇的有機試劑可以顯著影響抗原抗體的結合，由于體積分數(shù)的差異，有機試劑對抗原抗體的結合存在促進或抑制的影響，如圖2所示。所有有機溶劑中甲醇產(chǎn)生的作用最小，所以本次試驗選擇甲醇作為對照稀釋液的有機溶劑。

圖2 有機溶劑對OD450 nm值的影響

對甲醇的含量影響進行測度，結果如圖3a所示。從圖中可以看出，對于抑制曲線和靈敏度而言，體積分數(shù)為10%～40%的中低濃度甲醇產(chǎn)生的影響較??；體積分數(shù)為50%～60%高濃度甲醇會降低擬除蟲菊酯的抑制作用。為了減少有機溶劑對反應體系的影響，試驗中選擇添加10%的甲醇。

圖3 甲醇體積分數(shù)和離子強度對OD450 nm值的影響

2.1.3.2 抗體稀釋液中離子強度的優(yōu)化 離子強度對間接競爭ELISA中抗原—抗體的結合反應有重要影響，其對OD450nm值的影響見圖3b。當離子強度的濃度為5 mmol/L時，IC50值升高，靈敏度下降；當濃度為10 mmol/L時，靈敏度高且抑制曲線無異常變化；當濃度≥20 mmol/L時，抗原未與抗體結合。因此，本次試驗選擇10 mmol/L的離子濃度。

2.1.3.3 抗體稀釋液pH值的優(yōu)化 pH值對間接競爭ELISA中抗原—抗體的結合反應也有重要影響，如圖4所示。當pH值的范圍為6.0～8.5時，OD450nm的最小值差異較小，擬除蟲菊酯具有相似的抑制效果；當pH值不同時，OD450nm的最大值差異較大，證明pH值可以顯著影響抗原抗體的結合能力。綜合考慮，選擇pH值7.5對抗原抗體結合能力的影響最小。

圖4 pH值對間接競爭ELISA的影響

2.1.4 甲氰菊酯標準抑制曲線 對上述影響因素進行優(yōu)化后，可以繪制出甲氰菊酯的標準抑制曲線，具體見圖5。在標準曲線的檢測限為1.32 ng/mL，線性范圍為2.65～28.55 ng/mL，IC50值為8.69 ng/mL。

圖5 甲氰菊酯的標準抑制曲線

2.1.5 測定擬除蟲菊酯交叉反應率 表2為8種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的交叉反應結果，其余藥物無IC50值和CR值。結果顯示，本次試驗中建立的方法對甲氰菊酯的檢測靈敏度最高，在對甲氰菊酯、氯氰菊酯、苯醚氰菊酯、氟氯氰菊酯的檢測中CR＞10%，產(chǎn)生了較強的交叉反應；在對高效氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氟氯苯菊酯和順式氰戊菊酯的檢測結果為：1%＜CR＜10%，產(chǎn)生了中等強度的交叉反應；在對氯菊酯、右旋苯醚菊酯、聯(lián)苯菊酯和3-苯氧基苯甲酸的檢測中未發(fā)生交叉反應。

表2 8種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的交叉反應結果

2.2 擬除蟲菊酯代謝產(chǎn)物的檢測方法結果與分析

2.2.1 3-苯氧基苯甲酸生物素化 3-苯氧基苯甲酸納米抗體生物素化后選擇酶標物S-HPR進行間接競爭ELISA檢測，當包被質(zhì)量濃度和抗體的工作質(zhì)量濃度分別為125 ng/mL與500 ng/mL時，生物素化的3-苯氧基苯甲酸納米抗體在1 μg/mL的3-苯氧基苯甲酸標準溶液中的抑制率為92.2%，說明3-苯氧基苯甲酸納米抗體生物素化成功。

2.2.2 間接競爭ELISA的方法優(yōu)化

2.2.2.1 最佳稀釋倍數(shù)和濃度組合的優(yōu)化 利用棋盤滴定法分別稀釋包被原和抗體，當3-苯氧基苯甲酸質(zhì)量濃度為0時，用酶標儀測度間接競爭ELISA法中不同的抗原抗體濃度組合在波長450 nm下的吸光值。選擇吸光值在［1，1.5］之間的濃度組合，然后將藥物進行梯度稀釋，利用間接競爭ELISA法繪制抑制曲線，可以得到各個抑制曲線的IC50值和最大吸光度，如圖6所示。綜合考慮，包被濃度和抗體稀釋倍數(shù)分別為125 ng/mL和1∶2000時曲線的擬合度較好，此時最大吸光度/IC50的值最大。

