吳芳，崔真真，郭玲燕，王海凌，王加鋒，張冰，辛義周

(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250011；3.山東力明科技職業(yè)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250116)

何首烏為蓼科植物何首烏(PolygonummultijiorumThunb.)的干燥塊根[1]，又名紫花藤、多花蓼、紫烏藤等，氣微，味微苦而甘澀。性微溫，歸肝、心、腎經(jīng)，具有解毒、消癰、截瘧、潤(rùn)腸通便等功效，制何首烏具有補(bǔ)肝腎、益精血、烏須發(fā)、強(qiáng)筋骨、化濁降脂等功效。何首烏始載于北宋《開寶本草》，“久服長(zhǎng)筋骨，益精髓，延年不老”。生用瀉下作用強(qiáng)，制后瀉下作用減弱，補(bǔ)益作用增強(qiáng)，符合傳統(tǒng)生瀉熟補(bǔ)[2]炮制理論。

1 何首烏炮制工藝

歷代何首烏常用炮制方法多為凈制、切制和炮炙。炮炙又分為無輔料炮炙(煮制、曬制、蒸制、火炮、炒制等)和有輔料炮炙(黑豆制、醋制、泔制、酒制、藥汁制、乳制、肉制、米制、面制、生姜制、甘草制、棗制等)。

現(xiàn)代何首烏炮制技術(shù)多采用微生物發(fā)酵、高壓蒸制等方法，其中發(fā)酵法為現(xiàn)代生產(chǎn)常用手段。發(fā)酵何首烏是指采用中藥微生物菌發(fā)酵技術(shù)炮制而成的何首烏制品，相對(duì)于傳統(tǒng)何首烏炮制品，具有非可用成分去除率高，吸收障礙少，藥用成分吸收利用率高，可空腹食用，毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)。杜晨暉等[3]利用微生物酶的專一性篩選有效可食用菌株，使何首烏有毒成分蒽醌類降解，含量減少，有效物質(zhì)大黃素、大黃素甲醚成分含量增加。秦波[4]利用指紋圖譜法對(duì)比發(fā)酵法與黑豆汁制法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵后的何首烏二苯乙烯苷類含量比黑豆汁制的含量降低20%，且卵磷脂等有益成分明顯增加，說明發(fā)酵法可減少肝毒性成分并保留有效成分。石聰?shù)萚5]利用重結(jié)晶法和色譜分離法鑒定發(fā)酵后的何首烏成分主要為大黃素、大黃素甲醚，有害物質(zhì)單寧、生物堿含量明顯減少。范瓊等[6]利用枯草桿菌發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵后的何首烏可降低有害物質(zhì)亞硝酸鹽的含量，并有清除自由基的作用。

2 化學(xué)成分

中藥的化學(xué)成分是闡明其有效性和毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)，何首烏主要化學(xué)成分包括蒽醌類、二苯乙烯苷類、磷脂類等，具有抗衰老、提高免疫力、降血脂、抗菌、抗誘變等藥理作用。目前實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，何首烏用于阿爾茨海默病、帕金森病、高脂血癥和癌癥等疾病的治療[7]主要由于含有醌類、磷脂等化合物；其毒副作用(肝毒性、腎毒性和胚胎毒性)主要是由大黃素和二苯乙烯苷類等化合物引起。

2.1 蒽醌類 蒽醌類化合物是何首烏的主要成分之一，包括大黃素(emodin)、大黃素甲醚(physcion)、蘆薈大黃素(aloe-e-modin)等[8-9]。其中，大黃素及其衍生物對(duì)肝細(xì)胞有損害，具有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，因此在炮制過程中需盡量降低大黃素的含量。楊磊等[10-13]利用HPLC法測(cè)定炮制前后蒽醌類成分含量變化，發(fā)現(xiàn)結(jié)合蒽醌和總蒽醌含量下降，游離蒽醌含量上升，大黃素的含量在32 h時(shí)達(dá)到最高，之后含量便逐漸降低，提示可以通過控制炮制時(shí)間來減少大黃素的含量。

朱杰等[14]比較了九蒸九曬法和黑豆汁制法兩種炮制方法對(duì)蒽醌類成分含量的影響，結(jié)果顯示九蒸九曬法隨著次數(shù)的增加，游離蒽醌的含量逐漸升高，總大黃素含量降低，證明此法可有效降低蒽醌類成分含量，減少何首烏毒性；而黑豆汁法炮制的何首烏，游離蒽醌含量明顯升高，總大黃素與總大黃素甲醚含量明顯增加，說明黑豆汁炮制不能降低何首烏肝毒性，不建議使用此法炮制。

