陳文邦，朱 瀟，周 少，杏福寶，唐 震，李小軍，張 雷

蚌埠醫(yī)學(xué)院1癌癥轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)安徽省重點實驗室，2第一附屬醫(yī)院胸外科，安徽 蚌埠 233040

隨著近些年來全球癌癥患者數(shù)越來越多，中國癌癥患者人數(shù)中肺癌病人的總患病率和癌癥死亡率一直居高不下［1,2］。每年大約180萬肺癌患者，且每年近160萬人死于肺癌，5 年肺癌治療患者的生存率為4%～17%［3］。根據(jù)肺癌的組織學(xué)分型大致可以將肺癌分為肺小細(xì)胞癌、鱗癌、腺癌和大細(xì)胞癌等4種組織學(xué)類型［4］。在肺癌的各種病理分型診斷中肺腺癌患者的肺癌占比幾乎是最高的，大約占據(jù)到中國所有的肺癌病例總量的40%［5］。但目前對肺腺癌的發(fā)生發(fā)展及其轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制的探索還不夠深入。因此，對肺腺癌發(fā)生發(fā)展、增殖遷移等方面的研究將有重要意義。

半乳糖凝集素1（galectin-1）是屬于可溶性糖類的蛋白質(zhì)之一，廣泛存在于自然界中［6］。它是一類β-半乳糖苷結(jié)合的哺乳動物類的凝集素，其相對分子質(zhì)量大約是14 000［7］。Galectin-1以二聚體的形式存在，通過疏水相互作用維持疏水核心［8］。半乳糖凝集素可以分為嵌合型（由膠原蛋白和單個CRD重復(fù)結(jié)構(gòu)域融合而成）、原型（僅含有單一的由130個殘基組成的CRD，哺乳動物的Galectin一般屬于原型，這其中就包括galectin-1）和串聯(lián)重復(fù)型（通過短接頭序列串聯(lián)起來的兩個同源CRD）3種分子亞型。Galectin-1作為半乳凝集素家族成員之一［9］，屬于小分子蛋白質(zhì)的一種且在許多動物體內(nèi)都有廣泛的發(fā)現(xiàn)，主要分布于細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞的胞漿中，在人類腫瘤組織病理學(xué)中也受到廣泛的研究，它還被實驗證明其在人類腫瘤基因的克隆生成工作中已發(fā)揮著相當(dāng)重要的推動作用［10,11］。Galectin-1可以與免疫細(xì)胞上的糖基化受體結(jié)合，觸發(fā)腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞功能的抑制，有助于腫瘤的免疫逃逸［12］。Galectin-1具有促進(jìn)炎癥或T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)［13］。半乳糖凝集素1的過表達(dá)被證明存在于多種腫瘤組織中，已經(jīng)有臨床數(shù)據(jù)證明半乳糖凝集素1與腫瘤增殖和血管生成相關(guān)［14］。在經(jīng)典的霍奇金淋巴瘤中RS細(xì)胞通過AP1依賴性增強(qiáng)子選擇性地過度表達(dá)galectin-1［15］。Galectin-1在頭頸部癌患者中分泌明顯增高，而且galectin-1 高表達(dá)的患者具有更差的治療反應(yīng)和總體生存率［16-18］。Galectin-1通過參與EMT通路參與胃癌血管的生成，過表達(dá)galectin-1后可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和血管生成［19,20］。Galectin-1還被證實與胰腺導(dǎo)管癌［21］、乳腺癌［22］、卵巢癌［23］、肝癌［24］、結(jié)直腸癌［25］和食管癌［26］等腫瘤的發(fā)生發(fā)展有緊密的聯(lián)系。研究表明galectin-1 通過α 6β4 和Notch1/Jagged2傳導(dǎo)機(jī)制介導(dǎo)肺癌細(xì)胞的遷移和侵襲，還有研究揭示galectin-1介導(dǎo)著肺癌的耐藥和加速其進(jìn)展［27,28］。但其沒有揭示galectin-1究竟通過何種傳導(dǎo)機(jī)制介導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞的增殖和凋亡等。因此，本研究旨在從基礎(chǔ)實驗的理論基礎(chǔ)上探究galectin-1與肺腺癌的增殖和凋亡等行為是否有關(guān)，且通過何種信號傳導(dǎo)通路影響這些生物學(xué)行為同時通過該信號傳導(dǎo)通路是否同樣也對肺腺癌細(xì)胞的侵襲和遷移是否產(chǎn)生影響。

