任香蕓，李維新，林曉姿，梁璋成，何志剛

[1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)工程技術(shù)研究所，福建 福州 350003；2.福建省農(nóng)產(chǎn)品（食品）加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350013]

0 引言

【研究意義】二氧化硫是葡萄酒等果酒釀造中常用的添加劑，具有防止酒體過(guò)度氧化、揮發(fā)酸含量上升和抑制雜菌生長(zhǎng)等作用[1]。但高量的二氧化硫（60 mg·L-1以上）會(huì)對(duì)酒體中的乳酸菌產(chǎn)生脅迫作用，使其生長(zhǎng)受抑制甚至死亡，影響了果酒的蘋果酸-乳酸發(fā)酵（Malolactic fementation，MLF）生物降酸效果和酒體品質(zhì)提升[2]；而低量的二氧化硫又不能充分發(fā)揮作用，從而易導(dǎo)致酒體品質(zhì)劣變；因此高耐受二氧化硫的MLF乳酸菌的選擇備受關(guān)注。植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）R23是本試驗(yàn)人員從自然發(fā)酵的枇杷酒中分離出的高耐硫、高抗逆性優(yōu)良MLF乳酸菌，已在山葡萄、枇杷和楊梅等高酸性水果的釀造中廣泛應(yīng)用，成為果酒生物降酸中的重要菌株[3-4]?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】已有研究表明，二氧化硫在液體介質(zhì)中以HSO3-、SO32-等形式存在，這些離子轉(zhuǎn)化為SO42-的過(guò)程會(huì)產(chǎn)生活性氧簇（Reactive oxygen species，ROS）如·O2ˉ、H2O2、·OH 等；持續(xù)增加的ROS將作用于細(xì)胞內(nèi)生物大分子進(jìn)而誘發(fā)核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等的氧化損傷[5-6]。但同時(shí)，生物體會(huì)啟動(dòng)氧化防御系統(tǒng)以清除過(guò)多的ROS進(jìn)而維持其正常的生長(zhǎng)代謝，即所謂的氧化應(yīng)激。事實(shí)上，強(qiáng)氧化環(huán)境均會(huì)導(dǎo)致生物體內(nèi)ROS大量積累，引發(fā)生物體氧化應(yīng)激反應(yīng)[7]，如槲皮素、蘆丁等誘發(fā)了嗜酸乳桿菌NCFM氧化應(yīng)激，且主要依靠過(guò)氧化氫酶的作用清除胞內(nèi)自由基[8]；另外，在李斯特氏菌的氧化應(yīng)激反應(yīng)中，超氧化物歧化酶活性和DNA損傷修復(fù)主導(dǎo)了自由基的清除過(guò)程[9]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】推測(cè)二氧化硫脅迫可能引發(fā)植物乳桿菌R23氧化應(yīng)激反應(yīng)，且其抗氧化相關(guān)系統(tǒng)發(fā)揮了積極作用，但迄今植物乳桿菌R23耐受二氧化硫的應(yīng)激機(jī)制尚不明確?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究從胞內(nèi)抗氧化酶活力、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞膜丙二醛和磷脂脂肪酸含量等方面進(jìn)行探究，明確二氧化硫脅迫下植物乳桿菌R23生理代謝變化，以期揭示植物乳桿菌R23對(duì)二氧化硫脅迫的適應(yīng)性機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌株 植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）R23，由本實(shí)驗(yàn)室人員從自然發(fā)酵的枇杷酒中分離并保存，NCBI號(hào)為HQ58056。

1.1.2 培養(yǎng)基 LHR20液體培養(yǎng)基：酵母膏0.74%，牛肉膏1.0%，蛋白胨0.5%，蔗糖2.0%，檸檬酸銨0.2%，MgSO40.036%，MnSO40.005%，吐溫-80 0.1%，蘋果酸鈉5.7%（體積分?jǐn)?shù)35%），番茄汁5%，平菇浸汁 5%，0.2 mol·L-1Na2HPO4-0.2 mol·L-1KH2PO4緩沖鹽稀釋4倍，121 ℃濕熱滅菌20 min。

