劉 虹 張澤乾 董淑英 白艷玲

（1山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西功能食品研究院，山西太原 030031；2忻州市科技發(fā)展戰(zhàn)略研究所，山西忻州 034000）

近年來(lái)，筆者在山西省各地調(diào)查大型野生真菌資源多樣性，多次到中條山東段歷山區(qū)域進(jìn)行考察[1?6]。歷山位于山西省南部垣曲縣、翼城縣、陽(yáng)城縣和沁水縣交界處，面積2.48 萬(wàn)hm2，屬中條山脈，海拔2 358 m，是國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)，也是山西省溫帶向亞熱帶過(guò)渡的區(qū)域。該地區(qū)自然條件優(yōu)越，雨量充沛，植物多樣性豐富，分布有櫟類為主的落葉闊葉林以及油松林等暖溫性植被，有“山西神農(nóng)架”和“華北九寨溝”之稱。

2019 年8 月筆者在歷山中村林場(chǎng)櫟樹(shù)Quercusspp.林內(nèi)發(fā)現(xiàn)2種蘑菇，這2種蘑菇此前未見(jiàn)有在山西省發(fā)現(xiàn)的報(bào)道。顯微鏡觀察以及ITS 片段的比對(duì)分析證實(shí)這2 種蘑菇分別為櫟樹(shù)圓頭傘Descolea quercinaJ.Khan&Naseer 和白漏斗辛格杯傘Singero?cybe alboinfundibuliformis（Seok et al）Zhu L.Yang et al.。其中，櫟樹(shù)圓頭傘為中國(guó)新紀(jì)錄物種，白漏斗辛格杯傘為山西新記錄物種，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集

研究引證的櫟樹(shù)圓頭傘Descolea quercina和白漏斗辛格杯傘Singerocybe alboinfundibuliformis野生子實(shí)體于2019 年8 月采自山西省中條山脈南部歷山國(guó)家級(jí)自然保護(hù)區(qū)，采集標(biāo)本各2份，采集地生態(tài)環(huán)境為多種櫟樹(shù)Quercusspp.構(gòu)成的樹(shù)林地。每份標(biāo)本均制備兩份材料，一份取新鮮的子實(shí)體經(jīng)50 ℃恒定溫度烘干（約12 h），放入自封袋中保存，用作憑證標(biāo)本；另一份取黃豆粒大小新鮮子實(shí)體組織塊，用硅膠干燥保存，后續(xù)進(jìn)行分子系統(tǒng)學(xué)研究。研究憑證標(biāo)本（表1）分別保藏于首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院標(biāo)本館（BJTC）和山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西功能食品研究院標(biāo)本館（HSA）。

1.2 形態(tài)學(xué)鑒定方法

野外記錄物種宏觀特征，包括擔(dān)子果的形狀、大小、表面狀態(tài)，菌蓋大小、形狀、顏色，菌肉顏色、氣味，菌柄長(zhǎng)度、顏色等特征。顯微結(jié)構(gòu)采用奧林巴斯光學(xué)顯微鏡（Olympus BX51），在400~1 000 倍下進(jìn)行顯微結(jié)構(gòu)觀察。先用鑷子夾取子實(shí)體干標(biāo)本部分組織于載玻片上，用刀片徒手切取相應(yīng)組織薄片，滴加5%氫氧化鉀溶液使組織吸水復(fù)原，蓋上蓋玻片，在光學(xué)顯微鏡下觀察擔(dān)子果的孢子、擔(dān)子、囊狀體顯微結(jié)構(gòu)特征，記錄菌絲有無(wú)鎖狀聯(lián)合以及囊狀體、擔(dān)子、擔(dān)孢子大小等微觀特征；采用梅氏（Melzer’s reagent）試劑檢測(cè)擔(dān)孢子壁有無(wú)嗜藍(lán)和淀粉質(zhì)反應(yīng)。擔(dān)孢子大小測(cè)量按每份子實(shí)體測(cè)量50個(gè)擔(dān)孢子，統(tǒng)計(jì)測(cè)量數(shù)值。物種形態(tài)特征鑒定，櫟樹(shù)圓頭傘參考Khan 等（2017）[7]，白漏斗辛格杯傘參考Seok等（2009）[8]。