1 材料和方法

1.1 實驗試劑

正常支氣管上皮細(xì)胞株BEAS-2b和支氣管肺腺癌細(xì)胞株A549、H1299 是直接采用來自于本實驗室保存下來的細(xì)胞株，來源于由中科院上海細(xì)胞庫。細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用于10%的胎牛的血清（四季青公司）培養(yǎng)基、RPMI 1640培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基（Gibco），細(xì)胞生長的環(huán)境為5%的CO2、37 ℃。實時熒光定量PCR所用的引物、小干擾RNA（si-RNA）（上海生工生物工程）。TRIzol、熒光定量的試劑盒、CCK8 的試劑盒（biosharp），逆轉(zhuǎn)錄的試劑盒（碧云天）。Galectin-1和GAPDH 一 抗（Affinity）；BAX、Bcl-2、AKT、p-Akt、ERK、p-ERK、β-actin一抗（武漢三鷹公司）；caspase-3（ABclonal）。與其相對應(yīng)的二抗（碧云天）?；|(zhì)膠（Corning），transwell板（Labselect）。

1.2 標(biāo)本來源

8對配對肺腺癌標(biāo)本和癌旁正常組織標(biāo)本均收集于蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胸外科，癌組織收集腫瘤中心處，癌旁組織收集于距癌組織邊緣5 cm以上處。收集的所有患者均已簽署知情同意書，實驗方案由蚌埠醫(yī)學(xué)院倫理委員會審批（編號2019-024）。所有標(biāo)本收集后均放置于-80 ℃冰箱保存，以便用于后續(xù)實驗。

1.3 實驗方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)于含有約10%活胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基和1640培養(yǎng)基瓶中，細(xì)胞培養(yǎng)箱適宜的培養(yǎng)操作條件通常為約37℃、5%以上的干燥二氧化碳。待細(xì)胞的生長密度接近90%用胰酶消化下來然后離心傳代。

1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 細(xì)胞轉(zhuǎn)染待細(xì)胞的培養(yǎng)密度為50%～80%時，加入2 mL的opti無血清培養(yǎng)基，隨后取出2個1.5 mL無菌的EP管先各加入125 μL的opti無血清培養(yǎng)基，再各加入5 μL的Lip6000和siRNA室溫靜置5 min后將含有siRNA的培養(yǎng)液加入含有Lip6000的培養(yǎng)液中混勻室溫靜置5 min，之后將混勻的培養(yǎng)液加入到六孔板相應(yīng)的孔內(nèi)，后放回培養(yǎng)箱。等待4～6 h，然后切換到正常的培養(yǎng)基，48 h后進(jìn)行相應(yīng)的實驗檢測。

1.3.3 實時熒光定量PCR（Real-time PCR）檢測Galectin-1的mRNA的表達(dá) 從細(xì)胞和臨床病理標(biāo)本肺組織中提取總RNA（Trizol法），然后可以通過逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，再可以通過PCR進(jìn)行擴(kuò)增。用GAPDH作為內(nèi)參。得到的數(shù)據(jù)用2-△△Ct去計算表達(dá)量。熒光定量法和PCR定量法測定的主要技術(shù)參數(shù)反應(yīng)的溫度條件一般設(shè)置為低于95 ℃時預(yù)冷變性溫度5 min，10 s 95 ℃，30 s 60 ℃，40次循環(huán)。引物序列見表1。

