王夢瑤 張建軍 湯如瑩 朱依琳 張 睿 趙丹萍 王林元

(1 北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京，100029； 2 北京中醫(yī)藥大學中醫(yī)學院，北京，100029)

隨著現(xiàn)代生活方式的改變，壓力、久坐和熬夜等多種因素常常導致便秘[1-3]。據(jù)便秘流行病學顯示，我國有4%～12%便秘患者[1-2]。便秘發(fā)病率高，常以排便間隔延長、大便干結、大便艱澀不暢為主要表現(xiàn)[1-2]。中醫(yī)通過辨證論治，調(diào)整臟腑，調(diào)節(jié)機體陰陽氣血津液的平衡，達到促進腸道運動和促進排便的作用[3]。臨床應用上蘆薈與火麻仁可配伍用于治療便秘[4]。蘆薈為攻下藥，常用于熱結便秘[5]；火麻仁甘平，質(zhì)潤多脂，為潤下藥，能潤腸通便，常用于腸燥便秘，又兼有滋養(yǎng)補虛的作用[6-7]，火麻仁可制約蘆薈的苦寒之性，二者合用潤腸通便，導瀉溫和。目前蘆薈粉與火麻仁油聯(lián)合作用通便效果研究甚少，本實驗通過觀察蘆薈粉、火麻仁油及其混合物對復方地酚諾酯所致便秘小鼠胃腸動力學和水液代謝的影響，觀察其對小鼠小腸推進率、結腸組織結構和黏液分泌情況以及對血清中5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)、腸內(nèi)P物質(zhì)、血管活性腸肽(Vasoactive Intestinal Peptide，VIP)水平的變化，為蘆薈粉與火麻仁及其配伍應用提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 選取無特定病原體(Specific Pathogen Free,SPF)級健康雄性昆明小鼠160只，體質(zhì)量(20±2) g，購自斯貝福(北京)實驗動物科技有限公司，許可證號：SCXK(京)2016-0002。實驗過程中給予小鼠普通飼料，自由飲水，室溫22～26 ℃，相對濕度為60%～70%。實驗符合相關倫理學要求(倫理審批號：BUCM-4-2019090602-3035)。

1.1.2 藥物 蘆薈粉(百合科植物庫拉索蘆薈AloeveraL.的全葉粉，云南萬綠生物股份有限公司，生產(chǎn)批號：20180512)、火麻仁油(桑科植物大麻CannabissativaL.的干燥成熟果實壓榨得到的油，江西森海植物油有限公司，生產(chǎn)批號：20190611)，果導片(山東仁和堂藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：181102)，復方地芬諾酯(DC)片(常州康普藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：181016)。受試物均為灌胃給藥，羧甲基纖維素鈉溶液作為空白溶液以及給藥基質(zhì)溶液，幫助藥物混懸溶解。

1.1.3 試劑與儀器 5-HT試劑盒(武漢塞維爾生物科技有限公司，批號：20191010)，P物質(zhì)試劑盒(武漢塞維爾生物科技有限公司，批號：20191013)，VIP試劑盒(武漢塞維爾生物科技有限公司，批號：20191016)；全自動生化分析儀(Olympus公司，日本，型號：AU5400型)，顯微鏡(Olympus公司，日本，型號：BX51-32H0型)，臺式離心機(湖南新科科學儀器有限公司，型號：L-5M型)，石蠟切片機(LEICA公司，德國，型號：RM2235)，電子天平(Sartorius公司，德國，型號：BS110型)。

1.2 方法

1.2.1 分組 SPF級健康昆明小鼠160只，適應性喂養(yǎng)7 d后隨機分為8組，即空白組、模型組、果導片組、蘆薈粉組、火麻仁油組、配伍低劑量組、配伍中劑量組、配伍高劑量組，每組20只。