圖6 包被濃度的優(yōu)化

2.2.2.2 緩沖液pH值的優(yōu)化 pH值過高或過低都會影響抗體的活性和溶解度，也會對藥物的溶解度造成影響。本次試驗中測定3-苯氧基苯甲酸抑制曲線的反應體系pH值分別選定為5.6、6.6、7.6、8.6和9.6。如圖7a所示，當pH值為6.6左右時，最大吸光度/IC50的比值最大，因此最佳緩沖液的pH值選擇6.6。

2.2.2.3 最佳吐溫濃度的優(yōu)化 吐溫濃度對間接競爭ELISA法的靈敏度會產(chǎn)生影響。試驗中將咪唑—磷酸鹽緩沖溶液中添加的吐溫-20的體積分數(shù) 分 別 設 置 為0.001%，0.005%、0.010%、0.025%和0.500%，考察不同濃度的吐溫-20對間接競爭ELISA法靈敏度的影響情況。從圖7b中可以看出，當體積分數(shù)為0.005%時，抑制曲線中最大吸光度/IC50的比值最大，因此最佳吐溫濃度選擇0.005%。

圖7 pH值和吐溫含量的優(yōu)化

2.2.2.4 緩沖液離子濃度優(yōu)化 本試驗選用磷酸鹽濃度分別為10、20、40、60 和80 mmol/L的咪唑—磷酸鹽緩沖溶液作為反應體系，測定3-苯氧基苯甲酸的抑制曲線。如圖8a所示，最大吸光度隨離子濃度的上升呈下降趨勢，IC50值先下降后上升。最大吸光度/IC50值最大時的離子濃度為40 mmol/L，此時的靈敏度最大。

圖8 離子濃度和S-HRP稀釋倍數(shù)的優(yōu)化

2.2.2.5 S-HPR稀釋倍數(shù)的優(yōu)化 在將上述間接競爭ELISA法中的影響因素進行優(yōu)化后，在已經(jīng)優(yōu)化條件的基礎上用最佳濃度緩沖液將S-HPR稀釋后進行檢測。如圖8b所示，當S-HPR的稀釋倍數(shù)為1∶4000時，抑制曲線的最大吸光度/IC50值最大，因此選擇的S-HPR的稀釋倍數(shù)為1∶4000。

2.2.3 線性范圍及檢出限 通過上述條件的優(yōu)化，可以得到此次試驗中所需要的最優(yōu)反應條件：最佳包被濃度和抗體稀釋倍數(shù)分別為125 ng/mL和1∶2000、最佳pH值選擇6.6、最佳吐溫濃度選擇0.005%、最佳離子濃度為40 mmol/L、S-HPR的稀釋倍數(shù)選擇1∶4000。在這個條件下，配制建立標準曲線所需要的3-苯氧基苯甲酸的系列對照品溶液，質(zhì)量濃度的取值范圍為0.032、0.16、0.8、4、20、100、200 ng/mL。橫坐標為3-苯氧基苯甲酸質(zhì)量濃度的對數(shù)值，縱坐標為該濃度在450 nm下的吸光度值，利用Origin繪圖軟件進行標準曲線的繪制。經(jīng)過計算后能夠得到該曲線的IC50值為1.71 ng/mL，在試驗過程中可以進行檢測的線性范圍為0.37～7.40 ng/mL，最低檢測量即檢測限的值為0.15 ng/mL。標準曲線的結果如圖9所示。