1.3 DNA序列測(cè)定和比對(duì)

將物種擔(dān)子果烘干，切取少量放于1.5 mL的EP管中，管中放置提前滅菌的直徑為3 mm 的小鎢珠，在球磨儀（Mixer Mill MM301，Retsch，Haan，德國(guó)）中將標(biāo)本研磨成粉末狀（45 s，30 Hz，2~4 次），采用改良的CTAB 方法提取基因組DNA[9]。干標(biāo)本總DNA提取后，擴(kuò)增核糖體DNA 內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（Internal transcribed spacer，ITS）片 段 ，PCR 擴(kuò) 增 引 物 為ITS1f/ITS4。ITS 的擴(kuò)增條件：在 94 ℃下預(yù)變性3 min，隨后在 94 ℃變性 30 s，55 ℃退 45 s，72 ℃延伸1 min，35 個(gè)循環(huán)，最后 72 ℃延伸10 min。PCR 產(chǎn)物經(jīng)北京中科希林生工生物技術(shù)有限責(zé)任公司純化、測(cè)序和編輯，經(jīng)手工校對(duì)后獲得的序列提交到NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)，采用BLAST工具在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 ITS-DNA比對(duì)結(jié)果

研究櫟樹(shù)圓頭傘樣本2 份、白漏斗辛格杯傘樣本2 份（表1），進(jìn)行測(cè)序，提取DNA?ITS 分子片段。將分子片段用BLAST 工具在NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)上進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 研究樣本的信息

表2 研究樣本ITS片段在NCBI上的比對(duì)結(jié)果

研究樣本提取的ITS 片段在NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)用BLAST 工具比對(duì)表明：樣本LH743、樣本XYYM066與櫟樹(shù)圓頭傘Descolea quercina模式標(biāo)本序列相似度高達(dá)99.0%，且形態(tài)特征與原始描述完全吻合，證實(shí)這兩份山西樣本為櫟樹(shù)圓頭傘，為中國(guó)新紀(jì)錄物種。

樣本XYYM036、LH718 與白漏斗辛格杯傘Singerocybe alboinfundibuliformis發(fā)表新種的原始描述完全吻合，樣本序列和目標(biāo)序列相似度高達(dá)99.9%，結(jié)果證實(shí)研究引證的采自山西歷山的這兩份樣本為白漏斗辛格杯傘，為山西新紀(jì)錄物種。

2.2 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

2.2.1 櫟樹(shù)圓頭傘

子實(shí)體中大型，氣味清淡。菌蓋直徑5~8 cm，初鐘形，后漸變?yōu)榘肭蛐位虮獍肭蛐?，中央有時(shí)稍凸起，橄欖綠褐色或黃褐色帶橄欖綠色調(diào)，表面具淺黃褐色纖毛狀鱗片；邊緣有明顯或不明顯放射狀條紋。菌肉厚2~4 mm，黃褐色。菌褶成熟時(shí)黃褐色，較密，直生。菌柄長(zhǎng)4~7 cm，直徑0.8~1.5 cm，圓柱狀，中空，黃褐色，菌環(huán)以上表面光滑，菌環(huán)以下表面有纖維狀鱗片。菌環(huán)膜質(zhì)，上位，黃褐色，上表面有明顯的放射狀條紋，下表面近平滑。擔(dān)子（25~40）μm×（8.0~12.5）μm，棒狀，4 孢子，基部有鎖狀聯(lián)合。擔(dān)孢子（11~13）μm×（6.5~8.5）μm，檸檬形，兩邊具突出的小尖，銹褐色，表面具疣狀或短脊?fàn)钔蛊?。緣囊體棒狀，有時(shí)頂部具小尖，（40~50）μm×（10.0~12.5）μm。側(cè)囊體與緣囊體相似，有時(shí)頂部具小尖，部分小尖頂部膨大呈小球形，（40~50）μm ×（10~15）μm。菌髓菌絲近平行排列，具鎖狀聯(lián)合。菌蓋皮層菌絲近柵欄狀排列，細(xì)胞棒狀、近棒狀或梭形，（20~30）μm ×（10~15）μm，細(xì)胞壁明顯褐色，具鎖狀聯(lián)合。

研究引證標(biāo)本在形態(tài)上高度吻合櫟樹(shù)圓頭傘Descolea quercina的特征[10]，ITS 比對(duì)與其模式標(biāo)本NR154047 序列相似度達(dá)99%以上，支持形態(tài)鑒定結(jié)果。

