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        微流控芯片技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展

        2022-12-06 04:13:27陳榕方吳雁通信作者
        醫(yī)療裝備 2022年20期
        關(guān)鍵詞:分析檢測(cè)

        陳榕方,吳雁(通信作者)

        天津市泰達(dá)醫(yī)院檢驗(yàn)科 (天津 300457)

        微流控芯片技術(shù)又被稱為芯片實(shí)驗(yàn)室,該名稱的由來(lái)是因?yàn)槲⒘骺匦酒夹g(shù)的應(yīng)用使從處理樣品到結(jié)果輸出這一過(guò)程被充分簡(jiǎn)化,并且被證實(shí)在藥品、食物以及臨床工作中發(fā)揮著較大的作用[1]。微流控芯片技術(shù)具有操作高效、自動(dòng)化、集成化、低消耗等優(yōu)勢(shì),并在捕獲循環(huán)腫瘤細(xì)胞、分離病毒病原體、檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物等方面的應(yīng)用效果顯著[2]。結(jié)合目前的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),將微流控芯片技術(shù)作為一類商品大規(guī)模的引入到醫(yī)院工作中仍然存在著一定的問(wèn)題,可能會(huì)出現(xiàn)準(zhǔn)確度及精確度無(wú)法達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的情況,使檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差[3]。本研究結(jié)合既往工作經(jīng)驗(yàn)以及操作技術(shù)進(jìn)行了相關(guān)研究及整理,重點(diǎn)就微流控芯片技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行綜述,分別從其概況、技術(shù)特點(diǎn)、應(yīng)用現(xiàn)狀等方向展開(kāi)分析。

        1 微流控芯片技術(shù)即時(shí)檢驗(yàn)的概況

        微流控芯片本身具有較高的檢測(cè)靈敏度,在近年來(lái)的臨床檢驗(yàn)工作中被廣泛應(yīng)用,且已經(jīng)成為即時(shí)檢驗(yàn)的理想載體,也被當(dāng)作是當(dāng)前階段公認(rèn)的即時(shí)檢驗(yàn)的主要發(fā)展方向,尤其是在臨床檢驗(yàn)及分析、DNA分析、蛋白質(zhì)學(xué)組分析以及綜合分析等方面的診斷工作中。即時(shí)檢驗(yàn)是臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)工作中的一種新型發(fā)展模式。美國(guó)國(guó)家臨床生化科學(xué)院將即時(shí)檢驗(yàn)定義為一種在患者身邊由經(jīng)過(guò)未接受臨床實(shí)驗(yàn)室學(xué)科訓(xùn)練的醫(yī)務(wù)工作者或患者所實(shí)施的臨床檢驗(yàn)工作[4]。即時(shí)檢驗(yàn)被認(rèn)為是一種除傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)外的一切檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果可現(xiàn)場(chǎng)分析,同時(shí)可將報(bào)告作為一個(gè)能夠移動(dòng)的微型檢測(cè)系統(tǒng)。在醫(yī)學(xué)診斷效率的提升以及診斷結(jié)果的改進(jìn)方面,即時(shí)檢驗(yàn)在最初的研究中凸顯出了諸多的優(yōu)勢(shì)[5]。在較早的研究中已經(jīng)體現(xiàn)了其在血糖檢測(cè)以及艾滋病檢測(cè)領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用,并在其他疾病的檢測(cè)診斷方面也做出了巨大的貢獻(xiàn)。

        另外,微流控芯片的即時(shí)檢驗(yàn)裝置與中心實(shí)驗(yàn)室相比也具有諸多優(yōu)勢(shì),如尺寸規(guī)模較小、檢測(cè)靈活性較高、檢測(cè)設(shè)備不需要過(guò)多的投入試劑以及樣本使用量、操作方法簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度較快等。因此,微流控芯片在基層醫(yī)院以及發(fā)展中國(guó)家得到良好的應(yīng)用,比較易于被使用者接受與認(rèn)可。

        2 微流控芯片技術(shù)的應(yīng)用現(xiàn)狀

        微流控芯片的即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)能夠體現(xiàn)出微流控技術(shù)的絕大多數(shù)特性,且在生物工程、材料、化學(xué)等學(xué)科被廣泛應(yīng)用。微流控芯片即時(shí)檢驗(yàn)在臨床免疫測(cè)定工作中的應(yīng)用集中體現(xiàn)在細(xì)菌病毒以及寄生蟲(chóng)等的相關(guān)檢測(cè)工作中,同時(shí)也適用于分子診斷工作中寡核苷酸的測(cè)定;此外,微流控芯片的即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)也適用于核酸提取、血液分析以及細(xì)胞分析等領(lǐng)域。在各個(gè)領(lǐng)域內(nèi)涉及到的相關(guān)研究不僅是一對(duì)一的,而且是一對(duì)多的,均能夠推動(dòng)微流控芯片的即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步及發(fā)展。

