木朝宇，張曉梅，徐 珍，范德勝，劉培明,姚慧琳

人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus，HPV)是一種誘發(fā)女性宮頸癌及生殖器病變的主要病原體,臨床HPV基因亞型檢測(cè)對(duì)發(fā)現(xiàn)宮頸癌高危病人及其早期防治有重要意義。不同國(guó)家或地區(qū)HPV的感染型別分布均存在差異性[1]。本研究利用PCR-反向點(diǎn)雜交技術(shù),對(duì)3 536例臨床樣本進(jìn)行了檢測(cè),以了解淮北地區(qū)HPV感染情況及其年齡和亞型分布情況,為本地區(qū)HPV疫苗接種計(jì)劃提供參考,同時(shí)也為HPV病毒感染及宮頸癌的臨床治療提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 2017年3月至2018年6月淮北礦工總醫(yī)院婦科就診、篩查和體檢并接受HPV分型檢測(cè)的女性3 536例，年齡18～94歲,共分為6組。其中≤30歲342 例,31～40歲 677例，41～50歲1 340例，51～60歲706例，≥61歲275例，年齡不詳者196例。

1.2 試劑與儀器 人乳頭瘤病毒核酸擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑盒、核酸分子快速雜交儀，為中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司配套儀器和試劑；核酸擴(kuò)增儀為美國(guó)ABI 7500型PCR儀。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集 采集宮頸上皮脫落細(xì)胞標(biāo)本置于樣本保存液中，4 ℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 核酸抽提 吸取500 μL細(xì)胞混懸液，12 000 r/min離心10 min后棄上清，余下操作參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3.3 PCR-反向點(diǎn)雜交技術(shù) PCR核酸分子雜交及HPV基因分型的顯色結(jié)果判定分析等過(guò)程均參考試劑盒說(shuō)明書。試劑盒檢測(cè)的亞型中包括18種高危亞型(HPV 16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82)以及10種低危亞型(HPV 6、11、40、42、43、44、54、61、81和83)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 HPV感染類型及陽(yáng)性率 在受檢的3 536例樣本中，HPV陽(yáng)性655例，陽(yáng)性率18.52%。HPV陽(yáng)性感染以單一亞型居多,占66.41%；單一亞型的感染率12.30%(435/3 536),高于多重感染率的6.22%(220/3 536)(χ2=77.72，P<0.01)；高危亞型的感染率11.59%(410/3 536),明顯高于低危亞型的3.62%(128/3 536)和高低?；旌闲偷?.31%(117/3 536)(χ2=160.00，P<0.01)(見表1)。多重感染的病例中，以二重感染為主，隨著合并感染亞型數(shù)的增多，感染比例逐漸下降(見表2)。

表1 不同類型HPV感染的分布情況

表2 多重HPV感染的分布情況(n)

表3 不同年齡段的HPV感染分布情況[n；百分率(%)]

表4 不同年齡段HPV單一亞型的感染率比較[n；百分率(%)]

表5 不同年齡段HPV多重感染分布[n;百分率(%)]

2.3 HPV感染亞型的分布 28種亞型均被檢出，總感染比例排前五位的亞型依次為HPV52、16、58、44、40型(見表6)。

表6HPV感染的各亞型分布情況[n;百分率(%)]

3 討論

HPV屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是雙鏈閉合環(huán)狀 DNA 病毒，主要通過(guò)性傳播以及接觸感染。HPV的感染很普遍，有20%～46%的女性感染，大部分為一過(guò)性感染，約在6個(gè)月左右被機(jī)體免疫清除。僅有少數(shù)高危型HPV持續(xù)感染者，可導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生。因此，明確我國(guó)各地區(qū)HPV感染的基因型以及年齡分布特點(diǎn)，于我國(guó)HPV疫苗的研發(fā)和宮頸癌的早期防治具有重要意義。

HPV感染具有地域性以及種族差異[1]，在世界范圍內(nèi)，HPV感染均有其特定的優(yōu)勢(shì)亞型[2]，如在亞洲地區(qū)感染型別前3位依次為HPV16、33、56，東南亞地區(qū)的主要感染型別為HPV52、16、58、18[3-4]。在中國(guó)最常見的5種亞型為HPV16、18、52、58和39型[5]。我國(guó)不同的省份也有不同的流行趨勢(shì)[6]。在安徽省內(nèi)，各地區(qū)的流行也有差異[7]。本研究數(shù)據(jù)顯示淮北地區(qū)女性HPV感染最常見的高危亞型感染依次為 HPV52、16、58、51和53型，其中52型的感染率最高(18.93%)，16型感染率次之(15.88%)，與國(guó)內(nèi)的報(bào)道情況有所差異[8]。最常見的低危型依次為 HPV44、40、54、42 型，以44型的感染率最高(9.92%)。文獻(xiàn)[6]報(bào)道我國(guó)很多地區(qū)低危亞型以HPV6和11型居多，這一結(jié)果與國(guó)內(nèi)其他地區(qū)[6，9-12]的文獻(xiàn)報(bào)道差異較大。

2005年我國(guó)一項(xiàng)有關(guān)婦女HPV感染與宮頸癌流行病學(xué)調(diào)查[13]顯示，15～54歲女性HPV的平均感染率為15.0%，感染的年齡分布呈現(xiàn)兩個(gè)高峰期，分別為20～25歲和40～45歲。本研究數(shù)據(jù)顯示HPV感染率18.52%，51～60歲人群感染率最高，為20.39%，與國(guó)內(nèi)的報(bào)道不一致?？赡苁潜狙芯康娜巳壕杏卺t(yī)院，檢測(cè)的范圍受局限的影響。51～60歲人群感染率高，應(yīng)與機(jī)體免疫力減低，激素水平下降，生殖道局部免疫力降低有關(guān)。不同的年齡組流行的優(yōu)勢(shì)亞型也有差異，其中41～50歲，51～60歲的優(yōu)勢(shì)亞型分別為16型、58型，而其他年齡組的優(yōu)勢(shì)亞型均為52型。在不同年齡段，HPV單一感染與多重感染率中，41～50歲人群陽(yáng)性占比最高(分別為42.07%、34.09%)。提示淮北地區(qū)41～50歲女性在HPV陽(yáng)性感染中占比最大，且16亞型為優(yōu)勢(shì)亞型。因此該年齡組的女性人群應(yīng)引起臨床的重視。

綜上所述，本地區(qū)HPV感染以51～60歲人群的陽(yáng)性檢出率最高，陽(yáng)性病例中以41～50歲人群占比最大，因此應(yīng)重視對(duì)這兩個(gè)年齡組人群宮頸癌的篩查及知識(shí)宣教工作。HPV感染的主要亞型為HPV52、16、58、44、40，而最新推出的HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58等9種亞型的疫苗[14]對(duì)本地區(qū)女性HPV感染預(yù)防的作用有限，針對(duì)本地區(qū)特定女性人群開展宮頸癌防治工作和研發(fā)相應(yīng)的HPV疫苗才會(huì)有效降低本地區(qū)宮頸癌發(fā)病率。