1.1.3 主要儀器 SCIENTZ-950E細(xì)胞破碎儀（寧波新芝生物科技股份有限公司），SPX-250BS-Ⅱ型生化培養(yǎng)箱（上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司），SWCJ-IFD型單人單面凈化工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司），TGL-18C型高速冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），GI54DW型高壓滅菌器（美國(guó)致微），6380LV型掃描電鏡（日本電子公司），BioTek Epoch2全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀（Bio Tek）， UV-1705紫外可見分光光度計(jì)（日本島津），Agilent7890N型氣相色譜系統(tǒng)（美國(guó)MIDI公司）。

1.1.4 主要試劑 （1）抗氧化酶活力測(cè)定及丙二醛含量測(cè)定試劑盒（上海起子生物科技有限公司）。（2）磷脂脂肪酸提取試劑。皂化試劑（試劑1）：NaOH 45 g + 甲醇（HPLC grade）150 mL+去離子蒸餾水150 mL和甲醇混合后加入NaOH中，同時(shí)攪拌至完全溶解；甲基化試劑（試劑2）：6.0 mol·L-1鹽酸325 mL+甲醇（HPLC grade）275 mL把鹽酸加入到甲醇中，并不斷攪拌；萃取試劑（試劑3）：正己烷(HPLC Grade ) 200 mL+MTBE (HPLC Grade ) 200 mL，把MTBE加入到正己烷中，并攪拌均勻；洗滌試劑（試劑4）：NaOH 10.8 g+去離子蒸餾水900 mL。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種活化 將植物乳桿菌R23甘油凍存種以5%（V/V）接種于 LHR20中，30 ℃培養(yǎng) 15～18 h，連續(xù)轉(zhuǎn)接活化2次，備用。

1.2.2 菌體二氧化硫脅迫培養(yǎng) 將植物乳桿菌R23活化種以體積分?jǐn)?shù)為5%接種于二氧化硫質(zhì)量濃度分別為 0、40、80、120 mg·L-1的 LHR20 液體培養(yǎng)基中，30 ℃恒溫靜置培養(yǎng)4 h后，備用。

1.2.3 菌體處理與形態(tài)觀察 取1 mL不同質(zhì)量濃度二氧化硫脅迫處理后的菌液于1.5 mL無(wú)菌離心管中，5 000 r·min-1離心3 min，用無(wú)菌水洗滌2次后，用適量2.5%戊二醛（pH 7.0）固定，后續(xù)制樣、掃描電鏡觀察均在福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所進(jìn)行。

1.2.4 抗氧化酶活力測(cè)定樣品制備 取50 mL不同質(zhì)量濃度二氧化硫脅迫處理的植物乳桿菌R23菌懸液，以9 000 r·min-1、4 ℃離心10 min，棄上清；加無(wú)菌生理鹽水洗滌1次；菌泥中加入5 mL PBS（pH8.0）緩沖液，加玻璃珠旋渦震蕩混勻；然后進(jìn)行超聲破碎，條件為：功率400 W、工作總時(shí)間5 min、工作1 s、間歇2 s、變幅桿直徑5 mm；細(xì)胞破碎液經(jīng)12 000 r·min-1、4 ℃ 離心 10 min；將上清液裝于 10 mL離心管，4 ℃暫存，備用。

1.2.5 蛋白質(zhì)含量測(cè)定 采用考馬斯亮藍(lán)法。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：取6支具塞試管，編號(hào)，按表1加入試劑，搖勻，反應(yīng)10 min，于595 nm處測(cè)定吸光度。

表1 蛋白質(zhì)含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線Table 1 Standard curve for protein determination

樣品測(cè)定：取樣品溶液0.1 mL于試管中，加水0.9 mL，各加入5 mL考馬斯亮藍(lán)試劑，充分混合，放置10 min，以試劑空白為對(duì)照，595 nm處測(cè)定吸光值，同時(shí)做3個(gè)重復(fù)。

