何麗霞

(渠縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 渠縣 635200)

0 引言

禽流感(Avian Influenza，AI)是由正黏病毒科、流感病毒屬A型流感病毒感染后引起的急性、烈性敗血癥為特點(diǎn)的傳染病，以家禽較為常見(jiàn)，病禽以呼吸系統(tǒng)疾病和產(chǎn)蛋下降為亞臨床癥狀[1]。高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza virus infection，HPAI)以發(fā)病率高、病死率高、死亡速度快等為特點(diǎn)，目前禽流感病毒的發(fā)生和流行不僅僅局限于威脅養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展和造成經(jīng)濟(jì)損失，同時(shí)對(duì)公共衛(wèi)生安全也造成威脅。

大多數(shù)國(guó)家對(duì)HPAI主要采取撲殺的政策，但是取得的效果并不明顯。2003年暴發(fā)的禽流感防控工作經(jīng)驗(yàn)證實(shí)，采取撲殺加緊急免疫健康雞群的對(duì)策能取得較好的防控效果，因此依靠疫苗免疫逐漸成為多個(gè)發(fā)展中國(guó)家防控HPAI的主要措施[2]。我國(guó)一直以來(lái)高度重視禽流感的防控工作以保障畜牧業(yè)健康發(fā)展，保護(hù)公共衛(wèi)生安全。自2004年以來(lái)全國(guó)大面積使用哈獸研研制的禽流感系列疫苗，使得AI得到較好的控制。國(guó)內(nèi)外大量研究證實(shí)，家禽免疫接種AIV疫苗后能夠有效減少機(jī)體向外界的排毒量，在增加抵抗力的同時(shí)降低病毒傳播的風(fēng)險(xiǎn)。目前生產(chǎn)上使用的疫苗種類繁多，如滅活全病毒疫苗、亞單位疫苗、重組疫苗、核酸疫苗等。

1 禽流感疫苗的種類

1.1 滅活疫苗

禽流感滅活疫苗是有效防控疫情的傳統(tǒng)疫苗，一般用甲醛滅活A(yù)IV雞胚增殖的尿囊液輔以佐劑制成，其具有較好的免疫效果和較高的安全性，能預(yù)防同一血凝素(hemagglutinin，HA)類型的病毒引起的疫情，因此一直作為預(yù)防疫病的常用苗，滅活疫苗注射也是防控疫情傳播的主要措施和關(guān)鍵環(huán)節(jié)。如20世紀(jì)60年代生產(chǎn)的純化全毒粒疫苗，具有制備工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、免疫效果明確的特點(diǎn)。滅活疫苗改進(jìn)后制備成多價(jià)亞型疫苗，如禽流感二價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-6株和H9N2 Re-2株)，一方面避免了亞型抗原之間的相互干擾，另一方面疫苗的免疫原性強(qiáng)，保護(hù)效力高。再者滅活疫苗便于儲(chǔ)備，一旦確定疫病的亞型，可用于緊急預(yù)防接種[3]。滅活疫苗的不足之處在于免疫效果與劑量和疫苗中抗原含量有關(guān)，具有使用劑量大的缺點(diǎn)；同時(shí)疫苗制備需要添加佐劑，因此極大的提高了免疫成本；再者接種人員在點(diǎn)眼、滴鼻或肌內(nèi)注射時(shí)要與禽直接接觸，極大的提高了疫病擴(kuò)散的可能性；最重要的是滅活苗對(duì)誘導(dǎo)機(jī)體細(xì)胞免疫應(yīng)答和黏膜免疫產(chǎn)生IgG的效果欠佳，無(wú)法有效抑制呼吸道中AIV病毒的復(fù)制。實(shí)踐證實(shí)，我國(guó)生產(chǎn)的H5和H7亞型的禽流感滅活疫苗在仔雞免疫7 d以后在血清中能測(cè)到相應(yīng)的特異性抗體，隨著時(shí)間增加，保護(hù)力有所上升，接種10 d后保護(hù)效率超過(guò)80%，14 d后基本能達(dá)到全群保護(hù)[4]。

1.2 減毒活疫苗

減毒活疫苗是指病原體經(jīng)人為處理后毒性減弱的同時(shí)仍保持較好的免疫原性，將其接種至體內(nèi)不會(huì)引起發(fā)病，但是病原可在體內(nèi)增殖，同時(shí)引起免疫反應(yīng)，獲得保護(hù)作用。有資料顯示，流感H7N3減毒活疫苗具有抗H7N9病毒的保護(hù)作用，主要是由于H7N3血凝素分子中的B細(xì)胞和CTL表位與H7N9的一致性接近70%。