表1 Galectin-1、GAPDH引物序列Tab.1 Primer sequence of galectin-1 and GAPDH

1.3.4 Western blot 待實驗中所示需處理的細(xì)胞貼壁密度達(dá)到了90%左右后就應(yīng)該立即取出用胰酶先把細(xì)胞消化溶解下來，后再加蛋白裂解液拌勻后取出放置于冰上冷凍至少30 min，最后可進(jìn)行離心獲取總蛋白。利用BCA 定量法測定蛋白濃度，電泳凝膠為12%的SDSPAGE。電泳時可先以80 Ⅴ的電壓電泳至少30 min，之后可調(diào)整電壓調(diào)整為超過110 Ⅴ時再重復(fù)電泳90 min。電泳完成后再進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜前PⅤDF膜要先用甲醇去激活，之后再以200 mA的恒定電流去進(jìn)行轉(zhuǎn)膜，轉(zhuǎn)膜結(jié)束后先用封閉液封閉，再4攝氏度冰箱內(nèi)一抗孵育過夜，洗膜（3次，8 min），然后室溫二抗孵育2 h即可，洗膜（3次，8 min），最后進(jìn)行曝光。

1.3.5 CCK8檢測細(xì)胞增殖 接種5000個左右的細(xì)胞在96孔板里面，等細(xì)胞貼壁后進(jìn)行轉(zhuǎn)染實驗，每組鋪設(shè)6個復(fù)孔，共5塊板，分別為24、48、72、96、120 h等時間點去檢測在450 nm處波長的吸光度。在進(jìn)行上機(jī)檢測之前每個孔要加入10 μL的CCK8試劑。先震蕩混勻，然后要放在培養(yǎng)箱中1h，之后再去酶標(biāo)儀上機(jī)檢測。

1.3.6 劃痕實驗檢測細(xì)胞遷移能力 將細(xì)胞鋪在六孔板中，待到細(xì)胞密度長到60%左右根據(jù)Lip6000轉(zhuǎn)染試劑的操作手冊對A549和H1299細(xì)胞系轉(zhuǎn)染siRNA，待細(xì)胞密度長到90%左右用200 μL的槍頭去進(jìn)行劃痕實驗，然后將細(xì)胞培養(yǎng)基變?yōu)闊o血清培養(yǎng)基，之后在0和24 h對劃痕處進(jìn)行拍照。

1.3.7 Transwell實驗檢測細(xì)胞遷移能力 待細(xì)胞長滿后用胰酶將細(xì)胞給消化下來，然后用無血清培養(yǎng)基去重懸細(xì)胞。首先將無血清的細(xì)胞懸液先緩緩加入到transwell的上室中，然后將混有血清和細(xì)胞的培養(yǎng)基緩慢加入transwell下室。在細(xì)胞培養(yǎng)箱中放置36 h。之后再取出transwell 板，用干棉簽輕輕仔細(xì)揩拭去transwell上室中殘留的殘余的培養(yǎng)基物質(zhì)和細(xì)胞，之后可以取出，我們先用多聚甲醛固定約30 min，最后再用結(jié)晶紫染色，晾干放置約30 min，然后取再用倒置式的光學(xué)顯微鏡上作顯微鏡觀察并拍照。

1.3.8 Transwell實驗檢測細(xì)胞的侵襲能力 先用無血清的1640培養(yǎng)基以1∶8的比例去稀釋基質(zhì)膠，transwell的每個小室中加入50 μL稀釋后的基質(zhì)膠，搖勻后放入培養(yǎng)箱，待基質(zhì)膠凝固約2 h。然后再用胰蛋白酶液溶解消化細(xì)胞，然后用無血清培養(yǎng)基去重懸細(xì)胞。首先將無血清的細(xì)胞懸液先緩緩加入到transwell的上室中，然后將混有血清和細(xì)胞的培養(yǎng)基緩慢加入transwell下室。在細(xì)胞培養(yǎng)箱中放置36 h。然后再將transwell板取出，用小棉簽均勻小心滴擦去基質(zhì)膠,之后取出，先用多聚甲醛固定30 min，最后在再用結(jié)晶紫進(jìn)行染色，晾干再保存至少30 min，然后再在用倒置式的光學(xué)顯微鏡上進(jìn)行觀察實驗或拍照。