圖9 3-PBA的間接競爭ELISA標準曲線

2.2.4 樣品檢測

2.2.4.1 人尿樣本基質(zhì)效應的消除 試驗組收集不同人的4份尿液樣本（陰性），在通過0.22 μm的濾膜處理后，分別用pH值為6.6的40mmol/L咪唑—磷酸鹽緩沖溶液分別稀釋至1、2、4和8倍用于3-苯氧基苯甲酸對照品的配制，同時用咪唑—磷酸鹽緩沖溶液稀釋3-苯氧基苯甲酸對照品作為檢測的對照組，分別繪制試驗組和對照組的標準曲線。結果顯示，人尿樣本在進行過濾處理后，需要將其稀釋20倍才能將基質(zhì)產(chǎn)生的干擾進行消除，降低了方法的靈敏度，如圖10a所示。為了提高檢測方法的靈敏度，對前處理方法進行優(yōu)化。首先，將尿液樣本進行高溫酸水解處理，然后利用SPE柱對高溫酸水解處理的尿液樣本進行純化和富集，最后再對樣本進行稀釋處理。如圖10b所示，將前處理方法進行優(yōu)化后，對照組與試驗組的標準曲線基本重合，優(yōu)化后的方法可以顯著提高樣本檢測的靈敏度，稀釋倍數(shù)為8時即可消除基質(zhì)效應。

圖10 不同處理方法對樣本基質(zhì)的影響

2.2.4.2 水樣本 取自來水、礦泉水、井水和河水4種不同來源的環(huán)境水樣，將水樣本進行離心和0.22 μm的濾膜過濾處理后，分別用pH值為6.6的40 mmol/L咪唑—磷酸鹽緩沖溶液稀釋至1、2、4和8倍用于3-苯氧基苯甲酸對照品的配制，同時用咪唑—磷酸鹽緩沖溶液稀釋3-苯氧基苯甲酸對照品作為檢測的對照組，分別繪制試驗組和對照組的標準曲線。結果顯示，4種不同來源的環(huán)境水樣對照組與試驗組的標準曲線高度重合，說明不同環(huán)境的水樣本產(chǎn)生的基質(zhì)效應較小，對樣本的檢測不造成干擾，所以對環(huán)境水樣本的處理在離心、過濾后即可進行檢測。

2.2.5 加標回收率與相對標準偏差 采集8份人尿樣本和環(huán)境水樣本作為陰性空白樣品，在檢測范圍內(nèi)選擇高、中、低濃度分別進行樣本的添加回收試驗，取3次平行試驗的平均值。結果顯示，人尿樣本的添加回收率在87%～99%之間，環(huán)境水樣本的添加回收率在78%～127%之間。

3 結論

3.1 擬除蟲菊酯類檢測方法的結論分析

通過最佳各工作質(zhì)量濃度、Ka值、交叉反應等指標，對EDC法和混合酸酐法進行篩選，建立了通過混合酸酐法制備，選擇反應比為45∶1的MA2作為最佳包被抗原的檢測方法。咋繪制甲氰菊酯的標準抑制曲線時，對離子強度、pH值和甲醇含量進行優(yōu)化，并確定了競爭反應的最佳條件，離子強度的選擇為10 mmol/L，pH值為7.4，甲醇含量為10%。利用標準曲線，測定11種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的交叉反應。結果顯示，間接競爭ELISA可以對8種擬除蟲菊酯同時進行檢測，靈敏度可以達到8.69～344.97 ng/mL，說明該方法能夠有效地進行多種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的殘留檢測。

3.2 擬除蟲菊酯代謝產(chǎn)物檢測方法的結論分析

本次試驗在前期獲得3-苯氧基苯甲酸納米抗體的基礎上，進行3-苯氧基苯甲酸納米抗體生物素化試驗，對包被濃度、抗體稀釋倍數(shù)、pH值、吐溫濃度、最佳離子濃度和S-HPR的稀釋倍數(shù)進行了優(yōu)化，在此基礎上建立了3-苯氧基苯甲酸的間接競爭ELISA分析方法。經(jīng)過計算后可以得到3-苯氧基苯甲酸的IC50值為1.71 ng/mL，在試驗過程中可以進行檢測的線性范圍為0.37～7.40 ng/mL，檢測限的值為0.15 ng/mL。對8份人尿樣本和環(huán)境水樣本進行添加回收試驗，人尿樣本的添加回收率在87%～99%之間，環(huán)境水樣本的添加回收率在78%～127%之間，RSD值均小于10%。結果證明，3-苯氧基苯甲酸的間接競爭ELISA分析方法準確性高，可以用于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的檢測。

綜上所述，本次試驗建立的間接競爭ELISA檢測方法可以用于擬除蟲菊酯類農(nóng)藥及其代謝產(chǎn)物的檢測，該方法能夠有效地進行多種擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的殘留檢測，且準確性、靈敏度高。