黃 進，吳海燕，汪光斌

新生兒溶血病(hemolytic disease of newborn， HDN)是因母體與新生兒血型不合導致的溶血，母體產(chǎn)生抗體后通過胎盤輸入胎兒體內(nèi)，引起胎兒紅細胞破壞，以ABO溶血較為常見。HDN可引起患兒貧血、黃疸、肝脾大、水腫等癥狀，嚴重者可導致神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥或死亡[1]。目前HDN的常規(guī)治療以補液、藍光照射、靜脈注射免疫球蛋白等為主，嚴重者需要接受換血治療[2]。早期預測HDN的發(fā)生有助于臨床早期給予積極的治療，對患兒預后有益。血清IgG抗A(B)抗體是紅細胞膜上抗原簇誘導產(chǎn)生的抗體，可形成免疫性復合物，誘導紅細胞膜的破壞、溶解，與HDN的發(fā)生密切相關(guān)[3]。網(wǎng)織紅細胞是外周血中尚未成熟的紅細胞，溶血發(fā)生時，骨髓造血細胞代償性增生，導致血液循環(huán)中網(wǎng)織紅細胞增多，因此在HDN早期網(wǎng)織紅細胞水平會升高[4]。既往研究只針對單一指標，而二者聯(lián)合檢測的研究報道較少，故本研究探討孕婦血清IgG型抗A(B)抗體效價聯(lián)合新生兒網(wǎng)織紅細胞水平檢測在HDN診斷中的應用價值。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選取2021年1月—2022年1月在我院進行全程產(chǎn)檢的O型血孕婦270例，年齡21～40(29.92±4.11)歲；胎齡37～41(39.20±1.21)周；配偶血型A型105例，B型91例，AB型74例。納入標準：單胎妊娠；配偶ABO血型為A型、B型或AB型；夫妻Rh血型均為陽性；孕婦無輸血史；孕婦及家屬知情同意。排除標準：有妊娠高血壓綜合征等并發(fā)癥；合并有肝腎功能障礙、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病等嚴重疾病。

1.2IgG型抗A(B)抗體效價檢查 采用微柱凝膠法檢測孕婦IgG型抗A(B)抗體效價。入院后當日或次日清晨抽取孕婦空腹狀態(tài)下靜脈血標本3 ml，置于EDTA抗凝管，離心處理，轉(zhuǎn)速3000 r/min，離心10 min，取上層血清50 μl，加入巰基乙醇50 μl。充分混勻后密封放置于37 ℃水浴，充分破壞IgM抗體。吸取經(jīng)2-ME處理后的血清，加入生理鹽水稀釋，稀釋度分別為1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512、1∶1024、1∶2048，采用微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡檢測IgG抗體效價，采用DiaMed公司的空白微柱，將生理鹽水稀釋的血清加入微柱孔，25 ℃孵育30 min，離心、洗滌，加入50 μl MASPAT抗人IgG，加入指示細胞，震蕩、離心后觀察結(jié)果。將效價≥1∶64定義為陽性。

1.3網(wǎng)織紅細胞水平檢查 于新生兒娩出后次日采集新生兒末梢血標本檢測網(wǎng)織紅細胞水平，取試管加入堿性染料2滴，加入新鮮全血2滴混勻，室溫放置15 min，取染色血標本1滴制成薄血涂片，自然干燥后于顯微鏡低倍鏡下選擇紅細胞分布均勻、著色好的部位。將Miller窺盤放置于目鏡內(nèi)，在Miller窺盤的小格A內(nèi)計數(shù)成熟紅細胞，在大格B內(nèi)計數(shù)網(wǎng)織紅細胞。

2 結(jié)果

2.1HDN發(fā)生情況 270例新生兒中，最終確診HDN 22例，發(fā)生率為8.15%。HDN組和非HDN組產(chǎn)婦年齡、新生兒胎齡、性別、出生體質(zhì)量、出生時C反應蛋白、白細胞、中性粒細胞、總膽紅素、血紅蛋白水平等比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；HDN組出生時網(wǎng)織紅細胞水平高于非HDN組(P<0.01)。見表1。

表1 發(fā)生和未發(fā)生HDN新生兒一般資料比較

2.2不同血清IgG型抗A(B)抗體效價產(chǎn)婦HDN發(fā)生情況比較 IgG型抗A(B)抗體效價<1∶64、1∶64、1∶128、≥1∶256的產(chǎn)婦HDN發(fā)生率分別為2.22%(4/180)、12.50%(7/56)、27.27%(6/22)、41.67%(5/12)。IgG型抗A(B)抗體效價<1∶64的產(chǎn)婦HDN發(fā)生率低于IgG型抗A(B)抗體效價1∶64、1∶128和≥1∶256的產(chǎn)婦(P<0.05)；IgG型抗A(B)抗體效價1∶64、1∶128和≥1∶256的產(chǎn)婦HDN發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.3IgG型抗A(B)抗體陽性的影響因素 經(jīng)產(chǎn)婦IgG型抗A(B)抗體陽性率高于初產(chǎn)婦(P<0.05)；年齡≥30歲孕婦IgG型抗A(B)抗體陽性率高于年齡<30歲孕婦(P<0.01)；不同體質(zhì)量指數(shù)、母-父血型組孕婦IgG型抗A(B)抗體陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 孕婦IgG型抗A(B)抗體陽性的影響因素[例(%)]

