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        子癇前期患者血清環(huán)狀RNA HIPK3水平變化及其對(duì)妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)效能

        2022-11-27 14:42:22沈家慧胡海珊歐曼穎鄒聰聰謝春麗黃煒
        山東醫(yī)藥 2022年32期
        關(guān)鍵詞:血清水平

        沈家慧,胡海珊,歐曼穎,鄒聰聰,謝春麗,黃煒

        1海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院海南省人類(lèi)生殖與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,???570102;2海南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科;3海南醫(yī)學(xué)院熱帶轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

        子癇前期(PE)是一種多發(fā)生于妊娠20周后的妊娠期并發(fā)癥,可使孕產(chǎn)婦出現(xiàn)心、肝、腎等多器官損傷,也可引發(fā)胎兒生長(zhǎng)受限、宮內(nèi)窘迫,對(duì)母嬰妊娠結(jié)局產(chǎn)生不利影響[1-2]。研究發(fā)現(xiàn),PE發(fā)病與胎盤(pán)灌注不足、環(huán)狀RNA(circRNA)異常表達(dá)、滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)、氧化應(yīng)激、子宮—胎盤(pán)血管結(jié)構(gòu)異常、炎癥反應(yīng)、自噬、血管內(nèi)皮損傷等相關(guān)[3-4]。circRNA是非編碼RNA的一種,可調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄、剪切,影響蛋白質(zhì)翻譯,是診斷PE、心血管疾病等的潛在標(biāo)志物[5]。HIPK3是circRNA家族的一員,其在PE患者胎盤(pán)組織中呈低表達(dá)。研究認(rèn)為,HIPK3可能是治療PE的分子靶點(diǎn)[6]。本研究觀察了PE患者血清HIPK3水平變化,初步分析HIPK3與PE患者臨床參數(shù)的相關(guān)性,探討血清HIPK3檢測(cè)對(duì)PE患者妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值。

        1 資料與方法

        1.1 研究對(duì)象分組與臨床資料收集選取2018年4月—2021年6月入院的PE患者95例為PE組,年齡23~38(31.14±5.38)歲,孕次1~3(1.87±0.56)次,分娩孕周33~41(37.19±2.53)周;患者均符合第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》中PE的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7],均為單胎妊娠,自然受孕,檢查資料齊全,自愿參與本研究;排除孕前合并慢性腎炎、糖尿病、腎病綜合征、高血壓者,合并心臟病、甲狀腺功能亢進(jìn)、嚴(yán)重肝損傷者,合并免疫功能障礙、凝血功能異常、腫瘤者,有其他妊娠疾病者,有急慢性感染或傳染病史者,有煙酒不良嗜好者。另選取同期孕檢的健康孕婦95例為對(duì)照組,年齡23~38(30.96±5.21)歲,孕次1~3(1.92±0.58)次,分娩孕周33~41(37.12±2.50)周,均為單胎妊娠、自然受孕、無(wú)糖尿病或其他妊娠相關(guān)疾病,血壓<140/90 mmHg,無(wú)蛋白尿。PE組與對(duì)照組年齡、孕次、分娩孕周差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)。本研究符合《赫爾辛基宣言》。收集兩組孕婦總蛋白、白蛋白、24 h尿蛋白、舒張壓、收縮壓、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮等臨床指標(biāo),收集PE患者孕前體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、PE嚴(yán)重程度、分娩方式、分娩情況等資料。與對(duì)照組相比,PE組白蛋白、總蛋白水平降低,24 h尿蛋白、舒張壓、收縮壓、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮水平升高(P均<0.05)。詳見(jiàn)表1、表2。

        表1 PE組與對(duì)照組血清蛋白水平及血壓比較(±s)

        表1 PE組與對(duì)照組血清蛋白水平及血壓比較(±s)

        注:與對(duì)照組相比,*P<0.05。

        組別PE組對(duì)照組n 95 95白蛋白(g/L)30.11±3.03*34.53±3.27 24 h尿蛋白(mg)1 952.34±142.70*86.21±9.67總蛋白(g/L)55.22±5.85*63.13±6.51舒張壓(mmHg)107.45±10.99*74.22±7.84收縮壓(mmHg)139.38±12.46*112.23±9.41

