陳志超，李瀾瀟，徐慶陽(yáng)

(天津科技大學(xué) 生物工程學(xué)院，天津 300450)

L-苯丙氨酸(L-phenylalanine，L-phe)是人體8種必需氨基酸之一[1]，在食品和制藥工業(yè)中有諸多應(yīng)用，是新型甜味劑阿斯巴甜的重要前體物質(zhì)[2]，也是部分風(fēng)味物質(zhì)的鮮味物質(zhì)[3]，還可合成調(diào)味劑苯乙醇[4]，后者廣泛應(yīng)用于乳制品與調(diào)味品中，在醫(yī)藥方面主要作為抗癌藥物的載體[5-6]。常用的生產(chǎn)L-苯丙氨酸的方法為酶法與微生物發(fā)酵法[7]，目前工業(yè)化生產(chǎn)L-phe主要采用具有原料廉價(jià)易得、環(huán)境污染小、產(chǎn)物純度高等優(yōu)點(diǎn)的微生物發(fā)酵法[8-9]。

L-phe長(zhǎng)勢(shì)與產(chǎn)量聯(lián)系密切，是一種與菌體生長(zhǎng)部分耦聯(lián)的產(chǎn)物[10]。維生素H可在脂肪酸生物合成、氨基酸代謝和糖異生的羧化反應(yīng)中作為酶促輔因子，能夠激活相應(yīng)酶的羧基轉(zhuǎn)移亞基的CO2[11-13]；維生素H用量一直是微生物發(fā)酵生產(chǎn)的重要參數(shù)[14-15]。在大腸桿菌中，過(guò)量維生素H會(huì)導(dǎo)致菌體代謝旺盛、生長(zhǎng)過(guò)快，出現(xiàn)糖酸轉(zhuǎn)化率大幅降低的問(wèn)題；過(guò)少或者不添加維生素H會(huì)導(dǎo)致菌體生長(zhǎng)較慢、生物量較低、產(chǎn)酸效率偏低等問(wèn)題。氨基酸發(fā)酵生產(chǎn)常采用分批補(bǔ)料發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基一次性加入罐中，過(guò)程流加葡萄糖等作為碳源，該工藝勢(shì)必會(huì)導(dǎo)致菌體在發(fā)酵前期處于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過(guò)飽和的狀態(tài)[16]，造成菌體營(yíng)養(yǎng)中毒，也會(huì)造成營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的浪費(fèi)和代謝流的改變[17]。

為解決上述問(wèn)題，本研究對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基中維生素H的濃度進(jìn)行了優(yōu)化，旨在葡萄糖亞適量控制工藝[18]前提下，采用全營(yíng)養(yǎng)流加工藝，即：將發(fā)酵培養(yǎng)基按一定比例分為底物培養(yǎng)基和流加培養(yǎng)基，底物培養(yǎng)基供菌體初期生長(zhǎng)，流加培養(yǎng)基在發(fā)酵過(guò)程中按需流加，最終實(shí)現(xiàn)了生物量、L-phe產(chǎn)量、糖酸轉(zhuǎn)化率的同步提高，為大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)L-phe提供了新的思路。

1 材料與方法

1.1 菌株

L-phe大腸桿菌生產(chǎn)菌：由天津科技大學(xué)代謝工程實(shí)驗(yàn)室保存并提供。

1.2 培養(yǎng)基

種子培養(yǎng)基：葡萄糖30 g/L，酵母粉4 g/L，蛋白胨2 g/L，檸檬酸1.5 g/L，MgSO4·7H2O 1.5 g/L，KH2PO42.0 g/L，硫酸銨2.0 g/L，維生素B11 mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 10 mg/L，MnSO4·H2O 5 mg/L，維生素H 1 mg/L，酪氨酸1.5 g/L，卡那霉素20 g/L。

發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖20 g/L，MgSO4·7H2O 2 g/L，酵母粉4.5 g/L，蛋白胨1.5 g/L，硫酸銨2 g/L，檸檬酸1.5 g/L，K2HPO4·3H2O 6～10 g/L，酪氨酸1.2 g/L，谷氨酸1.2 g/L，維生素H 0～2 mg/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 20 mg/L，MnSO410 mg/L，維生素B1、B3、B5、B12各2 mg/L，微量元素混合液2 mL/L[19]，卡那霉素10 mg/L。