1.3 基因工程重組滅活苗

這種疫苗是利用DNA以及反向基因操作技術(shù)，在人工缺失某流行地區(qū)AIV毒株基因組中決定其高度致病性相關(guān)的核苷酸序列，再與其他流行毒株進(jìn)行反向基因操作，進(jìn)一步得到減毒的弱毒株，這種新毒株具有與流行地區(qū)病毒相同的抗原性，用其制備成滅活疫苗，重組的H5N1 Re-1株、Re-4株、Re-5株、Re-6株和利用它們研制的H5亞型二價(jià)滅活苗對(duì)2006年以后我國(guó)防控禽流感產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響，也是使用較為廣泛的疫苗。這類基因工程苗相較傳統(tǒng)的滅活疫苗來(lái)說(shuō)，生產(chǎn)安全性更高，更簡(jiǎn)單方便，免疫效果也明顯提升。有資料顯示，幼禽使用R4株和Re-5株的二價(jià)苗免疫接種后7 d，全群抗體合格率高達(dá)70%，且隨著時(shí)間延長(zhǎng)效價(jià)明顯升高[5]。

1.4 亞單位疫苗

亞單位疫苗是指通過(guò)生物化學(xué)方法提取細(xì)菌、病毒的特殊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，篩選出具有免疫活性的片段制成的疫苗，禽流感的亞單位疫苗也是同樣的原理，即提取AIV具有免疫原性的抗原蛋白質(zhì)，再輔加適當(dāng)?shù)淖魟┲苽涠?。這種疫苗具有較好的生物安全性，能夠促使機(jī)體產(chǎn)生足夠的免疫力，但是其缺乏感染性的物質(zhì)，蛋白組分單一，因此刺激機(jī)體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答反應(yīng)相對(duì)較弱，免疫保護(hù)時(shí)間持續(xù)較短，且制作成本高，因此使用范圍不是很廣泛。生產(chǎn)上常見(jiàn)的AIV亞單位疫苗主要采用的蛋白有HACD融合蛋白、HA蛋白的重組，后者產(chǎn)生的中和抗體水平更高，交叉保護(hù)反應(yīng)更強(qiáng)[6]。

1.5 重組活載體疫苗

利用基因工程重組活載體疫苗是將毒性減弱的細(xì)菌或病毒作為載體，表達(dá)AIV的特定免疫活性因子，其具有成本低、免疫方便、效果持久的優(yōu)點(diǎn)，而且大多數(shù)被選為載體的細(xì)菌或病毒(痘病毒、腺病毒)能插入多個(gè)基因片段。但是該項(xiàng)技術(shù)存在的問(wèn)題是重組病毒的方法不夠成熟，大多數(shù)情況下載體的免疫和目的抗原的免疫存在競(jìng)爭(zhēng)的關(guān)系，目前痘病毒載體具有安全、穩(wěn)定、外源基因表達(dá)效率高、廉價(jià)的優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用。禽流感-新城疫(Newcastle disease，ND)重組二聯(lián)活疫苗已經(jīng)廣泛用于臨床，但是大量研究資料證實(shí)，該二聯(lián)苗的免疫效果受到人為操作的影響[7]。

1.6 核酸疫苗

核酸疫苗是將編碼AIV蛋白的基因?qū)雱?dòng)物體細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)宿主細(xì)胞表達(dá)合成抗原蛋白，進(jìn)一步誘導(dǎo)宿主對(duì)該抗原蛋白產(chǎn)生免疫應(yīng)答，以達(dá)到預(yù)防AI的目的。該種疫苗的優(yōu)點(diǎn)為效果穩(wěn)定、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，抗原蛋白在體內(nèi)可同時(shí)產(chǎn)生細(xì)胞免疫、體液免疫、黏膜免疫。核酸疫苗制備簡(jiǎn)單，只需要克隆特定的抗原基因，不對(duì)蛋白進(jìn)行表達(dá)和純化，免疫使用的劑量很低即可產(chǎn)生和全病毒滅活苗一樣的效果。其次，機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善引起的免疫力低下的動(dòng)物使用核酸疫苗后仍可獲得較好的免疫效果。再者，該疫苗使用不受母源抗體水平的干擾，易于保存和運(yùn)輸，在疫苗生產(chǎn)的過(guò)程中不會(huì)引起致病作用，也不需要培養(yǎng)大量的病原或載體，但是核酸疫苗存在一定的生物安全隱患，如攜帶抗生素基因[8]。