1.3.9 細(xì)胞凋亡實驗 先將已經(jīng)培養(yǎng)好的細(xì)胞先用無EDTA的胰酶消化下來，再用培養(yǎng)過該細(xì)胞的混有凋亡細(xì)胞的培養(yǎng)基去終止消化，然后在用已經(jīng)預(yù)混冷處理過了的PBS清洗2次。最后就可以加凋亡試劑，實驗組和對照組每管加入5 μL的FITC和10 μL的PI染色液，避光室溫下染色10 min，最后上流式機(jī)檢測凋亡率。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

用GraphPad Prism8軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)的分析，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，兩組數(shù)據(jù)組間使用獨立樣本t檢驗，多組數(shù)據(jù)使用單因素方差分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義，所有實驗均是獨立重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 肺腺癌組織galectin-1的mRNA的表達(dá)情況

PCR 結(jié)果顯示，肺腺癌患者組織中g(shù)alectin-1 的mRNA表達(dá)水平遠(yuǎn)高于癌旁正常肺組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，圖1）。

圖1 8對配對的肺腺癌組織和癌旁正常組織galectin-1的mRNA的表達(dá)情況Fig.1 Galectin-1 mRNA expression in 8 pairs of lung adenocarcinoma tissues and adjacent normal tissues.*P＜0.05;**P＜0.01;***P＜0.001 vs normal tissues group.

2.2 肺腺癌細(xì)胞株和人正常支氣管上皮細(xì)胞株galectin-1 mRNA表達(dá)水平

PCR 結(jié)果顯示，肺腺癌細(xì)胞株H1299 和A549 的galectin-1mRNA表達(dá)水平明顯高于正常人支氣管上皮細(xì)胞BEAS-2b，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，圖2）

圖2 肺腺癌細(xì)胞株和人正常支氣管上皮細(xì)胞株galectin-1mRNA表達(dá)水平Fig.2 Galectin-1 mRNA expression levels in lung adenocarcinoma cell lines and human normal bronchial epithelial cell lines.***P＜0.001 vs BEAS-2b.

2.3 si-RNA對galectin-1的干擾效率

熒光定量PCR和蛋白印跡檢測3條RNA序列對galectin-1的干擾，結(jié)果顯示si-148這條序列對galectin-1的干擾效率最高（P＜0.01，圖3），后續(xù)實驗均采用si-148這條序列的si-RNA進(jìn)行。

圖3 si-RNA對galectin-1的干擾效率Fig.3 Interference efficiency of si-RNA for galectin-1 knockdown.A: Galectin-1 was efficiently knocked down in A549 cells.B: The expression of galectin-1 protein was down-regulated in A549 cells.C: Relative expression of Galectin-1 mRNA in A549 cells after knockdown.D: Galectin-1 was successfully knocked down in H1299 cells.E: Relative expression of galectin-1 protein was downregulated in H1299 cells.F:Relative expression of galectin-1 mRNA in H1299 cells after knockdown.*P＜0.05;**P＜0.01;***P＜0.001 vs control group.

2.4 敲低galectin-1表達(dá)后對肺腺癌細(xì)胞和正常支氣管上皮細(xì)胞增殖能力的影響

利用CCK8實驗檢測干擾galectin-1表達(dá)后，實驗組即是干擾galectin-1表達(dá)的相對與對照組的增殖能力明顯降低（P＜0.01，圖4）。在正常支氣管上皮細(xì)胞中實驗組與對照組結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖4 干擾galectin-1后對肺腺癌細(xì)胞和正常支氣管上皮細(xì)胞增殖能力的影響Fig.4 Effects of galectin-1 interference on proliferation of the two lung adenocarcinoma cell lines A549 (A) and H1299 (B) and in BEAS-2b cells (C).*P＜0.05;**P＜0.01 vs si-RNA.