1.3 主要試劑與儀器

葡萄糖：食品級(jí)；磷酸二氫鉀、酪氨酸、檸檬酸、硫酸銨、維生素H、谷氨酸：均為分析純。

LDZH-100KBS型全自動(dòng)立式蒸汽滅菌器 天津博鑫生物科技有限公司；5 L自動(dòng)控制發(fā)酵罐 上海保興生物設(shè)備工程有限公司；SBA-40E生物傳感分析儀 山東省科學(xué)院生物研究所；Agilent 1200高效液相色譜儀 Agilent Technologies公司；KQ-C高壓蒸汽發(fā)生器 上海奉賢協(xié)新機(jī)電廠；723分光光度計(jì) 上海菁華科技儀器有限公司；Olympus生物顯微鏡 日本Olympus株式會(huì)社；尾氣分析儀 美國(guó)諾瓦生物醫(yī)學(xué)公司；S-433D氨基酸分析儀 德國(guó)賽卡姆公司。

1.4 培養(yǎng)方法

1.4.1 菌種活化

取甘油保菌管中菌株置于斜面培養(yǎng)基上，于37 ℃倒置恒溫培養(yǎng)12 h，傳代2次。

1.4.2 5 L罐種子培養(yǎng)

初始發(fā)酵液體積為3 L，發(fā)酵溫度為37 ℃，初始通氣量為1.6 L/min，初始攪拌轉(zhuǎn)速為200 r/min，后期調(diào)節(jié)通氣量與轉(zhuǎn)速維持DO(溶氧值)在50%左右，通過(guò)流加25%氨水調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH為6.8～7.0，OD600 nm>25時(shí)接種發(fā)酵。

1.4.3 5 L罐分批補(bǔ)料發(fā)酵培養(yǎng)

接種量為20%～30%，發(fā)酵溫度為37 ℃，初始通氣量為0.65 L/min，初始攪拌轉(zhuǎn)速為200 r/min，后期調(diào)節(jié)通氣量與轉(zhuǎn)速，維持DO在35%～50%，通過(guò)流加25%氨水控制發(fā)酵液pH為6.8～7.0，當(dāng)初始培養(yǎng)基中葡萄糖耗盡(發(fā)酵4～7 h) 時(shí)，流加800 g/L的葡萄糖，控制糖濃度在0～0.5 g/L，并隨糖液流加菌株缺陷物質(zhì)酪氨酸，每升糖液混合1 g酪氨酸，酪氨酸利用NaOH溶液溶解后單獨(dú)滅菌，待糖液與酪氨酸溶氧均冷卻后混勻，發(fā)酵50 h。

1.4.4 5 L罐全營(yíng)養(yǎng)流加發(fā)酵培養(yǎng)

發(fā)酵控制工藝與1.4.3相同。將發(fā)酵培養(yǎng)基按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案分成底物培養(yǎng)基與流加培養(yǎng)基，在發(fā)酵過(guò)程中按需補(bǔ)充菌體所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。

1.5 檢測(cè)與分析方法

1.5.1 pH、DO、溫度的測(cè)定[20]

pH、DO、溫度均采用梅特勒電極在線實(shí)時(shí)檢測(cè)，并配合精密pH試紙(6.4～8.0)人工校正pH。

1.5.2 菌體生物量的測(cè)定[21]

每隔2 h取樣，適當(dāng)稀釋至吸光值可測(cè)濃度范圍(0.2～0.9)，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)量樣品在600 nm處的吸光值。

1.5.3 L-phe及副產(chǎn)物的測(cè)定

發(fā)酵液中L-phe產(chǎn)量采用LC-20AT高效液相色譜儀測(cè)定，乙酸的檢測(cè)參考文獻(xiàn)[22]，谷氨酸采用SBA生物傳感分析儀測(cè)定。