1.7 表位疫苗

表位疫苗是指用抗原表位制備的疫苗，其能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫，提高不同亞型AIV之間的交叉反應(yīng)，AIV目前研究主要集中在表位篩選、免疫原性基因和免疫效果上，有學(xué)者使用AIV病毒的M1蛋白型特異性單抗篩選M13噬菌體展示的12肽隨機(jī)肽庫(kù)，結(jié)果篩選到M1蛋白的222～230位氨基酸序列，其構(gòu)成了AIV特異性表位[9]。

1.8 其他新型疫苗

除上述疫苗外，還有轉(zhuǎn)基因植物可食用疫苗、冷適應(yīng)流感弱毒苗、RNA疫苗、復(fù)制缺陷型AIV病毒苗等多種新型疫苗。對(duì)于AIV來(lái)說(shuō)，血清型較多，病毒容易發(fā)生變異，理想的疫苗應(yīng)該具備制備簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉、使用方便、安全性好、免疫效果穩(wěn)定持久、對(duì)多種亞型產(chǎn)生交叉保護(hù)效果的特點(diǎn)，這也是目前AI疫苗研制的方向[10]。

2 禽流感疫苗的使用

疫苗接種是有效預(yù)防禽流感的主要措施，尤其是HPAI，但是選擇合理的疫苗，把握免疫的各個(gè)環(huán)節(jié)，才能達(dá)到最佳的免疫效果。

2.1 生產(chǎn)上如何選擇疫苗

2.1.1 種類特點(diǎn)

生產(chǎn)上首選滅活油乳劑疫苗預(yù)防AI，其具有免疫效果好、安全性高的特點(diǎn)，但是美中不足的是只能通過(guò)注射進(jìn)行免疫，操作環(huán)節(jié)稍有不慎將會(huì)影響免疫效果，目前哈獸研研制的禽新重二聯(lián)活疫苗，采用負(fù)鏈RNA反向基因操作技術(shù)，完美的解決了上述問(wèn)題，該疫苗具有安全性好、免疫效率高、使用方便、使用后對(duì)肉質(zhì)不會(huì)產(chǎn)生不良影響，免疫方式靈活多樣等特點(diǎn)。

2.1.2 亞型特點(diǎn)

在使用AIV疫苗時(shí)一定要先了解清楚，當(dāng)?shù)亓餍械腁I是由哪種亞型的病毒引起的，選擇同亞型的疫苗免疫接種能達(dá)到事半功倍的效果，但是在情況不明或國(guó)家強(qiáng)制免疫工作中，一般都選擇H5+H7亞型或其他必要的亞型二價(jià)或多價(jià)滅活疫苗進(jìn)行免疫接種。

2.1.3 與其他疫苗聯(lián)用

單一的疫苗比多聯(lián)和多價(jià)疫苗獲得的免疫效果更好，但是在基層實(shí)際工作中，多數(shù)情況下會(huì)選擇多聯(lián)疫苗以達(dá)到降低免疫接種次數(shù)的目的。

2.2 不同劑型疫苗的使用特點(diǎn)

現(xiàn)階段，我國(guó)畜禽養(yǎng)殖業(yè)朝著集約化、規(guī)?；内厔?shì)穩(wěn)步發(fā)展，但是散養(yǎng)仍占了很大比例，對(duì)于散養(yǎng)戶來(lái)說(shuō)，接種疫苗預(yù)防疫病是非常必要的，對(duì)于飼養(yǎng)期較短的家禽可在7～10日齡接種1次，對(duì)于養(yǎng)殖時(shí)間較長(zhǎng)的種禽、蛋禽，可綜合使用重組疫苗和滅活疫苗，在一免后間隔3周進(jìn)行二免疫，在開(kāi)產(chǎn)前進(jìn)行二次加強(qiáng)免疫，之后每隔半年免疫1次。常用的AIV疫苗的使用程序如下。