1.2.6 酶活力及丙二醛含量測(cè)定 超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶GPX、過(guò)氧化氫酶CAT活力及丙二醛MDA含量的測(cè)定，采用試劑盒法，具體操作按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.2.7 細(xì)胞膜脂肪酸提取 （1）獲菌：取植物乳桿菌R23脅迫前、后（分別用0、80 mg·L-1二氧化硫處理）的菌液 20 mL，4 ℃、5 000 r·min-1，離心 5 min，用接種環(huán)挑取約40 mg濕重的菌落置于清潔干燥的有螺旋蓋的試管（13 mm × 100 mm）底部；（2）皂化：在裝有菌體的試管內(nèi)加入（1.0±0.1）mL試劑1，鎖緊蓋子，震蕩試管5～10 s，95～100 ℃水浴5 min，從沸水中移開試管并輕微冷卻，震蕩5～10 s，再水浴25 min，取出室溫冷卻；（3）甲基化：加入（2.0±0.1）mL試劑2，擰緊蓋子，震蕩5～10 s，80 ℃水浴10 min，移開且快速用流動(dòng)自來(lái)水冷卻至室溫；（4）萃取：加入（1.25±0.1）mL 試劑3萃取溶劑，蓋緊蓋子，溫和混合旋轉(zhuǎn)10 min ，打開管蓋，利用干凈的移液管取出下層似水部分，棄去；（5）基本洗滌：加入（3.0±0.21）mL試劑4，擰緊蓋子，溫和混合旋轉(zhuǎn)5 min，打開蓋子，利用干凈的移液管移出約2/3體積的上層有機(jī)相到干凈的GC檢體小瓶。

1.2.8 脂肪酸檢測(cè) 應(yīng)用MIDI系統(tǒng)，色譜分析柱溫采用二階順序升溫法，即第一階段170 ℃起始，每分鐘升溫5 ℃，升至260 ℃，第二階段每分鐘升溫40 ℃，升至310 ℃，維持90 s；汽化室溫度250 ℃、檢測(cè)器溫度300 ℃；載氣為氫氣（2 mL·min-1）、尾吹氣為氮?dú)猓?0 mL·min-1）；柱前壓 68.95 kPa；進(jìn)樣量1 μL，進(jìn)樣分流比100∶1。將檢測(cè)出的脂肪酸數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換成以乳酸菌為樣本、以脂肪酸生物標(biāo)記為指標(biāo)的數(shù)據(jù)矩陣Excel文件，然后利用生物統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 23.0中的Graphs進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 二氧化硫脅迫激發(fā)的菌體抗氧化防御反應(yīng)

植物乳桿菌R23在梯度二氧化硫脅迫處理?xiàng)l件下的胞內(nèi)抗氧化酶活力、膜丙二醛含量和超微形態(tài)變化如圖1、圖2和圖3所示。以正常培養(yǎng)條件為對(duì)照，二氧化硫脅迫處理后3種抗氧化酶活力均顯著提升(P ＜0.05)，其中80 mg·L-1二氧化硫脅迫下SOD、CAT、GPX分別是無(wú)脅迫處理的1.64、2.14、1.62倍，特別是CAT活力提升速率最快且后續(xù)下降幅度最小，提示適量二氧化硫脅迫可有效激發(fā)植物乳桿菌R23的抗氧化系統(tǒng)，而CAT可能起了主導(dǎo)作用。當(dāng)脅迫二氧化硫質(zhì)量濃度增大到120 mg·L-1時(shí)，酶活力略有下降但與最高值無(wú)顯著差異，且顯著高于對(duì)照值（P＜0.05）（圖1）。

圖2顯示，梯度二氧化硫脅迫導(dǎo)致MDA含量不斷增加；其中40或80 mg·L-1二氧化硫脅迫下MDA變化幅度較小，之后加速上升 (P＜0.05)，在120 mg·L-1二氧化硫脅迫下MDA含量是對(duì)照處理的1.84倍；說(shuō)明抗氧化酶活力下降后胞內(nèi)ROS不能得到有效清除，進(jìn)而導(dǎo)致菌體脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)加劇。