1.5.4 殘?zhí)堑臏y(cè)定及耗糖速率、轉(zhuǎn)化率的計(jì)算

發(fā)酵液殘?zhí)菨舛壤肧BA生物傳感分析儀測(cè)定。利用天平檢測(cè)耗糖量，并以下式計(jì)算耗糖速率。

式中：m為單位時(shí)間耗糖量，g；t為時(shí)間，h；v為發(fā)酵液體積，L。

糖酸轉(zhuǎn)化率的計(jì)算方法參照文獻(xiàn)[23]。

2 結(jié)果與分析

2.1 維生素H濃度對(duì)L-phe發(fā)酵的影響

本部分實(shí)驗(yàn)采用分批補(bǔ)料發(fā)酵工藝，在發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上分別額外添加0，0.5，1.0，2.0 mg/L維生素H，并以添加0 mg/L維生素H的發(fā)酵組作為對(duì)照，探究維生素H對(duì)大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)L-phe的影響。

2.1.1 維生素H濃度對(duì)菌體生長(zhǎng)與L-phe產(chǎn)量的影響

圖1 不同濃度維生素H對(duì)菌體生長(zhǎng)及L-phe產(chǎn)量的影響Fig.1 Effects of different concentrations of vitamin H on the bacteria growth and L-phe yield

由圖1可知，維生素H濃度越高，菌體在發(fā)酵前期的生長(zhǎng)速率越快，最大生物量越大，達(dá)到菌體穩(wěn)定期的時(shí)間越短，菌體量穩(wěn)定期維持時(shí)間越短，發(fā)酵后期菌體衰亡速度越快，放罐時(shí)生物量越少；L-phe產(chǎn)量與菌體量變化趨勢(shì)略有不同，發(fā)酵25 h前，隨著維生素H濃度的增加，L-phe積累速度隨之加快，25 h后，各組L-phe積累速度均下降，0，0.5 mg/L維生素H添加組下降緩慢，L-phe持續(xù)積累，1，2 mg/L添加組下降趨勢(shì)明顯，L-phe積累近乎停滯。

圖2 不同濃度維生素H對(duì)應(yīng)的耗糖速率Fig.2 Sugar consumption rates of different concentrations of vitamin H

由圖2可知，各組發(fā)酵前期耗糖速度均提升迅速，添加維生素H濃度越高，對(duì)應(yīng)最大耗糖速率越大，穩(wěn)定期越短，后期下降速度越快，這與菌體量變化趨勢(shì)一致。最終各組(添加0，0.5，1，2 mg/L維生素H)分別積累了80.7，84.8，78.3，71.0 g/L的L-phe，其中以0.5 mg/L表現(xiàn)最優(yōu)。

2.1.2 維生素H濃度副產(chǎn)物及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響

為了更直觀地分析維生素H濃度對(duì)產(chǎn)酸效率的影響，分別檢測(cè)了副產(chǎn)物谷氨酸、乙酸的產(chǎn)量，并計(jì)算了糖酸轉(zhuǎn)化率，見(jiàn)圖3。

圖3 不同濃度維生素H對(duì)副產(chǎn)物及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響Fig.3 Effects of different concentrations of vitamin H on the by-products and sugar-acid conversion rate

由圖3可知，隨著維生素H添加量的提高，乙酸與谷氨酸均呈明顯上升趨勢(shì)，1，2 mg/L維生素H添加組乙酸較對(duì)照組(1.23 g/L)分別提高了70%、135%，谷氨酸較對(duì)照組(2.20 g/L)分別提高了90%、140%，0.5 mg/L添加組乙酸與谷氨酸較對(duì)照組僅分別提升了8%、9%；糖酸轉(zhuǎn)化率隨著維生素H添加量的提高呈下降趨勢(shì)，0.5，1，2 mg/L添加組較對(duì)照組(25.3%)分別降低了2.3%、15.1%、19.7%。