1.2.2 模型制備 實驗第14天，各組小鼠禁食16 h(期間自由飲水)后，除空白組外，其余各組灌胃復方地芬諾酯5 mg/kg體質(zhì)量制備小鼠腸蠕動抑制模型，空白組灌胃生理鹽水，30 min后，每組取10只小鼠摘眼球取血取結腸；每組另外的10只小鼠灌胃15%的墨汁(0.5 mL/只)做小腸推進實驗。

1.2.3 給藥方法 果導片組灌胃30 mg/kg的果導片、蘆薈粉組灌胃0.15 g/kg的蘆薈粉(相當于人日用量0.9 g/d)、火麻仁油組灌胃0.33 g/kg的火麻仁油(相當于人日用量2 g/d)、配伍低劑量組灌胃0.075 g/kg蘆薈粉和0.165 g/kg火麻仁油，配伍中劑量組灌胃0.15 g/kg蘆薈粉和0.33 g/kg的火麻仁油，配伍高劑量組灌胃0.3 g/kg蘆薈粉和0.66 g/kg。每天上午各組灌胃給予相應藥物，空白組、模型組給予等量生理鹽水，給藥體積按0.2 mL/10 g，1次/d，連續(xù)14 d。

1.2.4 檢測指標與方法

1.2.4.1 一般狀態(tài)和體質(zhì)量 觀察各組小鼠活動、精神狀態(tài)，每隔7 d記錄體質(zhì)量變化。

1.2.4.2 小腸推進實驗 實驗第14天，各組小鼠禁食16 h(期間自由飲水)后，模型組和各給藥組給予復方地芬諾酯5 mg/kg體質(zhì)量制備小鼠腸蠕動抑制模型，空白組給生理鹽水，30 min后，各組取10只小鼠灌胃15%的墨汁(0.5 mL/只)。25 min后，脫頸椎處死小鼠，開腹取小腸，剪取幽門至回盲部的腸管，輕拉成直線，測量小腸全長和幽門至墨水運動前沿位移，計算小腸墨汁推進率。墨汁推進速率=墨汁移動距離(cm)/小腸總長度(cm)×100%。

1.2.4.3 血清5-HT、P物質(zhì)及VIP檢測 實驗第14天最后1次給藥后1 h摘眼球取血，室溫靜置2 h，低溫離心15 min(3 000 r/min，離心半徑5 cm)，分離血清-20 ℃保存，按試劑盒說明書測定血清5-HT、P物質(zhì)和VIP水平。

1.2.4.4 小鼠結腸病理觀察 每組取3只小鼠的結腸組織用生理鹽水進行清洗后放入4%多聚甲醛組織固定液中進行固定，常規(guī)脫水、透明、浸蠟與包埋，制成蠟塊，石蠟切片，對切片進行常規(guī)蘇木精-伊紅(Hematoxylin Eosin，HE)染色。

2 結果

2.1 一般狀態(tài)及體質(zhì)量 第1～14天，空白組和模型組，小鼠皮毛潤澤色白，糞便排出正常。第7～13天，果導片組、蘆薈粉組小鼠皮毛失去光澤色黃，皮毛疏散、豎立，糞便出現(xiàn)濕軟稀便。實驗第1天、第7天、第13天，與空白組比較，模型組小鼠體質(zhì)量均無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與模型組比較，各給藥組小鼠體質(zhì)量沒有明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。其他給藥組小鼠實驗期間與配伍中劑量組比較，小鼠體質(zhì)量均無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 蘆薈粉、火麻仁油及其配伍對便秘小鼠體質(zhì)量的影響

2.2 各組小腸推進率比較 與空白組比較，模型組小鼠小腸推進率明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。與模型組比較，各給藥組小鼠的小腸推進率明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。與配伍中劑量組比較，果導片組、蘆薈粉組、火麻仁油組及配伍低劑量組小鼠的小腸推進率低于配伍中劑量組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。見表2。