        表2 PE組與對(duì)照組腎功能指標(biāo)比較(μmol/L,±s)

        表2 PE組與對(duì)照組腎功能指標(biāo)比較(μmol/L,±s)

        注:與對(duì)照組相比,*P<0.05。

        組別PE組對(duì)照組n 95 95肌酐56.60±9.53*42.53±5.51尿酸319.56±37.91*265.48±28.70胱抑素C 1.73±0.55*1.14±0.37尿素氮4.24±1.18*3.08±1.03

        1.2 血清HIPK3水平檢測(cè)收集兩組妊娠29~33周時(shí)的清晨空腹外周血5~6 mL,分離血清。采用Trizol LS Reagent抽提總RNA,用First-Strand cDNA Synthesis Kit制備cDNA,Realtime PCR Master Mix(SYBR Green)、qRT-PCR儀擴(kuò)增cDNA。擴(kuò)增條件:98.2℃預(yù)變性10 min,96.5℃變性40 s、60.5℃退火25 s、70.4℃延伸20 s,40個(gè)循環(huán)。HIPK3上游引物序列為5'-TTCAACATATCTACAATCTCGGT-3',下游引物序列為5'-ACCATTCACATAGGTCCGT-3';內(nèi)參GAPDH上游引物序列為5'-CTCTCTGCTCCTCCTGTTCGACAG-3',下游引物序列為5'-AGGGGTCTTACTCCTTGGAGGCCA-3'。以2-ΔΔCt表示HIPK3相對(duì)表達(dá)量。

        1.3 妊娠結(jié)局觀察收集PE組與對(duì)照組孕婦發(fā)生HELLP綜合征、產(chǎn)后出血、胎盤(pán)早剝、胎兒窘迫、早產(chǎn)、胎兒生長(zhǎng)受限、胎兒死亡的情況。根據(jù)PE組是否發(fā)生上述不良妊娠結(jié)局,進(jìn)一步分為妊娠結(jié)局不良者和妊娠結(jié)局良好者。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以±s表示,采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以例和百分率表示,采用χ2檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson法。影響因素分析采用Logistic回歸分析法。采用受試者工作特征(ROC)曲線評(píng)價(jià)血清HIPK3對(duì)PE患者妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)效能。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 對(duì)照組與PE組血清HIPK3水平及不良妊娠結(jié)局比較PE組血清HIPK3水平為0.47±0.16,低于對(duì)照組的1.03±0.34(P<0.05)。與對(duì)照組相比,PE組HELLP綜合征、產(chǎn)后出血、胎盤(pán)早剝、胎兒窘迫、早產(chǎn)、胎兒生長(zhǎng)受限、胎兒死亡發(fā)生率升高(P均<0.05)。詳見(jiàn)表3。

        表3 PE組、對(duì)照組不良妊娠結(jié)局比較[例(%)]

        2.2 PE患者血清HIPK3水平與臨床指標(biāo)的相關(guān)性PE患者血清HIPK3水平與白蛋白、總蛋白呈正相關(guān)(r分別為0.567、0.581,P均<0.05),與24 h尿蛋白、舒張壓、收縮壓、胱抑素C水平呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.543、-0.497、-0.595、-0.532,P均<0.05)。

        2.3 PE患者妊娠結(jié)局的影響因素分析與妊娠結(jié)局良好者相比,妊娠結(jié)局不良者重度PE患者占比、收縮壓、胱抑素C水平升高,血清HIPK3水平降低(P均<0.05)。見(jiàn)表4~6。以PE患者妊娠結(jié)局為因變量(妊娠結(jié)局良好=0,妊娠結(jié)局不良=1),以PE嚴(yán)重程度(輕度=0,重度=1)、收縮壓(實(shí)測(cè)值)、胱抑素C(實(shí)測(cè)值)、HIPK3(實(shí)測(cè)值)為自變量,進(jìn)行多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示,重度PE、收縮壓是PE患者不良妊娠結(jié)局的危險(xiǎn)因素,HIPK3是PE患者不良妊娠結(jié)局的保護(hù)因素(P均<0.05)。見(jiàn)表7。