        與傳統(tǒng)檢測(cè)技術(shù)相比,DNA提取工作非常耗費(fèi)人力、物力及財(cái)力,且對(duì)操作過(guò)程有著嚴(yán)格的要求及限制,如接觸到有毒、有害的物質(zhì)或者試劑時(shí)會(huì)對(duì)檢查結(jié)果造成誤差。而微流控芯片技術(shù)可從生物樣品細(xì)胞中提取核苷酸并將其隔離,為基因分析帶來(lái)了革命性的改變,因此,被臨床作為檢測(cè)分析DNA的一個(gè)科學(xué)的方法。微流控芯片技術(shù)的操作方法可總結(jié)為3步:在離液鹽的環(huán)境下對(duì)DNA進(jìn)行吸附、將其溶于乙醇后再將雜質(zhì)清除及對(duì)含有緩沖液的DNA進(jìn)行洗脫。需注意的是,固相提取物需要依靠DNA及固相載體間的結(jié)合性能,在對(duì)溫度、PH值、緩沖液的敏感性進(jìn)行鑒別時(shí),存在較高的敏感性,因此,在實(shí)際操作過(guò)程中容易出現(xiàn)DNA片段缺失。相比之下,除去DNA之外的其他細(xì)胞溶解物也容易對(duì)結(jié)合反應(yīng)的過(guò)程造成不良影響。在當(dāng)前階段,提取效率通??杀3衷?0%~90%,故今后還需利用新型的技術(shù)進(jìn)行操作以彌補(bǔ)當(dāng)前工作中的不足。

        微流控芯片技術(shù)開(kāi)始在如刑事科學(xué)、環(huán)境檢測(cè)、生物醫(yī)學(xué)、新型藥品合成、食品和商品等各個(gè)領(lǐng)域被廣泛的解析及應(yīng)用,其中最為熱門的是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的分析。在當(dāng)前階段,微流控芯片技術(shù)的主要應(yīng)用范圍涵蓋了DNA測(cè)序、核酸分理與定量、基因突變以及表達(dá)差異分析等。另外,也存在采用微流控芯片技術(shù)篩查以及分析蛋白質(zhì)的相關(guān)報(bào)道。

        3 微流控芯片技術(shù)的特點(diǎn)

        與傳統(tǒng)的生物技術(shù)相比,微流控芯片技術(shù)在疾病檢測(cè)及診斷方面表現(xiàn)出質(zhì)的飛躍,其突出的特點(diǎn)表現(xiàn)在微型化、自動(dòng)化以及高通量化[6]。微流控芯片技術(shù)的開(kāi)發(fā)特點(diǎn)是將生物化學(xué)作為研究基礎(chǔ),將微機(jī)電加工技術(shù)作為最基本的依托,將微管道網(wǎng)絡(luò)作為結(jié)構(gòu)特征,借助各個(gè)工作單元獨(dú)立執(zhí)行并完成單一反應(yīng)或者單元操作,同時(shí)能夠完成相對(duì)較為復(fù)雜的工作,由此保證各個(gè)芯片成為一個(gè)時(shí)刻呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)的系統(tǒng),并能夠?qū)⒎蛛x、化學(xué)反應(yīng)以及檢測(cè)等全部融入到芯片中,對(duì)其加以重復(fù)使用,最大程度地保證了該技術(shù)的適用范圍[7]。微流控芯片技術(shù)屬于一種通用性較強(qiáng)的DNA芯片,其操作特異性由聚合酶鏈反應(yīng)所控制,為此,也可將其作為檢測(cè)平臺(tái),為操作者提供菜單式的服務(wù)及可選擇的具體臨床信息,這也為其未來(lái)的發(fā)展方向奠定了基礎(chǔ)[8]。

        4 微流控芯片技術(shù)的醫(yī)學(xué)檢測(cè)應(yīng)用現(xiàn)狀

        4.1 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)