表2 蘆薈粉、火麻仁油及其配伍對便秘小鼠小腸推進率的影響

2.3 各組血清5-HT、P物質(zhì)、VIP水平比較 與空白組比較，模型組小鼠血清中5-HT、P物質(zhì)水平顯著降低，VIP水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。與模型組比較，果導片組、蘆薈粉組、配伍低劑量組、配伍中劑量組、配伍高劑量組5-HT水平顯著升高(P<0.001，P<0.01)火麻仁油組有升高5-HT的趨勢(P>0.05)；火麻仁油組和配伍低劑量組5-HT水平低于配伍中劑量組(P<0.001，P<0.01)。與模型組比較，果導片組、蘆薈粉組、火麻仁油組、配伍中高劑量組P物質(zhì)水平顯著升高(P<0.001，P<0.01，P<0.05)，配伍低劑量組有升高P物質(zhì)的趨勢(P>0.05)。與模型組比較，果導片組、蘆薈粉組、配伍低劑量組、配伍中劑量組、配伍高劑量組VIP水平顯著降低(P<0.001，P<0.01，P<0.05)。見表3。

表3 蘆薈粉、火麻仁油及其配伍對便秘小鼠血清5-HT、P物質(zhì)、VIP的影響

2.4 各組結腸組織形態(tài)變化 HE染色可見空白小鼠結腸黏膜層較厚，未見明顯病理改變，黏膜上皮完整，杯狀細胞形態(tài)無改變。與空白組比較，模型組小鼠結腸黏膜層上皮細胞和杯狀細胞萎縮，黏液分泌減少，肌層厚度減少；與模型組比較，給藥組小鼠結腸黏膜層上皮細胞、杯狀細胞、黏液分泌與肌層厚度均增加。見圖1。

與空白組比較，模型組小鼠結腸黏膜層厚度明顯減少(P<0.05)，與模型組比較，果導片組、配伍劑中劑量組、配伍高劑量組小鼠結腸黏膜層厚度明顯增加(P<0.001，P<0.01，P<0.05)；與配伍中劑量組比較，蘆薈粉組和火麻仁油組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 蘆薈粉、火麻仁油及其配伍對便秘小鼠結腸組織黏膜厚度的影響

3 討論

便秘患者由于糞便滯留腸道發(fā)酵腐敗產(chǎn)生有害毒素，可引起痤瘡、面部色素沉著、皮疹等問題[9-10]。長期便秘者可引起或加重直腸疾病如直腸炎、肛裂、痔瘡等，同時還將導致失眠、多夢、煩躁、抑郁、焦慮等問題[11]。便秘可損傷腸道黏膜屏障，減弱腸黏膜抵抗機械和化學損傷能力。在排便過程中周圍神經(jīng)會出現(xiàn)興奮，其沖動傳遞至主排便中心和大腦皮質(zhì)后會導致大腸、直腸、肛門括約肌以及盆底肌肉的一系列協(xié)調(diào)運動，而其中任何一個部位的障礙都可能會導致便秘的發(fā)生，便秘嚴重影響生命質(zhì)量。