2.2 全營(yíng)養(yǎng)流加工藝對(duì)L-phe發(fā)酵生產(chǎn)的影響

全營(yíng)養(yǎng)流加工藝是指將傳統(tǒng)分批補(bǔ)料發(fā)酵中一次性投入罐內(nèi)的發(fā)酵培養(yǎng)基分成底物培養(yǎng)基與添加培養(yǎng)基兩部分，底物培養(yǎng)基一次性投入罐內(nèi)，為發(fā)酵初期提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，流加培養(yǎng)基在發(fā)酵過(guò)程中按需流加，為不同生長(zhǎng)階段的菌體提供最適的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度。本研究中，流加培養(yǎng)基體積為400 mL，底物培養(yǎng)基按需求配制。如：配制3 L用量培養(yǎng)基，底物培養(yǎng)基∶添加培養(yǎng)基為2∶8，則用500 mL自來(lái)水溶解相應(yīng)試劑，400 mL為流加培養(yǎng)基，100 mL為底物培養(yǎng)基。

2.2.1 底物培養(yǎng)基與流加培養(yǎng)基比例對(duì)L-phe發(fā)酵生產(chǎn)的影響

圖4 底物培養(yǎng)基與流加培養(yǎng)基比例對(duì)L-phe發(fā)酵生產(chǎn)的影響Fig.4 Effects of the ratios of substrate medium to fed-batch medium on the production of L-phe by fermentation

本部分研究以2.1中額外添加0.5 mg/L維生素H的發(fā)酵組為對(duì)照，并在培養(yǎng)基中添加0.5 mg/L維生素H。由圖4可知，A組菌體前期生長(zhǎng)受到明顯的抑制，最大菌體量遠(yuǎn)低于其他組，但其生長(zhǎng)周期為34 h，高于B、C、D組，前期營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)饑餓狀態(tài)導(dǎo)致菌體在生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期無(wú)法最大程度地?cái)U(kuò)大菌體量，發(fā)酵后期產(chǎn)物與副產(chǎn)物的積累導(dǎo)致菌體生長(zhǎng)停滯，此時(shí)流加培養(yǎng)基無(wú)法充分發(fā)揮作用，受菌體量影響產(chǎn)量亦低于其他組；D組流加策略并未起明顯作用，菌體生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)物生成曲線與對(duì)照組基本一致，50%的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)已經(jīng)足夠支撐菌體前期的生長(zhǎng)，隨著流加培養(yǎng)基添加量的增加，整個(gè)過(guò)程依舊處于營(yíng)養(yǎng)過(guò)飽和狀態(tài)，并不能發(fā)揮出流加的優(yōu)勢(shì)；C、D兩組恰好處于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)亞適量狀態(tài)，即發(fā)酵各個(gè)時(shí)期營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)恰好能夠支撐菌體生長(zhǎng)，既能保持菌體活力，又能最大程度利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，最終L-phe產(chǎn)量分別為86.0，87.5 g/L，較對(duì)照組分別提高了1.4%、3.1%，最大菌體量分別為144.1，149.1，較對(duì)照組分別提高了0.7%、6.5%，達(dá)到菌體量穩(wěn)定期的時(shí)間均為32 h，較對(duì)照組延長(zhǎng)了6 h。

2.2.2 底物培養(yǎng)基與流加培養(yǎng)基比例對(duì)副產(chǎn)物及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響

圖5 不同底物培養(yǎng)基與流加培養(yǎng)基比例對(duì)副產(chǎn)物及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響Fig.5 Effects of different ratios of substrate medium to fed-batch medium on the by-products and sugar-acid conversion rate

由圖5可知，D組乙酸、谷氨酸產(chǎn)量(0.96，1.32 g/L)分別比對(duì)照組降低了28%、45%，糖酸轉(zhuǎn)化率(25.6%)比對(duì)照組提高了3.6%，因此即使同樣是發(fā)酵前期營(yíng)養(yǎng)過(guò)飽和，濃度越高的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)發(fā)酵的影響越大；A組副產(chǎn)物均遠(yuǎn)低于對(duì)照組，糖酸轉(zhuǎn)化率(26.1%也得到了很大提升，但其產(chǎn)量并不出眾；B、C兩組乙酸產(chǎn)量分別為0.64，0.52 g/L，較對(duì)照組分別降低了52%、61%，谷氨酸產(chǎn)量分別為0.46，0.41 g/L，較對(duì)照組分別降低了80.1%、82.9%，糖酸轉(zhuǎn)化率分別為26.7%、27.1%，較對(duì)照組分別提高了7.4%、9.7%。