植物乳桿菌R23在不同質(zhì)量濃度二氧化硫脅迫下的菌體細(xì)胞超微形態(tài)如圖3所示。正常培養(yǎng)條件下（0 mg·L-1二氧化硫），菌體飽滿，呈桿狀、單個(gè)或短鏈狀排列，不生孢（圖3-a）；40 mg·L-1二氧化硫脅迫并未導(dǎo)致菌體形態(tài)發(fā)生肉眼看見的變化（圖3-b）；但脅迫程度進(jìn)一步加深后，有些菌體表面發(fā)生皺縮現(xiàn)象，細(xì)胞失去原有的飽滿程度（圖3-c、d），其中120 mg·L-1二氧化硫脅迫下這一變化更加明顯。可見80 mg·L-1SO2脅迫下菌體尚可維持基本的形態(tài)，而120 mg·L-1二氧化硫脅迫雖未導(dǎo)致抗氧化酶活力顯著下降，但其防御性能下降，這不僅表現(xiàn)在MDA含量顯著提升，也表現(xiàn)在菌體形態(tài)的變化上。

2.2 二氧化硫脅迫誘導(dǎo)的細(xì)胞膜磷脂脂肪酸變化

上述研究結(jié)果表明，80 mg·L-1二氧化硫脅迫可有效激發(fā)植物乳桿菌R23生理應(yīng)答，且未導(dǎo)致明顯的結(jié)構(gòu)損傷，因此考察了該濃度脅迫下菌體細(xì)胞膜磷脂脂肪酸的結(jié)構(gòu)變化，結(jié)果如表2和圖4所示。無(wú)脅迫時(shí)菌體細(xì)胞膜脂肪酸的組成成分包括飽和脂肪酸即十四烷酸（C14:0）、十六烷酸（C16:0）、十八烷酸（C18:0）、十二碳異脂肪酸（iso-C12:0）、十七碳前異脂肪酸（anteiso-C17:0），單不飽和脂肪酸即十六碳異脂肪酸（iso-C16:1）、十六碳順式脂肪酸（iso-C16:1）和十九碳反式脂肪酸（trans-C19:1），以及環(huán)丙烷脂肪酸（cyclo-19:0）。其中 C14:0、C16:0、C18:0和cyclo-19:0含量之和超過(guò)57.2%，占總脂肪酸的比例較大，特別是C16:0占總量的27%以上，應(yīng)為植物乳桿菌R23脂肪酸主要組成成分。脅迫條件下，菌體脂肪酸發(fā)生不同程度變化，其中飽和脂肪酸即十四碳異脂肪酸（iso-C14:0）、十五碳異脂肪酸（iso-C15:0）和十八碳順式單不飽和脂肪酸（cis-C18:1）從無(wú)到有，而iso-C16:1、anteiso-C17:0從有到無(wú)。說(shuō)明二氧化硫脅迫不僅導(dǎo)致菌體脂肪酸含量發(fā)生變化，也調(diào)整了脂肪酸的組成成分。

表2 不同二氧化硫脅迫下植物乳桿菌R23細(xì)胞膜磷脂脂肪酸相對(duì)含量Table 2 Relative contents of PLFA in L.plantarum R23 under SO2 stress