2.4HDN發(fā)生的影響因素 不同產(chǎn)次、年齡、體質(zhì)量指數(shù)及母-父血型產(chǎn)婦HDN發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 HDN發(fā)生的影響因素分析[例(%)]

2.5IgG型抗A(B)抗體效價聯(lián)合網(wǎng)織紅細胞水平預測HDN的價值 IgG型抗A(B)抗體效價聯(lián)合網(wǎng)織紅細胞水平預測HDN的ROC曲線下面積為0.981，明顯大于二者單獨預測的0.764[IgG型抗A(B)抗體效價]和0.876(網(wǎng)織紅細胞水平)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其預測HDN的敏感度和特異度分別為91.00%和96.00%，見圖1。

圖1 IgG型抗A(B)抗體效價聯(lián)合網(wǎng)織紅細胞水平預測HDN價值的ROC曲線

3 討論

HDN屬于同種免疫性溶血性疾病，輕癥者癥狀不明顯或僅出現(xiàn)黃疸，嚴重者可導致中樞神經(jīng)系統(tǒng)永久性損傷[5]。分析原因，由于溶血發(fā)生后過量的紅細胞被破壞，產(chǎn)生大量的膽紅素等代謝產(chǎn)物，而新生兒肝臟功能尚不成熟，不能及時將代謝產(chǎn)物排出體外，可引起高膽紅素血癥。而血液中膽紅素水平過高時，會沉積在腦干、基底核等中樞神經(jīng)系統(tǒng)重要部位，損傷神經(jīng)細胞[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，270例O型血孕婦中確診HDN 22例，發(fā)生率為8.15%。提示HDN在臨床中比較常見。

HDN的發(fā)生機制與抗原抗體反應有關(guān)，胎兒從父體得到母體沒有的紅細胞抗原，經(jīng)胎盤進入母體血液循環(huán)，誘導母體產(chǎn)生IgG類抗體。IgG類抗體通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，引起胎兒紅細胞發(fā)生抗原抗體反應而遭到破壞[7]。鄧虹艷等[8]研究認為，隨著孕婦血清IgG抗A(B)抗體效價的升高，HDN的發(fā)生率隨之增高，本研究結(jié)果與其報道一致。有報道認為，與初產(chǎn)婦相比，經(jīng)產(chǎn)婦HDN的發(fā)生風險更高[9]。本研究還發(fā)現(xiàn)，IgG型抗A(B)抗體陰性孕婦HDN發(fā)生率明顯低于IgG型抗A(B)抗體陽性孕婦。經(jīng)產(chǎn)婦IgG型抗A(B)抗體陽性率明顯高于初產(chǎn)婦，年齡≥30歲孕婦IgG型抗A(B)抗體陽性率明顯高于年齡<30歲孕婦。提示妊娠次數(shù)、孕婦年齡與血清IgG抗A(B)抗體效價具有一定的相關(guān)性，也可能與HDN的發(fā)生有關(guān)。這可能是由于每次妊娠結(jié)束，胎盤絨毛膜受損，胎兒紅細胞進入母體血液循環(huán)中，并刺激其產(chǎn)生抗體，而多次妊娠可受到抗原的反復刺激，導致IgG類抗體水平較高，引起胎兒紅細胞抗原抗體反應更加嚴重[10-11]。對于本研究中得出的高齡產(chǎn)婦血清IgG抗A(B)抗體陽性率更高的結(jié)果，推測可能與高齡產(chǎn)婦機體免疫功能較差、接觸抗原的機會較多有關(guān)，但目前有關(guān)年齡對血清IgG型抗A(B)抗體陽性率影響的相關(guān)報道較少，確切機制尚有待于進一步研究闡釋。

網(wǎng)織紅細胞是反映骨髓造血能力的常規(guī)指標，臨床常用于貧血、骨髓抑制后造血功能的評估[12]。有研究發(fā)現(xiàn)，當HDN發(fā)生時，其網(wǎng)織紅細胞計數(shù)有所升高[13]。本研究發(fā)現(xiàn)，HDN患兒出生時網(wǎng)織紅細胞水平明顯高于非HDN患兒。這是由于溶血發(fā)生時，可導致骨髓造血細胞代償性增生，未成熟細胞參與血液循環(huán)，從而引起血中網(wǎng)織紅細胞水平升高[14-15]。

本研究采用ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，IgG型抗A(B)抗體效價聯(lián)合網(wǎng)織紅細胞水平預測HDN的ROC曲線下面積高于二者單獨預測，其預測HDN的敏感度和特異度分別為91.00%和96.00%。提示IgG型抗A(B)抗體效價監(jiān)測聯(lián)合新生兒網(wǎng)織紅細胞水平檢測有助于預測HDN，具有較高的敏感度和特異度。在今后的臨床工作中，應對O型血孕婦進行IgG型抗A(B)抗體效價監(jiān)測，并對新生兒進行網(wǎng)織紅細胞水平檢測，以便及早發(fā)現(xiàn)HDN風險，并及時處理。

綜上所述，IgG型抗A(B)抗體效價監(jiān)測聯(lián)合新生兒網(wǎng)織紅細胞水平檢測有助于預測HDN，同時IgG型抗A(B)抗體效價與孕婦年齡、產(chǎn)次有關(guān)。