        表4 不同妊娠結(jié)局PE患者分娩方式、初產(chǎn)婦情況、PE嚴(yán)重程度比較(例)

        表5 不同妊娠結(jié)局PE患者年齡、孕前BMI、分娩孕周、血清蛋白、尿蛋白水平比較(±s)

        表5 不同妊娠結(jié)局PE患者年齡、孕前BMI、分娩孕周、血清蛋白、尿蛋白水平比較(±s)

        妊娠結(jié)局結(jié)局良好結(jié)局不良n 57 38年齡(歲)30.67±5.31 31.85±5.49 BMI(kg/m2)22.18±2.66 22.30±2.71分娩孕周(周)37.15±2.52 37.24±2.54白蛋白(g/L)30.52±3.10 29.50±2.97 24 h尿蛋白(mg)1 941.27±140.34 1 968.95±145.62總蛋白(g/L)55.87±5.95 54.25±5.71

        表6 不同妊娠結(jié)局PE患者血壓、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮、HIPK3水平比較(±s)

        表6 不同妊娠結(jié)局PE患者血壓、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮、HIPK3水平比較(±s)

        注:與妊娠結(jié)局不良者相比,*P<0.05。

        妊娠結(jié)局結(jié)局良好結(jié)局不良n 57 38舒張壓(mmHg)106.36±10.62 109.09±11.03收縮壓(mmHg)132.37±11.73*159.90±13.67肌酐(μmol/L)55.37±9.21 58.45±9.78尿酸(μmol/L)315.59±37.26 325.52±38.57胱抑素C(μmol/L)1.42±0.47*2.20±0.73尿素氮(μmol/L)4.03±1.34 4.56±1.52 HIPK3 0.58±0.20*0.31±0.11

        表7 PE患者妊娠結(jié)局影響因素的多因素Logistic回歸分析結(jié)果

        2.4 血清HIPK3對(duì)PE患者妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)效能ROC曲線分析顯示,血清HIPK3預(yù)測(cè)PE患者妊娠結(jié)局的曲線下面積(AUC)為0.889(95%CI0.824~0.954),截?cái)嘀禐?.40,約登指數(shù)為0.658,靈敏度、特異度分別為81.6%、84.2%。見(jiàn)圖1。

        圖1 血清HIPK3預(yù)測(cè)PE患者妊娠結(jié)局的ROC曲線

        3 討論

        PE是一種多發(fā)于妊娠中晚期的高血壓疾病,其發(fā)病率逐年上升,是造成孕產(chǎn)婦、圍產(chǎn)兒死亡的重要原因[8-10]。本研究發(fā)現(xiàn),PE組HELLP綜合征、產(chǎn)后出血、胎盤(pán)早剝、胎兒窘迫、早產(chǎn)、胎兒生長(zhǎng)受限、胎兒死亡發(fā)生率高于對(duì)照組,表明PE患者及其胎兒發(fā)生不良妊娠結(jié)局的概率較大,及時(shí)診治PE非常必要。circRNA在血清中可穩(wěn)定存在,具有時(shí)空特異性、高度保守性等特點(diǎn),可影響蛋白質(zhì)翻譯,調(diào)控miR表達(dá),與PE等高血壓相關(guān)疾病進(jìn)展有關(guān)[11-14],有助于輔助診斷PE。然而,目前臨床上仍缺乏能夠有效預(yù)測(cè)PE患者妊娠結(jié)局的血清標(biāo)志物。因此,尋找與PE病理參數(shù)變化相關(guān)且可有效預(yù)測(cè)妊娠結(jié)局的血清指標(biāo),對(duì)及時(shí)干預(yù)PE、改善PE患者及其胎兒的結(jié)局有積極意義。