對(duì)不同類型脂肪酸的統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，二氧化硫脅迫后菌體總飽和脂肪酸含量上升，總不飽和脂肪酸含量下降（圖4-a），兩者比值提高1.75，即二氧化硫脅迫導(dǎo)致菌體膜脂肪酸飽和程度增加。類似的，二氧化硫脅迫導(dǎo)致了總直鏈脂肪酸提升（從49.36%升至52.0%），而總支鏈脂肪酸顯著下降（從6.90%降至5.35%，P＜0.05），總體直鏈/支鏈比值顯著提升（從7.15升至9.72，P＜0.05）；值得注意的是，支鏈脂肪酸中的異脂肪酸雖未發(fā)生變化，但前異脂肪酸從1.55%降低為0，因此，總體異脂肪酸和前異脂肪酸的比值增大（圖4-c）。另外，順式/反式脂肪酸的比值也從1.33顯著提升到2.33（P＜0.05）（圖4-d）。不同的是，菌體長(zhǎng)鏈脂肪酸和短鏈脂肪酸在二氧化硫脅迫后的相對(duì)含量均有微量提升，但長(zhǎng)鏈脂肪酸的增加幅度更大，因此總體上長(zhǎng)鏈/短鏈的比值提升0.12（圖4-b）。另外還可以發(fā)現(xiàn)，作為植物乳桿菌R23脂肪酸主要組成成分之一的環(huán)丙烷脂肪酸cyclo-C19:0，在脅迫處理后其相對(duì)含量也得以提升，提示其在該菌體耐受二氧化硫脅迫過(guò)程中發(fā)揮了一定的作用。從整體變化趨勢(shì)分析，二氧化硫脅迫后植物乳桿菌R23膜脂肪酸成分向著飽和、長(zhǎng)鏈、直鏈和環(huán)型調(diào)整。

3 討論與結(jié)論

3.1 抗氧化酶應(yīng)激酶系對(duì)二氧化硫脅迫的響應(yīng)

微生物體會(huì)啟動(dòng)自身應(yīng)激機(jī)制以抵御各種逆境脅迫等不利條件，如產(chǎn)生特殊保護(hù)功能的蛋白[10]、改變細(xì)胞膜流動(dòng)性[11-12]等，從而維持菌體正常的生長(zhǎng)代謝和功能；本研究則發(fā)現(xiàn)植物乳桿菌R23通過(guò)提高抗氧化酶活力、調(diào)節(jié)細(xì)胞膜脂肪酸結(jié)構(gòu)的方式來(lái)應(yīng)對(duì)二氧化硫脅迫。已有研究發(fā)現(xiàn)，在生物體氧化應(yīng)激反應(yīng)中SOD、GPX和CAT是清除ROS的重要抗氧化酶類[13]，如將sod基因進(jìn)行外源表達(dá)后，可明顯提高乳桿菌的抗氧化能力[14]；而發(fā)酵乳桿菌ME-3中的谷胱甘肽過(guò)化物酶和谷胱甘肽還原酶，可以從環(huán)境中運(yùn)輸及合成谷胱甘肽來(lái)參與抗氧化反應(yīng)[15]。本研究植物乳桿菌R23抗氧化酶活力的顯著提升表明該菌也啟動(dòng)了氧化應(yīng)激反應(yīng)，且其抗氧化系統(tǒng)整體呈現(xiàn)一個(gè)主動(dòng)防御到被破壞的趨勢(shì)。起始階段，隨著脅迫程度增大，SOD、GPX和CAT活性明顯提高（P＜0.05），以清除胞內(nèi)過(guò)量的·O2ˉ、H2O2、·OH；但當(dāng)二氧化硫質(zhì)量濃度超過(guò)菌體耐受閾值時(shí)，各酶活力開始下降，MDA含量上升幅度加大。這揭示了過(guò)高二氧化硫脅迫會(huì)導(dǎo)致菌體抗氧化系統(tǒng)失調(diào)，使得胞內(nèi)自由基產(chǎn)生和清除失去動(dòng)態(tài)平衡，過(guò)量自由基與細(xì)胞膜中的脂肪酸等物質(zhì)發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，進(jìn)而引起細(xì)胞膜流動(dòng)性或通透性改變，促使胞內(nèi)離子和其他電解質(zhì)及可溶性物質(zhì)大量外滲，破壞了細(xì)胞內(nèi)酶及代謝作用原有的區(qū)域性，最終導(dǎo)致細(xì)胞皺縮甚至破裂。因此，抗氧化酶活性對(duì)菌體細(xì)胞應(yīng)對(duì)氧化損傷起到至關(guān)重要的作用。

3.2 細(xì)胞膜對(duì)二氧化硫脅迫的響應(yīng)