徐文[15]在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的何首烏其蒽醌類成分含量也不同，炮制后含量各有差異且有不同程度的降低，其中產(chǎn)自云貴地區(qū)的何首烏炮制后蒽醌類含量降低明顯。

2.2 二苯乙烯苷類 二苯乙烯苷類是何首烏肝毒性的主要成分之一，同時(shí)也具有很強(qiáng)的抗氧化能力、抗動(dòng)脈粥樣硬化活性、對(duì)血小板栓塞等疾病具有保護(hù)作用[16]。周慶華等[17]利用HPLC法測(cè)定何首烏炮制前后二苯乙烯苷類的含量，結(jié)果表明二苯乙烯苷類的含量會(huì)隨著炮制時(shí)間的增加而減少。

李燁等[18]對(duì)比了黑豆汁蒸和黑豆汁煮兩種炮制方法，發(fā)現(xiàn)蒸法比煮法二苯乙烯苷含量較高，提示應(yīng)優(yōu)先選擇煮法炮制。

王建科等[19]對(duì)比四種炮制品(清蒸品、黃酒拌蒸品、黃酒炙品、黑豆汁制品)與生何首烏中二苯乙烯苷類含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4種炮制品中二苯乙烯苷類含量均有不同程度降低，其中黑豆汁制品降低量最高為66.4%。

2.3 磷脂類 何首烏中磷脂類成分較為豐富，含量較多的有卵磷脂、肌醇磷脂等，是重要的活性成分，有保肝、益智、增強(qiáng)免疫力等作用。何首烏的卵磷脂成分具有提高記憶力[20]，減少海馬細(xì)胞的凋亡，抑制鈣離子的積累，降低蛋白激酶表達(dá)等作用。

趙聲蘭等[21]采用鉬藍(lán)比色法和硫酸-苯酚法比較何首烏炮制品(清蒸品、黑豆汁拌蒸品)內(nèi)卵磷脂含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黑豆汁拌蒸品中磷脂類含量高于清蒸品，且隨蒸制時(shí)間和蒸制溫度的增加，磷脂含量減少。

閔建華等[22]通過控制高壓蒸制時(shí)間，對(duì)比清蒸品、黑豆蒸制品、酒蒸制品發(fā)現(xiàn)高壓黑豆制8 h卵磷脂含量最高，因在蒸制過程中黑豆中大量卵磷脂進(jìn)入何首烏內(nèi)部，增加卵磷脂含量。

2.4 糖類 何首烏中糖類成分具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗衰老及抗老年癡呆癥等作用。

田源紅等[23]研究了在100 ℃穩(wěn)定條件下，不同時(shí)間(20、24、28、32、36 h)蒸制對(duì)何首烏中糖類成分變化的影響，結(jié)果表明，與生品相較(1.63%)，蒸制36 h后多糖含量最高(1.68%～4.15%)。

羅旭蔚等[24]用硫酸-苯酚法檢測(cè)了何首烏清蒸后還原性糖、水溶性糖和多糖的含量變化，發(fā)現(xiàn)制何首烏比生何首烏含糖量高，還原性糖和水溶性糖含量最高。

2.5 其他成分 何首烏還含有無機(jī)元素、鞣質(zhì)等其他成分。羅益遠(yuǎn)等[25]用電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測(cè)何首烏炮制前后無機(jī)元素含量變化，發(fā)現(xiàn)其含量變化明顯，對(duì)人體有益的元素如鋁、鐵、鉀、錳、鋅等在炮制后含量增加，有害元素如銫、鉛、鈷等含量降低。

3 肝毒性研究

吳曉等[26]通過實(shí)驗(yàn)證明3種何首烏提取物肝毒性大?。核逄崛∥?丙酮提取物>制何首烏丙酮提取物，并通過高效液相色譜分析表明，何首烏中特征化合物的含量在炮制后發(fā)生變化：其中炮制后的丙酮提取物肝毒性成分2,3,4′，5-四羥基二苯乙烯2-O-β-d-葡萄糖苷含量降低了55.8%。

唐志芳等[27]以雌性大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，發(fā)現(xiàn)何首烏與制何首烏提取物均對(duì)大鼠原代肝細(xì)胞增殖有抑制作用，并且，原代肝細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，膽紅素會(huì)隨著何首烏與制何首烏提取物含量增高而減少，導(dǎo)致膽汁淤積。