1)油乳劑滅活苗：2周齡以上的蛋雛雞、10日齡以上的肉仔雞和成年雞都可選擇該種疫苗，注射部位可選擇胸肌或頸背部下1/3處皮下注射。

2)基因工程活疫苗：禽新重組二聯(lián)活疫苗能同時(shí)預(yù)防H5亞型AI和ND，主要用于蛋雛雞和肉仔雞，可用點(diǎn)眼、滴鼻、肌肉注射、飲水和噴霧等多種方法進(jìn)行免疫，蛋雛雞2～3周齡首免，間隔3周二免，開(kāi)產(chǎn)前再加強(qiáng)免疫1次，開(kāi)產(chǎn)后間隔3～4個(gè)月可再免疫1次，獲得較高的免疫水平，肉雛雞10～14日齡首免，間隔2周可進(jìn)行二免[11]。

3 提高禽流感疫苗免疫效果的措施

3.1 制定免疫程序

在養(yǎng)殖過(guò)程中，根據(jù)當(dāng)?shù)厍萘鞲幸咔榈牧餍星闆r、母源抗體水平、免疫間隔時(shí)間、免疫應(yīng)答能力、疫苗種類、接種方法等制定科學(xué)合理的免疫程序。一般首免選擇12～15日齡，蛋雞根據(jù)HI抗體檢測(cè)結(jié)果來(lái)指導(dǎo)二次免疫時(shí)間。在疫苗接種前后1周避免圈舍帶禽消毒，以避免接種失敗。

3.2 保證疫苗質(zhì)量

疫苗質(zhì)量是保證接種的關(guān)鍵，疫苗保存、運(yùn)輸不當(dāng)會(huì)影響其正常性狀和使用效果。在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中使用疫苗必須要遵循說(shuō)明書中有關(guān)疫苗貯存、使用劑量以及操作中的注意事項(xiàng)，疫苗使用前必須要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的檢查，核對(duì)疫苗抗原亞型、毒株、廠家、日期等信息，疫苗的用量不能隨意降低或增加，劑量太低影響抗體產(chǎn)生，劑量過(guò)大容易產(chǎn)生免疫麻痹或副反應(yīng)。稀釋液的選擇和用量需要準(zhǔn)確掌握，如能采用點(diǎn)眼、滴鼻、注射途徑的疫苗，稀釋液可選擇蒸餾水或生理鹽水，飲水免疫使用涼白開(kāi)，忌用含有消毒劑的自來(lái)水。如重組禽流感病毒(H5+H7)三價(jià)滅活疫苗(H5N1 Re-11株+Re-12株，H7N9 H7-Re3株)疫苗要求2℃～8℃保存，如果冷凍會(huì)破壞疫苗的性狀，影響疫苗的質(zhì)量。疫苗使用前應(yīng)在室溫放置2 h，預(yù)溫的疫苗避免了溫度過(guò)低對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的應(yīng)激作用，油乳劑苗的黏稠度也會(huì)降低，更容易注射和吸收。

3.3 操作嚴(yán)謹(jǐn)

免疫接種的人員必須有足夠的經(jīng)驗(yàn)，熟練掌握疫苗的稀釋、操作方法，減少連續(xù)注射器注射中產(chǎn)生的誤差。使用活疫苗的針頭選擇7號(hào)，油苗為9號(hào)，如果針頭太細(xì)，注射費(fèi)事費(fèi)力，容易損壞針頭。同圈舍的雞群每注射1 000羽需要更換針頭，使用前必須嚴(yán)格消毒，避免產(chǎn)生交叉污染。

3.4 接種健康動(dòng)物

健康的雞群是禽流感免疫的基礎(chǔ)，如果要免疫的禽群中已經(jīng)出現(xiàn)了發(fā)病或可疑的疫病或雞群營(yíng)養(yǎng)狀況不佳時(shí)要立即停止疫苗接種。

3.5 免疫后的處理

疫苗接種后的器械要及時(shí)嚴(yán)格消毒，疫苗空瓶和針頭等廢棄物需要焚燒或深埋處理。一般情況下，禽-新二聯(lián)活疫苗接種3～5 d即可產(chǎn)生免疫力，油苗接種14 d后產(chǎn)免疫力，如果在接種的空白期出現(xiàn)嚴(yán)重的應(yīng)激，會(huì)影響整個(gè)群體的免疫力，因此疫苗接種后要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，在飲水中加入電解多維等減少應(yīng)激。條件允許的情況下，可用HI監(jiān)測(cè)免疫效果，根據(jù)禽群免疫抗體水平的高低來(lái)進(jìn)行補(bǔ)免或調(diào)整免疫程序。