        微流控芯片技術(shù)在與聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)結(jié)合后可在短時(shí)間內(nèi)快速地完成擴(kuò)增工作,一方面可縮小反應(yīng)體系,提高檢測(cè)靈敏度,另一方面可縮短反應(yīng)時(shí)間,易于攜帶,被認(rèn)為是當(dāng)前醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域工作中重要的新型技術(shù)。曾有研究報(bào)道就微流控芯片技術(shù)結(jié)合聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)進(jìn)行了分析,研發(fā)出了相對(duì)靈活的交替拉推式主動(dòng)數(shù)字化微流控芯片技術(shù),以此保證微空的聚合酶鏈反應(yīng)樣品數(shù)字化率可最大程度的接近100%[9]。該技術(shù)的操作原理在于通過(guò)利用氣動(dòng)閥門,以周期性的動(dòng)態(tài)化表現(xiàn)對(duì)芯片內(nèi)的氣壓進(jìn)行有效調(diào)節(jié),由此最大程度地促進(jìn)真空驅(qū)動(dòng)溶解液分割在微孔中的過(guò)程,從而實(shí)現(xiàn)小體積溶液的數(shù)字化,降低體積的變化。當(dāng)前微流控PCR芯片的研發(fā)及應(yīng)用更加趨于結(jié)構(gòu)的簡(jiǎn)單化、功能的集成化以及一次性的發(fā)展方向,在其基礎(chǔ)上能夠完成完整的生物樣本分離分析的裝置,這在我國(guó)當(dāng)前醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中亦得到了相對(duì)廣泛的應(yīng)用。

        4.2 病原體檢測(cè)

        基于微流控芯片技術(shù)的病原體檢測(cè)在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用,并顯示出了較高的準(zhǔn)確性及靈敏度,所需檢測(cè)的時(shí)間也相對(duì)較短。曾有研究[10]針對(duì)微流控芯片技術(shù)在下一代病原微生物診斷中的應(yīng)用進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)微流控系統(tǒng)可構(gòu)成無(wú)細(xì)胞診斷工具,且在應(yīng)用期間能夠與其他應(yīng)用技術(shù)相互結(jié)合,進(jìn)而完成一系列的跟蹤及檢測(cè)病原體等工作,這也為病原體臨床檢測(cè)工作提供了可靠依據(jù)。微流控芯片技術(shù)在病原體檢測(cè)方法主要分為細(xì)菌檢測(cè)以及病毒檢測(cè)兩個(gè)部分。

        4.2.1細(xì)菌檢測(cè)

        目前,微流控芯片技術(shù)在食源性致病菌的檢測(cè)工作中被廣泛應(yīng)用,且該技術(shù)對(duì)食源性致病菌具有較高的敏感性。有研究曾將微流控芯片技術(shù)用于檢測(cè)沙門氏菌、霍亂孤菌、志賀氏菌以及副溶血性孤菌等食品中較為常見(jiàn)的致病菌,結(jié)果顯示,檢測(cè)靈敏性及特異性均較高,且檢測(cè)操作時(shí)間較短,操作成本較低[11]。也有報(bào)道將微流控芯片技術(shù)用于檢測(cè)引起急性腹瀉的病原菌,同樣獲得了較好的效果[12]。此外,微流控芯片技術(shù)用于細(xì)菌耐藥性的檢測(cè)工作中也發(fā)揮了較強(qiáng)的效果,不僅可對(duì)單細(xì)胞乃至單細(xì)胞器的水平對(duì)數(shù)百個(gè)細(xì)胞的耐藥性進(jìn)行分析,也可對(duì)單細(xì)胞的耐藥情況實(shí)施監(jiān)控作用[13]。

        4.2.2病毒檢測(cè)

        微流控芯片技術(shù)也被廣泛應(yīng)用在病毒檢測(cè)工作中,結(jié)合既往研究經(jīng)驗(yàn)可見(jiàn),微流控芯片技術(shù)用于乙型肝炎病毒的檢測(cè)中的效果顯著,具有較高的特異性及靈敏度[14]。與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比,微流控芯片技術(shù)具有小型化以及簡(jiǎn)便化的作用,可提高檢測(cè)工作的效率,在病原體覆蓋度上具有較大的優(yōu)勢(shì)。

        4.3 組織工程檢測(cè)