2.2.3 流加培養(yǎng)基流加時(shí)間與流加速度對(duì)L-phe發(fā)酵生產(chǎn)的影響

表1 流加培養(yǎng)基流加時(shí)間與流加速度對(duì)L-phe發(fā)酵生產(chǎn)的影響Table 1 Effects of feeding time and feeding speed of fed-batch medium on the production of L-phe by fermentation

以2.2.1中C組(對(duì)應(yīng)表1中恒速流加至菌體量穩(wěn)定期)為對(duì)照組，在前期優(yōu)化基礎(chǔ)上進(jìn)一步優(yōu)化全營(yíng)養(yǎng)流加工藝。

表1中對(duì)照組恒速流加至菌體量穩(wěn)定期指將400 mL流加培養(yǎng)基在32 h內(nèi)恒速流加完畢，即12.5 mL/h，同理E組指8 mL/h。葡萄糖亞適量是指將罐內(nèi)殘?zhí)菨舛瓤刂圃?～0.3 g/L，在溶氧上表現(xiàn)為DO圍繞某一值上下波動(dòng)，溶氧曲線波動(dòng)前行。F組隨菌體生長(zhǎng)速度對(duì)數(shù)提高流加速度是指在葡萄糖亞適量狀態(tài)下，使得DO始終保持穩(wěn)定的較低狀態(tài)。G組營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)亞適量流加是指在葡萄糖亞適量狀態(tài)下，DO緩慢上升，提高補(bǔ)糖速率DO未見(jiàn)明顯下降，流加營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)DO迅速下降，即認(rèn)為此時(shí)為營(yíng)養(yǎng)亞適量狀態(tài)，應(yīng)提高流加培養(yǎng)基流加速度。

E組OD、產(chǎn)量較對(duì)照組分別下降了4.2%、3.6%，達(dá)到菌體量穩(wěn)定期的時(shí)間較對(duì)照組延長(zhǎng)了2 h，全程流加使得單位時(shí)間內(nèi)菌體獲得的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)變少，生長(zhǎng)受限，后期流加液不僅不能為發(fā)酵提供營(yíng)養(yǎng)，反而會(huì)占用發(fā)酵罐體積，迫使放出部分發(fā)酵液，浪費(fèi)了具有產(chǎn)酸能力的菌體；F組在30 h時(shí)達(dá)到了最大菌體量150.7，但發(fā)酵結(jié)束時(shí)菌體量?jī)H為117，雖然對(duì)L-phe產(chǎn)量的影響并不大，但副產(chǎn)物乙酸、谷氨酸較對(duì)照組分別提高了150%、159%，糖酸轉(zhuǎn)化率降低了4.79%，F(xiàn)組使得發(fā)酵各個(gè)階段的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)相對(duì)來(lái)說(shuō)過(guò)于豐富，發(fā)酵中后期過(guò)高的菌體密度不利于溶氧水平和補(bǔ)糖速率的控制，乙酸的積累加快了菌體衰亡的速度，并不適合生長(zhǎng)耦聯(lián)型產(chǎn)物L(fēng)-phe的積累。

G組最終L-phe產(chǎn)量達(dá)到了90.7 g/L，較對(duì)照組提高了3.6%，達(dá)到菌體量穩(wěn)定期的時(shí)間為34 h，較對(duì)照組延長(zhǎng)了2 h，糖酸轉(zhuǎn)化率較對(duì)照組提高了2.2%，乙酸產(chǎn)量較對(duì)照組提高了35%，但乙酸濃度并未達(dá)到限制菌體正常生長(zhǎng)代謝的濃度[24]。