2.5 干擾galectin-1的表達(dá)后對肺腺癌細(xì)胞和正常支氣管上皮細(xì)胞的侵襲能力的影響

實驗組細(xì)胞的侵襲能力明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，圖5）。在正常支氣管上皮細(xì)胞中實驗組與對照組結(jié)果無差異。

圖5 干擾galectin-1的表達(dá)后對肺腺癌細(xì)胞和正常支氣管上皮細(xì)胞的侵襲能力的影響Fig.5 Effect of interference with galectin-1 expression on invasion ability of lung adenocarcinoma cells and BEAS-2b cells.A,B:Transwell assay of A549 cells(Original magnification: × 200).C,D: Transwell assay of H1299 cells(×200).E,F:Transwell assay of BEAS-2b cells(×200).**P＜0.01 vs control group.

2.6 干擾galectin-1的表達(dá)后對肺腺癌細(xì)胞和支氣管上皮細(xì)胞的體外遷移能力產(chǎn)生的影響

實驗組的細(xì)胞遷移能力明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，圖6）。在正常支氣管上皮細(xì)胞中實驗組與對照組結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

圖6 干擾galectin-1的表達(dá)后對肺腺癌細(xì)胞和正常支氣管上皮細(xì)胞的體外遷移能力產(chǎn)生的影響Fig.6 Effect of galectin-1 knockdown on in vitro migration of lung adenocarcinoma cells.A,B:Transwell assay of A549 cell migration (×200).C,D: Transwell assay of H1299 cell migration(× 200).E,F: Transwell assay of BEAS-2b cell migration (× 200).**P＜0.01 vs control group.

2.7 劃痕實驗檢測galectin-1對細(xì)胞的遷移能力的影響

實驗組的細(xì)胞遷移能力明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，圖7）。在正常支氣管上皮細(xì)胞中實驗組與對照組結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖7 劃痕實驗檢測galectin-1對細(xì)胞的遷移能力的影響Fig.7 Effect of galectin-1 knockdown on migration of A549 cells(A,B),H1299 cells(C,D)and BEAS-2b cells(E,F)detected by wound healing assay(×100).**P＜0.01 vs control group.

2.8 干擾galectin-1表達(dá)后對肺腺癌細(xì)胞和正常支氣管上皮細(xì)胞凋亡情況的影響

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，與對照組相比，干擾galectin-1表達(dá)組的凋亡率明顯上升，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，圖8）。在正常支氣管上皮細(xì)胞中實驗組與對照組結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖8 干擾galectin-1表達(dá)后對肺腺癌細(xì)胞凋亡情況的影響Fig.8 Effects of galectin-1 knockdown on apoptosis of A549 cells (A,B),H1299 cells (C,D) and BEAS-2b cells (E,F)detected by annexinⅤ-FITC/propidium iodide apoptosis assay.**P＜0.01;***P＜0.001 vs control group.

2.9 干擾galectin-1 表達(dá)后BAX、Bcl-2、cleaved caspase3等凋亡相關(guān)蛋白的變化

干擾galectin-1表達(dá)后，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白BAX和cleaved caspase3的表達(dá)量增加，抑制細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白Bcl-2的表達(dá)量下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，圖9）。

圖9 干擾galectin-1表達(dá)后BAX、Bcl-2、cleaved caspase3等凋亡相關(guān)蛋白的變化Fig.9 Changes of BAX,Bcl-2,cleaved caspase-3 and other apoptosis-related proteins after galectin-1 knockdown.A: Western blotting of apoptosis-related proteins in A549 cells.B: Western blotting of apoptosis-related proteins in H1299 cells.C,D:Quantitative analysis of the protein expressions inA549 cells and H1299 cells,respectively.*P＜0.05;**P＜0.01 vs control group.

2.10 干擾galectin-1表達(dá)后AKT、ERK等2條通路的激活情況的變化

干擾galectin-1表達(dá)后與對照組相比AKT信號通路的磷酸化水平無明顯變化，ERK信號通路的磷酸化水平明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01，圖10）。

圖10 干擾galectin-1表達(dá)后AKT、ERK等2條通路的激活情況的變化Fig.10 Changes in the activation of Akt and ERK pathways after galectin-1 knockdown detected by Western blotting in A549 cells(A,C)and H1299 cells(B,D).**P＜0.01 vs control group.