細(xì)胞膜是把菌體細(xì)胞與外界環(huán)境隔離的第一道屏障，也是逆境因子生理脅迫的首要目標(biāo)之一，因此在維持胞內(nèi)微環(huán)境的穩(wěn)定性等方面發(fā)揮極其重要的作用[16]。一般認(rèn)為，細(xì)胞膜的生化特性很大程度上取決于組成磷脂的脂肪酸結(jié)構(gòu)[17]。本研究借助MIDI系統(tǒng)對(duì)二氧化硫脅迫前后植物乳桿菌R23膜脂肪酸測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脅迫后菌體脂肪酸成分及比例均發(fā)生變化，整體向著飽和、長(zhǎng)鏈、直鏈和環(huán)型增長(zhǎng)，其中直鏈/支鏈、順式/反式的比值顯著提升（P＜0.05）。由于總直鏈脂肪酸占比較高（50%以上），因此推斷直鏈（尤其是C16:0）與支鏈的比例在植物乳桿菌R23防御二氧化硫脅迫中起主導(dǎo)作用。雖然本研究中菌體總飽和脂肪酸和長(zhǎng)鏈脂肪酸含量增加不顯著，但其占比也較大，所以認(rèn)為它們同樣發(fā)揮了積極作用。另有研究認(rèn)為，不同類型脂肪酸的比例均會(huì)對(duì)細(xì)胞膜的流動(dòng)性產(chǎn)生影響[18]，其中支鏈脂肪酸（尤其是前異脂肪酸）中的甲基會(huì)破壞酰基鏈的緊湊性[19]，降低膜流動(dòng)性；如單增李斯特菌依靠增加直鏈脂肪酸同時(shí)降低前異脂肪酸C15:0、C17:0來(lái)適應(yīng)酸性環(huán)境[20]，而本研究中總支鏈脂肪酸增加以及前異脂肪酸anteiso-C17:0顯著降低（P＜0.05）應(yīng)是植物乳桿菌R23應(yīng)對(duì)二氧化硫脅迫的又一適應(yīng)性調(diào)節(jié)方式。另外，長(zhǎng)鏈飽和脂肪酸可以增加磷脂雙分子層間?；湹南嗷プ饔昧?，使其結(jié)構(gòu)更為牢固且具有較高的相變溫度和較低的滲透性[17]；因此植物乳桿菌R23對(duì)長(zhǎng)鏈/短鏈、飽和/不飽和脂肪酸的調(diào)整，可以降低細(xì)胞膜對(duì)HSO3-、SO32-等的透過(guò)性，從而防止ROS大量產(chǎn)生。另外，由于不飽和脂肪酸的氫鍵易被ROS氧化，本研究中其含量降低可以減弱膜脂對(duì)過(guò)氧化作用的敏感性。然而，目前關(guān)于不同類型脂肪酸在菌株抵御逆境脅迫中的作用并未取得一致觀點(diǎn)。如：鄭昀昀等[21]在新物種Anoxybacillus flavithermusssp.YunnanesisE13T對(duì)甲苯的耐受性，以及Huang 等[11]對(duì)植物乳桿菌ZDY2013對(duì)酸的耐受性研究中，均證實(shí)飽和脂肪酸發(fā)揮了積極作用，與本研究結(jié)果相一致；而Taranto等[22]在羅伊氏乳桿菌耐膽鹽、袁崢[23]在嗜酸乳桿菌耐酸的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，不飽和脂肪酸比例增加對(duì)菌體耐受性更有利；由此可見，不同特性的菌株或不同因子脅迫下其耐受性機(jī)制也不盡相同。

綜上，本研究發(fā)現(xiàn)了植物乳桿菌R23抗氧化酶、膜磷脂脂肪酸等在其應(yīng)答二氧化硫引發(fā)的氧化應(yīng)激中的作用，可初步闡明該菌對(duì)二氧化硫脅迫的適應(yīng)性生理機(jī)制，為深入理解該菌抵抗高二氧化硫環(huán)境而生存的分子機(jī)制提供理論依據(jù)，同時(shí)為篩選高抗逆性菌株以解決目前高酸性果酒降酸中存在的問(wèn)題提供思路。