2.2.2 白漏斗辛格杯傘

子實(shí)體小至中型，初期無(wú)味，成熟時(shí)有令人不悅的刺鼻味道。菌蓋直徑2~5 cm，薄，深漏斗狀，中央部分下陷至空心菌柄的基部，初期白色，成熟后變?yōu)闇\黃褐色或粉紅褐色；邊緣具有透明的放射狀條紋，幼時(shí)稍內(nèi)卷，成熟后多呈波浪狀。菌褶白色或乳白色，較窄，稀疏。菌柄長(zhǎng)3~6 cm，粗4~8 mm，中空，細(xì)圓柱狀，表面光滑，白色或乳白色。擔(dān)子棒狀（20~30）μm×（4~6）μm，四小梗，基部具鎖狀聯(lián)合。擔(dān)孢子（6.0~7.5）μm×（4~5）μm，橢圓形，無(wú)色，光滑，非淀粉質(zhì)。菌蓋皮層菌絲近平行排列，菌絲薄壁，直徑2.5~5.0μm，具鎖狀聯(lián)合，間有膨大細(xì)胞（vesicles），達(dá)（20~50）μm×（5.0~12.5）μm，薄壁，無(wú)色。

引證標(biāo)本形態(tài)特征吻合白漏斗辛格杯傘的原始描述[11]，ITS 比對(duì)結(jié)果顯示山西標(biāo)本提取的ITS 片段和白漏斗辛格杯傘的可信序列JX514126、JX514132（QIN 等，2014）[7]同源性均超過(guò)99%，支持標(biāo)本屬于白漏斗辛格杯傘。

圖1 櫟樹(shù)圓頭傘Descolea quercina生態(tài)照

圖2 白漏斗辛格杯傘Singerocybe alboinfundibuliformis 生態(tài)照

3 結(jié)論與討論

櫟樹(shù)圓頭傘Descolea quercina在分類上隸屬于擔(dān)子菌門Basidiomycota，傘菌綱Agaricomycetes，傘菌目Agaricales 糞銹傘科Bolbitiaceae 環(huán)鱗傘屬Descolea。

櫟樹(shù)圓頭傘是近年在巴基斯坦北部被發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新物種[10]，其主要識(shí)別特征為菌蓋橄欖綠褐色及菌環(huán)表面具明顯條紋的中大型子實(shí)體，此外生長(zhǎng)在櫟樹(shù)林也是重要的參考特征之一。櫟樹(shù)圓頭傘在中國(guó)是首次記錄。圓頭傘屬Descolea成員主要分布在南半球，已知物種全部為菌根菌，寄主植物也多數(shù)屬南半球本土物種（Nothofagaceae）[8]，北半球物種相對(duì)較為罕見(jiàn)。此前中國(guó)已知該屬物種有兩個(gè)，分別為黃環(huán)圓頭傘Descolea flavoannulata（Lj.N.Vas‐siljeva）E.Horak 和珍貴圓頭傘Descolea pretiosaE.Horak，分布于東北和華中地區(qū)[9，12?13]。櫟樹(shù)圓頭傘食毒不詳。

白漏斗辛格杯傘Singerocybe alboinfundibulifor?mis隸屬于蘑菇目Agaricales，目前科地位未定（In‐certae sedis），辛格杯傘屬（囊泡杯傘屬）Singerocybe。白漏斗辛格杯傘最早以Clitocybe alboinfundibulifor?misSeok，Yang S.Kim，K.M.Park，W.G.Kim，K.H.Yoo&I.C.Park 為名發(fā)現(xiàn)于韓國(guó)[11]，不久后分子數(shù)據(jù)分析支持重組為現(xiàn)名[7]。白漏斗辛格杯傘可能是一個(gè)亞洲物種，已知分布包括中國(guó)東北[14]、華北（本研究）及西南地區(qū)[15]，泰國(guó)北部也有發(fā)現(xiàn)[16]。山西省僅見(jiàn)于南部中條山脈東段歷山區(qū)域，處于東北偏西南溫帶森林大通道上。山西產(chǎn)的白漏斗辛格杯傘成熟時(shí)氣味濃烈，這種氣味在該種原始記錄及其他產(chǎn)區(qū)未有記載[11，13]，但在 NCBI 數(shù)據(jù)庫(kù)中 ITS 片段比對(duì)分析支持其為同一個(gè)物種，這種氣味差異可能是不同環(huán)境或者不同的發(fā)育階段等因素所致。有文獻(xiàn)記載該物種可食[17]。