3 討論

本研究中我們通過si-RNA 敲低肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和H1299中g(shù)alectin-1的表達(dá)后，其增殖能力明顯下降，細(xì)胞的侵襲和遷移能力也明顯下降，細(xì)胞的凋亡率明顯上升。上述實驗結(jié)果表明，galectin-1在肺腺癌細(xì)胞系的增殖、侵襲、遷移和凋亡等功能的調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用。

細(xì)胞凋亡由基因調(diào)控，在促凋亡蛋白如BAX、抑凋亡蛋白Bcl-2和凋亡調(diào)控因子caspase3等共同參與下細(xì)胞的有序性死亡［29,30］。細(xì)胞凋亡的失調(diào)可導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生，有超過50%的腫瘤在凋亡機(jī)制上失調(diào)，凋亡的異常常導(dǎo)致本應(yīng)死亡的細(xì)胞存留了下來，這其中包括有一些突變的細(xì)胞增殖失控從而導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生。Caspase蛋白作為細(xì)胞凋亡的啟動者和執(zhí)行者，是細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶在細(xì)胞凋亡的過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。細(xì)胞凋亡過程中caspase3被激活轉(zhuǎn)化為有活性的cleaved-caspase3，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞體內(nèi)蛋白質(zhì)的降解，使細(xì)胞走向不可逆的死亡，caspase3被激活是細(xì)胞進(jìn)入凋亡階段的標(biāo)志［31］。BAX和Bcl-2是相互拮抗的兩種凋亡蛋白，正常情況下二者以適當(dāng)?shù)谋壤嬖冢诩?xì)胞發(fā)生凋亡后，BAX比例增加，Bcl-2比例下降，在BAX表達(dá)增加后可以激活caspase3蛋白加速進(jìn)入凋亡過程［32-34］。本實驗我們通過si-RNA 敲低galectin-1表達(dá)后，cleaved-caspase3和BAX表達(dá)增加，Bcl-2表達(dá)下降，提示galectin-1與肺腺癌細(xì)胞caspase3/BAX/Bcl-2凋亡信號通路有關(guān)。

細(xì)胞外信號調(diào)控激酶（ERK）途徑是絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）超家族的成員，ERK信號通路是研究最活躍的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一同時也是MAPK信號通路中最主要最經(jīng)典的通路，以磷酸化的形式激活［35,36］。有研究發(fā)現(xiàn)ERK信號通路的激活是通過p-ERK將信號傳導(dǎo)到細(xì)胞核與靶基因結(jié)合，再參與調(diào)控下游靶基因表達(dá)從而參與細(xì)胞增殖、凋亡、分化、代謝、侵襲、遷移和轉(zhuǎn)錄的調(diào)控［37-39］。例如在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)GPR19 通過ERK途徑調(diào)控上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的遷移［40］。同時ERK可以作為一個調(diào)控凋亡的關(guān)鍵因子在神經(jīng)元細(xì)胞中發(fā)揮作用［41］。ERK可能通過治療劑的類型、細(xì)胞的特異性以及ERK的激活狀態(tài)來影響來影響細(xì)胞的增殖或凋亡的［42］。本研究發(fā)現(xiàn)在敲低galectin-1的表達(dá)后，與對照組相比ERK信號通路中的磷酸化水平明顯降低。由此可得galectin-1的敲低影響著肺腺癌細(xì)胞ERK磷酸化水平的表達(dá)。

綜上所述，本實驗結(jié)果表明galectin-1可能通過改變ERK信號通路的磷酸化激活水平來調(diào)控肺腺癌細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移和凋亡。Galectin-1的異常增高可能是肺腺癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一，galectin-1有望可能成為干預(yù)肺腺癌臨床治療的關(guān)鍵靶標(biāo)。但是我們僅僅是敲低了galectin-1表達(dá)后，肺腺癌細(xì)胞中信號通路蛋白ERK的磷酸化水平降低，關(guān)于Galectin-1如何具體的調(diào)控ERK磷酸化水平的具體機(jī)制還需要進(jìn)一步的探究。