楊 梅

中樞神經(jīng)系感染是小兒常見病和多發(fā)病，尤其以病毒性腦炎多見，嚴重的患兒會遺留不同程度的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷,對日后的生活及學習能力產(chǎn)生嚴重影響，因此早期診斷和治療非常重要。研究[1]顯示腦脊液基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)可改變血腦屏障通透性，增加致病菌或其他有害物質(zhì)對腦組織損害風險，在病毒性腦炎的發(fā)生和發(fā)展過程中起到了關鍵的作用。本研究將臨床收治的病毒性腦炎患兒，根據(jù)腦脊液檢驗結(jié)果分為腦脊液異常組和腦脊液正常組，留取急性期(入院72 h內(nèi))和恢復期(治療1周后)的腦脊液和靜脈血，檢測MMP-2和MMP-9水平，通過與腦脊液細胞數(shù)相關性分析，來判斷腦脊液和靜脈血MMPs數(shù)值對臨床診斷的影響?，F(xiàn)作報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年10月至2020年11月我科住院40例病毒性腦炎患兒，根據(jù)諸福棠實用兒科學第九版診斷標準納入本研究。年齡1～14歲。所有入組患兒入院時均有不同程度的發(fā)熱、嘔吐、頭痛以及伴有驚厥和嗜睡甚至昏迷等意識障礙表現(xiàn)，腦電圖均有典型的慢波表現(xiàn)。根據(jù)腦脊液檢驗結(jié)果分為腦脊液異常組和腦脊液正常組，各20例，其中異常組男13例，女7例；正常組男10例，女10例。其中腦脊液異常組中重癥患兒3例，驚厥患兒8例，其中1例持續(xù)驚厥狀態(tài)，嗜睡患兒7例；腦脊液正常組驚厥患兒3例，嗜睡患兒5例。所有入院患兒于入院72 h內(nèi)采集腦脊液和外周血，并完善血常規(guī)、生化常規(guī)、C反應蛋白(CRP)檢查。

1.2 標本采集 腦脊液異常組患兒于病毒性腦炎急性期(入院72 h內(nèi))和恢復期(治療1周后)留取腦脊液1 mL和外周血2 mL，腦脊液正常組患兒于病毒性腦炎急性期(入院72 h內(nèi))留取腦脊液1 mL和外周血2 mL，室溫下分別于3 000 r/min離心15 min后留取上清液凍存于-20 ℃醫(yī)用冰箱。同時記錄患兒入院前3 d體溫，送檢72 h內(nèi)血常規(guī)、生化常規(guī)、CRP以及1周后血常規(guī)、生化常規(guī)、CRP，并記錄住院時間。

1.3 檢測方法 腦脊液和血清于室溫下解凍后使用雙抗夾心ELISA試劑盒(美國R&D)檢測MMP-2和MMP-9水平,按照試劑盒提供的說明書進行嚴格操作。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用t檢驗、Pearson相關分析和ROC曲線分析。

3 結(jié)果

2.1 2組一般資料比較 2組年齡、性別、血常規(guī)、生化常規(guī)、CRP等一般資料差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，2組腦脊液中的白細胞數(shù)和乳酸差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。且2組住院時間差異亦有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而進一步對腦脊液和外周血中的MMPs蛋白分析發(fā)現(xiàn)，2組外周血和腦脊液中的MMP-2、MMP-9差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05～P<0.01)(見表1)。

2.2 外周血和腦脊液中MMP和腦脊液白細胞(WBC)的相關分析 結(jié)果顯示,外周血中的MMP-2、MMP-9和腦脊液WBC呈明顯正相關關系(r=0.732、0.695,P<0.01)。腦脊液MMP-2、MMP-9和腦脊液WBC呈明顯正相關關系(r=0.827、0.775,P<0.01)。

2.3 外周血和腦脊液中MMP2、MMP-9對腦脊液白細胞數(shù)的靈敏度和特異度分析 外周血中的MMP-2、MMP-9對腦脊液細胞數(shù)的靈敏度和特異度分析顯示，ROC曲線下面積(AUC)分別為0.860和0.725(P<0.01和P<0.05)；腦脊液 MMP-2、腦脊液 MMP-9對腦脊液細胞數(shù)的靈敏度和特異度分析顯示，AUC分別為0.950和0.980(P<0.01)(見表2、圖1)。

表2 外周血和腦脊液中MMP2/MMP-9對腦脊液細胞數(shù)的靈敏度和特異度分析

表12組一般資料比較

3 討論

中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染中的病毒性腦炎臨床上分為腦膜炎和腦炎[2]，因為感染的病毒種屬不同及個體差異輕重程度不一，疾病的急性期由普通的頭疼嘔吐到高熱抽搐昏迷以及恢復期重癥，患兒會遺留不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，如癲癇、癱瘓、智力水平下降等[3]。

該病對臨床的早期識別和診斷提出了很高的要求，腦脊液檢查對確診及鑒別診斷有重要意義，尤其是早期及時完善腰椎穿刺檢查[4]。典型病毒性腦炎患兒的腦脊液白細胞數(shù)輕度增高，分類以淋巴細胞為主，蛋白輕度升高或正常，糖和氯化物通常正常[5]。但因為重癥患兒對穿刺的耐受性降低以及急性期患兒因顯著顱內(nèi)壓增高，會增加腦疝的風險，加之家屬的配合程度降低，使得臨床及時完善腰穿檢查比較困難。

國外很多關于中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的研究都把目光對準了MMPs[6]，在動物實驗[7]和臨床研究[8]中均發(fā)現(xiàn)MMPs與中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染密切相關，可能是因為MMPs能降解血管基底膜的Ⅳ型膠原蛋白，破壞血腦屏障，使T細胞順利通過血腦屏障到達大腦[9]。MMPs具有修復、重建、促進局部血管形成等作用，且可激活顱內(nèi)炎癥反應[10-11]。根據(jù)作用底物和片段同源性將MMPs分為6類，臨床最常用的是MMP-2和MMP-9。腦脊液中MMP-2和MMP-9已經(jīng)被認為是作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的炎癥標志物[12-14]。

本研究結(jié)果顯示，2組外周血和腦脊液中MMP-2、MMP-9之間均存在差異。國外已有臨床實驗結(jié)果表明，病毒感染導致腦炎后腦脊液中MMP-2和MMP-9的表達上調(diào)[1-2]。本研究和國外研究結(jié)果一致。隨著疾病進展，病毒性腦炎組患兒血清MMP-2和MMP-9水平顯著高于正常組，本研究數(shù)據(jù)也印證了該觀點。我們進一步分析發(fā)現(xiàn)，外周血中MMP-2、MMP-9和腦脊液白細胞數(shù)呈正相關關系。腦脊液中的MMP-2、MMP-9和腦脊液白細胞數(shù)也呈正相關關系。使用外周血MMP-2、MMP-9來判斷腦脊液的感染程度，進一步分析外周血中MMP-2、MMP-9對腦脊液細胞數(shù)的靈敏度和特異度發(fā)現(xiàn)外周血MMP-2、MMP-9水平可以反映腦脊液中MMP-2、MMP-9水平。這為臨床早期診斷和識別病毒性腦炎提供了一條新的思路。