2.2.4 維生素H添加方式對(duì)L-phe發(fā)酵生產(chǎn)的影響

本部分研究以2.2.3中G組(對(duì)應(yīng)圖6和圖7中H組)為對(duì)照組，并在對(duì)照組的基礎(chǔ)上探究維生素H添加方式對(duì)L-phe發(fā)酵生產(chǎn)的影響。圖6和圖7中G組的添加方式為將所有維生素H全部加入底物培養(yǎng)基；H組的維生素H添加方式為隨底物培養(yǎng)基與流加培養(yǎng)基比例分配；I組的添加方式為將所有維生素H全部加入流加培養(yǎng)基。

圖6 維生素H添加方式對(duì)L-phe發(fā)酵生產(chǎn)的影響Fig.6 Effects of vitamin H addition methods on the production of L-phe by fermentation

圖7 維生素H添加方式對(duì)副產(chǎn)物及糖酸轉(zhuǎn)化率的影響Fig.7 Effects of vitamin H addition methods on the by-products and sugar-acid conversion rate

由圖6和圖7可知，G組菌體在28 h達(dá)到了最大菌體量(147.1)，與不采取全營(yíng)養(yǎng)流加策略時(shí)相同，前期產(chǎn)酸能力高于H組、I組，但總體產(chǎn)量下降明顯，副產(chǎn)物谷氨酸產(chǎn)量達(dá)到了2.31 g/L，比對(duì)照組提高了477%，這說(shuō)明代謝流更多地流向TCA循環(huán)，一方面降低了糖酸轉(zhuǎn)化率，另一方面加大了提取難度，影響了產(chǎn)品質(zhì)量；I組達(dá)到菌體量穩(wěn)定期的時(shí)間為36 h，較對(duì)照組延長(zhǎng)了2 h，L-phe產(chǎn)酸量達(dá)到了92 g/L，較對(duì)照組提高了1.4%，最大菌體量、發(fā)酵結(jié)束時(shí)菌體量、副產(chǎn)物、糖酸轉(zhuǎn)化率與對(duì)照組均無(wú)明顯差異。

3 結(jié)論

在大腸桿菌發(fā)酵法生產(chǎn)L-phe工藝中，提高轉(zhuǎn)化率、生產(chǎn)強(qiáng)度，抑制副產(chǎn)物生成，是目前亟待解決的問(wèn)題。本研究對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基中維生素H濃度進(jìn)行了優(yōu)化，確定了維生素H的最適濃度為0.5 g/L，在此基礎(chǔ)上對(duì)發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定了底物培養(yǎng)基∶流加培養(yǎng)基為4∶6，流加培養(yǎng)基流加速度隨罐內(nèi)溶氧值變化變速流加至菌體量穩(wěn)定期，維生素H全部加入流加培養(yǎng)基的全營(yíng)養(yǎng)流加工藝，最終實(shí)現(xiàn)了L-phe產(chǎn)量與糖酸轉(zhuǎn)化率的同步提高，且大幅降低了副產(chǎn)物谷氨酸、乙酸的積累。最終L-phe產(chǎn)量達(dá)到了92 g/L，較優(yōu)化前提升了14.0%，糖酸轉(zhuǎn)化率達(dá)到了27.7%，較優(yōu)化前提升了9.5%，乙酸產(chǎn)量為0.54 g/L，較優(yōu)化前降低了56.1%，谷氨酸產(chǎn)量為0.4 g/L，較優(yōu)化前降低了81%。底物培養(yǎng)基和流加培養(yǎng)基的比例決定了發(fā)酵前期營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度，進(jìn)一步?jīng)Q定了發(fā)酵前期菌體生長(zhǎng)趨勢(shì)；流加速度及流加方式?jīng)Q定了發(fā)酵過(guò)程中菌體的生長(zhǎng)速度與生長(zhǎng)周期，進(jìn)一步?jīng)Q定了最終產(chǎn)量與糖酸轉(zhuǎn)化率，是全營(yíng)養(yǎng)流加工藝的核心。很顯然，全營(yíng)養(yǎng)流加工藝解決了添加維生素H帶來(lái)的糖酸轉(zhuǎn)化率降低的問(wèn)題，同時(shí)大幅降低了副產(chǎn)物的積累，提高了產(chǎn)品的商業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力。