        微流控芯片技術(shù)與材料科學(xué)的不斷發(fā)展及應(yīng)用推動(dòng)了體外細(xì)胞組織器官的構(gòu)建,這在一定程度上促進(jìn)了高效診斷及檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步。有研究報(bào)道了電活性示蹤跡取代傳統(tǒng)營(yíng)養(yǎng)示蹤劑的新型微流控芯片滲透率的示范方法,其中電化學(xué)滲透并不需要借助人工取樣以及比較復(fù)雜的光學(xué)儀器[15]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),不同類型的電活性示蹤劑還可被分為3種不同的形態(tài),包括惰性的、高效的及穩(wěn)態(tài)的,且這些不同狀態(tài)下的示蹤劑的應(yīng)用可對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的滲透性進(jìn)行測(cè)量[16]。電化學(xué)滲透率測(cè)定方法的應(yīng)用充分結(jié)合了示蹤劑滲透率的便捷性與芯片集成的高效性,因此發(fā)展前景更為廣泛。微流控芯片技術(shù)的應(yīng)用還可用于對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的超快速的富集操作。曾有臨床資料就此展開(kāi)分析[8,17],即對(duì)新型慣性微流控芯片技術(shù)在孕婦全部血樣本中的應(yīng)用進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)該技術(shù)能夠快速地在單細(xì)胞的水平下對(duì)未進(jìn)行標(biāo)記的富集循環(huán)細(xì)胞進(jìn)行分離,并將其用于基因型的鑒定,完成下游免疫熒光染色以及基因分型的分析。此外,此類技術(shù)本身操作相對(duì)簡(jiǎn)單,無(wú)需抗體,因此成本較低,易被推廣。

        4.4 血液分析

        目前,微流控芯片技術(shù)所進(jìn)行的血液分析已被應(yīng)用于各類疾病的診斷工作中,包括生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)等。該技術(shù)適用于各類只用少量的液體即刻完成相應(yīng)的操作,如癌細(xì)胞以及重度貧血患者中。有學(xué)者借助微流控芯片技術(shù)研發(fā)了新型人工胎盤(pán)型微流控血氧合器,該設(shè)備可完成一系列的高氣體交換、低注入量等相關(guān)操作,且在應(yīng)用期間僅僅依賴較低的壓力差即可完成,屬于一種新型的模仿胎盤(pán)制作而成的設(shè)備[17]。該設(shè)備不僅避免了氣體交換功能的丟失,而且其突出的折疊能力實(shí)現(xiàn)了相對(duì)較為緊湊的外形,有助于實(shí)現(xiàn)高吸氧的效果,也可在一定程度上促使早產(chǎn)兒出生體質(zhì)量達(dá)到最低的標(biāo)準(zhǔn)。

        4.5 腫瘤外泌體檢測(cè)

        腫瘤來(lái)源的外泌體通常在腫瘤微環(huán)境胞間通訊中發(fā)揮重要的作用,且優(yōu)勢(shì)突出。在一般情況下,腫瘤外泌體在體液中的含量相對(duì)較為穩(wěn)定,并能夠較快且靈活地分析并反映當(dāng)前腫瘤所處的實(shí)際狀態(tài),也被認(rèn)為是液體檢測(cè)技術(shù)中具有較高潛力的腫瘤標(biāo)志物[18]。目前,外泌體相關(guān)研究中所面臨的一個(gè)最大困難在于如何將其從比較復(fù)雜的生物樣品中加以分離。既往臨床工作中所采取的超速離心法被認(rèn)為是對(duì)外泌體濃縮的最經(jīng)典方法之一。但該方法操作步驟復(fù)雜,且相關(guān)儀器設(shè)備費(fèi)用較高,回收率也相對(duì)較低,臨床應(yīng)用欠佳[19]。而在微流控芯片技術(shù)基礎(chǔ)上進(jìn)行腫瘤外泌體檢測(cè)操作簡(jiǎn)單,可通過(guò)微流控腫瘤切片模型來(lái)研究代謝饑餓梯度下的細(xì)胞行為,由此實(shí)現(xiàn)對(duì)實(shí)體腫瘤細(xì)胞代謝異常的早期診斷,這為后續(xù)腫瘤疾病的治療提供了更多的選擇[20]。

        5 小結(jié)

        近年來(lái),隨著人們生活水平的不斷提高,越來(lái)越多先進(jìn)的技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。目前,臨床工作中有諸多實(shí)際案例證實(shí)了微流控芯片技術(shù)在醫(yī)學(xué)尤其是臨床檢驗(yàn)科工作中的應(yīng)用效果[21-22]。微流控芯片技術(shù)不僅可用于PCT檢測(cè),也可完成現(xiàn)場(chǎng)的檢測(cè)及診斷工作,為后續(xù)的治療奠定基礎(chǔ),還可用于單細(xì)胞的測(cè)序以及微量化學(xué)反應(yīng)等工作,在臨床醫(yī)學(xué)檢測(cè)工作中具有重要地位,在接下來(lái)的研究中可進(jìn)一步地研究并拓展其應(yīng)用范圍。

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