        近期研究顯示,circRNA 0085296在PE患者中表達(dá)失調(diào),其可通過(guò)靶向調(diào)控miR-942-5p表達(dá),調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞增殖、侵襲,影響血管生成,從而影響PE進(jìn)展,故circRNA 0085296可能是PE的治療靶點(diǎn)[15]。另有研究發(fā)現(xiàn),circRNA 0007121在PE患者胎盤(pán)組織中表達(dá)下調(diào),其可通過(guò)與miR-182-5p靶向結(jié)合進(jìn)而調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞侵襲、遷移、上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化,從而抑制PE的進(jìn)展[16]。以上研究表明,PE發(fā)生發(fā)展可能與circRNA異常表達(dá)相關(guān)。HIPK3作為circRNA的成員之一,其在PE中表達(dá)水平降低,HIPK3可通過(guò)靶向調(diào)控miR-346表達(dá)水平,進(jìn)而影響滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移、侵襲。研究認(rèn)為,HIPK3可能參與PE的發(fā)生發(fā)展[17]。ZHANG等[6]也得出了類(lèi)似的結(jié)論。本研究中,PE組血清HIPK3水平低于對(duì)照組,與相關(guān)研究結(jié)果一致,提示HIPK3表達(dá)下調(diào)可能與PE病理變化顯著有關(guān)。推測(cè)HIPK3可能與miR靶向結(jié)合,進(jìn)而調(diào)節(jié)滋養(yǎng)層細(xì)胞遷移、侵襲,抑制滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤(rùn)能力,使胎盤(pán)子宮螺旋動(dòng)脈重塑不足,造成血管阻力增加,胎盤(pán)血供減少[6,17],從而調(diào)控PE進(jìn)展,具體機(jī)制有待深入研究。

        PE患者多伴腎功能異常、血壓升高等[18-19]。本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,PE組白蛋白、總蛋白水平降低,24 h尿蛋白、舒張壓、收縮壓、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮水平升高,與相關(guān)研究結(jié)果類(lèi)似[18-19],且PE患者血清HIPK3水平與白蛋白、總蛋白、24 h尿蛋白、舒張壓、收縮壓、胱抑素C顯著相關(guān),提示HIPK3水平可能與PE患者腎功能異常、血壓升高關(guān)系密切,這為臨床治療PE患者腎功能損傷提供了新方向。多因素分析顯示,PE嚴(yán)重程度是導(dǎo)致PE患者不良妊娠結(jié)局的重要因素。ROC曲線分析發(fā)現(xiàn),血清HIPK3預(yù)測(cè)PE患者妊娠結(jié)局的AUC為0.889,靈敏度為81.6%,特異度為84.2%,當(dāng)血清HIPK3水平低于0.40時(shí),PE患者發(fā)生不良妊娠結(jié)局的風(fēng)險(xiǎn)較高。這提示血清HIPK3對(duì)PE患者妊娠結(jié)局有一定預(yù)測(cè)價(jià)值,HIPK3有望成為評(píng)估PE妊娠結(jié)局的血清標(biāo)志物。

        綜上,PE患者血清HIPK3水平降低,與白蛋白、總蛋白、24 h尿蛋白、舒張壓、收縮壓、肌酐、尿酸、胱抑素C、尿素氮等臨床指標(biāo)密切相關(guān),且HIPK3對(duì)于PE患者妊娠結(jié)局有一定預(yù)測(cè)價(jià)值。然而,HIPK3在PE發(fā)生發(fā)展中的具體作用機(jī)制尚未完全明確,后續(xù)實(shí)驗(yàn)將結(jié)合基礎(chǔ)研究加以探究;另外,因樣本量較少,本研究未能深入分析血清HIPK3水平與PE患者妊娠結(jié)局的關(guān)系,后期將增加樣本量,就血清HIPK3對(duì)HELLP綜合征、早產(chǎn)、胎兒死亡等妊娠結(jié)局的預(yù)測(cè)價(jià)值進(jìn)行分層探究。

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