李春雨等[28]利用脂多糖的肝損傷動(dòng)物模型，探索何首烏對(duì)大鼠肝臟的損傷，低劑量(1.08 g·kg-1)即可造成大鼠肝損傷，同時(shí)發(fā)現(xiàn)何首烏對(duì)本身有基礎(chǔ)疾病的人群危害較大。

郜丹等[29]利用細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證蒽醌類對(duì)細(xì)胞毒性影響，結(jié)果表明大黃酸和大黃素對(duì)HepG2細(xì)胞(人肝癌細(xì)胞)毒性最大，且隨濃度增高毒性越強(qiáng)。

4 藥代動(dòng)力學(xué)研究

王春英等[30]在何首烏有效成分二苯乙烯苷的藥代動(dòng)力學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)，單劑量給藥小鼠及兔后，二苯乙烯苷很快發(fā)生代謝轉(zhuǎn)化，進(jìn)而消除，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)符合二室模型；其胃腸道吸收不規(guī)則，不符合房室模型，說明二苯乙烯苷類成分在體內(nèi)時(shí)間停留較短。

王子璐[31]以制何首烏的活性成分大黃素(EM)、二苯乙烯苷(TSG)和蘆薈大黃素(AE)為研究對(duì)象,應(yīng)用LC-MS/MS方法,研究制何首烏活性成分的血漿藥代動(dòng)力學(xué)過程。大鼠單次灌胃0.5 g·kg-1制何首烏醇提取物后,觀察到EM和AE吸收和消除迅速,血藥濃度均在1 h達(dá)到峰值,t1/2分別為0.5 h和0.4 h,在血漿中可檢測(cè)到大量EM和AE的葡糖醛酸結(jié)合物,其血藥濃度峰值分別為EM和AE的18.4和19.8倍；TSG的血藥濃度較低,原型和葡糖醛酸結(jié)合物的Cmax分別為(39.1±23.3)和(61±34.4)ng·mL-1,血藥濃度分別在0.25 h和1 h達(dá)峰,隨后迅速消除。大鼠灌胃給藥EM或AE單體后,EM和AE原型吸收迅速,它們的葡糖醛酸結(jié)合物也是血漿中的主要成分,濃度顯著高于原型。與提取物給藥組相比,EM和AE原型的血漿消除顯著減慢,消除半衰期和體內(nèi)滯留時(shí)間顯著延長(zhǎng),相對(duì)應(yīng)的,它們的葡糖醛酸結(jié)合產(chǎn)物的血漿濃度低于提取物。膽管插管大鼠口服制何首烏提取物后,在膽汁中可檢測(cè)到EM、AE和TSG的原型及其葡糖醛酸結(jié)合物,它們的72 h總膽汁累積排泄率分別為49.5%、48.7%和1.6%,表明膽汁排泄是EM和AE的主要清除途徑之一。制何首烏活性成分EM、AE和TSG口服吸收迅速,可在肝臟和腎臟分布富集,代謝消除迅速。在大鼠,EM和AE均可經(jīng)酶介導(dǎo)代謝,轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo),主動(dòng)外排進(jìn)入膽汁排泄,膽汁排泄是大鼠口服提取物后EM和AE的主要消除途徑之一。

5 討論與展望

何首烏是常用的傳統(tǒng)中藥，其分布廣泛，藥用歷史悠久，臨床療效顯著，臨床應(yīng)用價(jià)值高，近些年何首烏的研究取得較大進(jìn)展，但仍有許多問題還需深入研究，如從道地藥材的選取到炮制的規(guī)范，從單一組分的分離純化到組分的藥理作用，從其有效性研究到其體內(nèi)外作用機(jī)制的研究，以及肝毒性的機(jī)理研究等?，F(xiàn)代有學(xué)者對(duì)何首烏的炮制方法進(jìn)行優(yōu)化創(chuàng)新，如預(yù)測(cè)性很好的Box-Behnken響應(yīng)面法優(yōu)化的高壓蒸法[32]，使沒有統(tǒng)計(jì)相關(guān)背景的用戶能夠簡(jiǎn)易設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)并分析結(jié)果；實(shí)驗(yàn)室常用高壓法[33-37]炮制何首烏飲片，因其縮短了炮制時(shí)間，實(shí)現(xiàn)炮制參數(shù)可控化，大大提高炮制效率等。何首烏肝毒性是臨床關(guān)注熱點(diǎn)，但常用的炮制方法對(duì)肝毒性的影響以及炮制增效減毒機(jī)制還需進(jìn)一步探索，借助藥代動(dòng)力學(xué)等方法，研究其在體內(nèi)的吸收、分布、代謝、排泄過程，可以更深入地闡明何首烏生品及炮制品的藥理作用及炮制機(jī)理。