蘆薈、火麻仁常用于治療便秘。研究表明，蘆薈具有加強小鼠腸蠕動和減少腸壁重吸收水分作用[15]。其中起瀉下通便作用的主要是以蘆薈苷為代表的蒽醌類化合物[12-13]，蘆薈苷主要存在于蘆薈葉皮中，葉肉中含量比表皮少[8]。藥用蘆薈是蘆薈葉皮的汁液濃縮干燥物，不含葉肉；蘆薈粉是蘆薈全葉的粉，含葉皮和葉肉，其中蘆薈苷含量較藥用蘆薈低；而蘆薈凝膠是去皮后所得肉質(zhì)部分，主含蘆薈多糖等，蘆薈凝膠汁能改善便秘小鼠結腸運動功能[14]。蘆薈粉中既有含蘆薈苷較多的皮，也有主要含有蘆薈多糖的蘆薈凝膠。火麻仁為最常用于虛證便秘的中藥之一，除有潤下通便作用以外，傳統(tǒng)記載尚有“補益”作用，如《神農(nóng)本草經(jīng)》記載其“補中益氣”；《日華子本草》記載：“補虛勞，長肌肉?！被鹇槿视褪腔鹇槿蕽櫹峦ū愕闹饕镔|(zhì)基礎，傳統(tǒng)認為火麻仁油能刺激腸黏膜使腸道黏液分泌增多、蠕動加快、減少大腸吸收水分而發(fā)揮潤腸、通便作用[16]。因此，蘆薈粉中的蘆薈苷發(fā)揮刺激性瀉下作用，蘆薈多糖調(diào)節(jié)結腸運動，而火麻仁油潤腸通便，補中益氣，“補虛勞，長肌肉”增加胃腸道動力而促進腸道蠕動利于糞便的排出。二者配伍使用，潤腸通便，導瀉溫和。

復方地芬諾酯導致便秘的動物模型應用廣泛，其便秘動物模型主要是通過抑制腸道蠕動，干擾腸道黏液分泌而導致便秘[17]。小腸墨汁推進率反映腸道的蠕動能力，便秘后腸道蠕動力減弱，糞便在體內(nèi)滯留時間延長，排便量減少，小腸墨汁推進率降低[18]。本研究結果顯示，蘆薈粉、火麻仁油及其配伍對便秘小鼠小腸推進率有明顯改善，這表明其有通便作用。

腸神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)腸道動力功能，腸神經(jīng)遞質(zhì)P物質(zhì)、5-HT、VIP可發(fā)揮興奮或抑制作用對腸道運動進行調(diào)節(jié)[19-20]。P物質(zhì)是胃腸運動調(diào)節(jié)中的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，能促進腸道平滑肌收縮，減少胃腸道對水分的吸收增加糞便含水量，刺激腸道蠕動促進排便[21-22]。5-HT能促進腸道平滑肌收縮引起腸道蠕動[23]。VIP在胃腸運動調(diào)節(jié)中主要起抑制作用，可松弛腸道平滑肌，抑制腸道蠕動[24]。本研究發(fā)現(xiàn)，蘆薈粉、火麻仁油及配伍能使便秘小鼠血清5-HT、P物質(zhì)水平上調(diào)，VIP水平降低，蘆薈粉、火麻仁油及配伍通過調(diào)節(jié)腸神經(jīng)遞質(zhì)來調(diào)節(jié)腸道運動，從而改善小鼠便秘癥狀。

腸道失于潤養(yǎng)時細胞分泌黏液減少，腸道蠕動減緩，大便停留時間延長，則大便干結，難以排出。本研究結腸組織HE染色結果表明，模型組小鼠結腸的黏膜厚度變薄，上皮細胞形態(tài)細長、干癟，杯狀細胞減少，符合便秘腸道失于濡養(yǎng)的表現(xiàn)。蘆薈粉及火麻仁油能增加便秘小鼠腸道杯狀細胞數(shù)量，修復受損的上皮細胞及功能，增加黏膜厚度，促進黏液分泌，改善便秘狀態(tài)。

本研究配伍中劑量組小腸推進率顯著高于蘆薈粉組、火麻仁油組，5-HT水平顯著高于火麻仁油組，VIP水平顯著低于火麻仁油組，表明蘆薈粉與火麻仁油配伍在增加腸道動力、促進腸道蠕動方面顯著優(yōu)于單獨使用蘆薈粉或火麻仁油。

綜上所述，本研究表明蘆薈粉與火麻仁油配伍對便秘小鼠的通便作用具有協(xié)同增效的效果，與促進腸道細胞修復，增加黏液分泌進而增加腸道動力有關。本研究探討蘆薈粉、火麻仁油及其配伍的通便作用及機制，為其配伍應用提供實驗依據(jù)。