唐振香，余麗金，平玉珍，王艷蕊

(海南現(xiàn)代婦女兒童醫(yī)院婦科，海南 ?？?571700)

多囊卵巢綜合征(polycystic ovary syndrome，PCOS) 是一種常見的女性內(nèi)分泌疾病，不僅可引起女性生殖功能障礙，還可造成代謝綜合征和心腦血管疾病等相關(guān)并發(fā)癥，嚴(yán)重影響婦女的生理和心理健康[1]。既往研究表明，PCOS的發(fā)生發(fā)展與胰島素抵抗、血脂異常、肥胖、代謝紊亂、基因突變、表觀遺傳及生活環(huán)境有關(guān)[2]。微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一類內(nèi)源性非編碼的RNA單鏈小分子，可通過調(diào)控基因水平表達(dá)參與PCOS的發(fā)生發(fā)展[3]。有研究表明，miR-194-3p及miR-296-3p在PCOS中異常表達(dá)，通過調(diào)節(jié)顆粒細(xì)胞的增殖、凋亡對(duì)卵泡發(fā)育產(chǎn)生影響，這可能為PCOS的診斷和治療提供新的策略[4-5]?？姑缋展芗に?anti-mullerian hormone，AMH)是一種二聚糖蛋白激素，參與卵泡的發(fā)育和調(diào)節(jié)，能有效反映卵泡數(shù)量、卵巢儲(chǔ)備及卵巢功能，對(duì)PCOS的診斷具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值[6]?；诖?，本研究通過檢測(cè)PCOS患者血清miR-194-3p及miR-296-3p的表達(dá)情況，分析其聯(lián)合AMH診斷PCOS的價(jià)值，旨在為PCOS的診療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018年1月至2021年9月我院收治的137例PCOS患者為PCOS組研究對(duì)象，年齡23～39歲，平均(29.16±4.75)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《多囊卵巢綜合征中國(guó)診療指南》中PCOS的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；②年齡>18歲，且未經(jīng)治療的初診患者；③配偶生育能力正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在性腺發(fā)育不全、生殖道畸形及高泌乳素血癥；②近1個(gè)月服用影響激素類藥物。另選取因男方因素不孕而接受檢查的50例健康女性作為對(duì)照組，年齡25～37歲，平均(28.62±3.64)歲。

1.2 分組方法

根據(jù)胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment of insulin resistance，HOMA-IR)，將137例PCOS患者分為胰島素抵抗組(n=90，HOMA-IR≥2.69)和非胰島素抵抗組(n=47，HOMA-IR<2.69)；根據(jù)體質(zhì)量指數(shù)(body mass index，BMI)將PCOS患者分為肥胖組(n=43，BMI≥28kg/m2)和非肥胖組(n=94，BMI<28kg/m2)；根據(jù)睪酮水平將PCOS患者分為高雄激素組(n=76，睪酮≥0.7ng/mL)及非高雄激素組(n=61，睪酮<0.7ng/mL)。

1.3 觀察指標(biāo)

抽取所有研究對(duì)象的空腹靜脈血5mL，離心分離血清，在ABI 7500型熒光定量PCR儀檢測(cè)miRNA水平。PCR總反應(yīng)體系為20μL：1μL引物及探針Mix(20×)，10μL TaqMan通用混合物溶液(2×)，1.33μL反向轉(zhuǎn)錄脫氧核糖核酸，7.67μL雙蒸餾水；反應(yīng)條件:95℃變性15s，60℃退火60s，72℃延伸60s。采用2-△Ct法計(jì)算miR-194-3p及miR-296-3p表達(dá)水平。采用羅氏全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀檢測(cè)血清AMH、黃體生成素(luteinizing hormone，LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)及睪酮水平；采用貝克曼DXC600全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein，LDL)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)及空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)PG)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 PCOS組和對(duì)照組患者基線資料的比較

PCOS組患者的LDL、HOMA-IR、LH、LH/FSH和睪酮水平均明顯高于對(duì)照組，而FSH水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為3.513、6.872、4.176、6.713、5.938、3.905，P<0.05)，其余基線特征差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

2.2 PCOS組和對(duì)照組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比較

PCOS組患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為15.284、19.360、14.608，P<0.001)，見表2。

2.3 PCOS肥胖組和非肥胖組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比較

肥胖組PCOS患者的血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平均明顯高于非肥胖組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；而非肥胖組和對(duì)照組患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表1 PCOS組和對(duì)照組患者基線資料的比較Table 1 Comparison of baseline data of the patients between the PCOS group and the control

表2 PCOS組和對(duì)照組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比較Table 2 Comparison of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels of the patients between the PCOS group and the control

表3 肥胖組和非肥胖組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比較Table 3 Comparison of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels of the POCS patients between the obese subgroup and the non obese

2.4 PCOS高雄激素組和非高雄激素組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比較

高雄激素組PCOS患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平均明顯高于非高雄激素組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；非高雄激素組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，見表4。

表4 高雄激素組和非高雄激素組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比較Table 4 Comparison of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels of the PCOS patients between the hyperandrogen subgroup and the non hyperandrogen

2.5 PCOS胰島素抵抗組和非胰島素抵抗組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比較

胰島素抵抗組PCOS患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平均明顯高于非胰島素抵抗組和對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；非胰島素抵抗組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，見表5。

表5 胰島素抵抗組和非胰島素抵抗組血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平比較Table 5 Comparison of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels of the POCS patients between the insulin resistance subgroup and the non insulin resistance

2.6 血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平對(duì)PCOS的診斷價(jià)值

血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平診斷PCOS的最佳截值分別為1.30、2.45及6.93ng/mL。單項(xiàng)檢測(cè)中，miR-296-3p 的敏感度和特異度較好，分別為86.2%和78.4%；聯(lián)合檢測(cè)中，三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷的敏感度最高(96.5%)；miR-296-3p與AMH聯(lián)合診斷的特異度最高(84.6%)。三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合對(duì)PCOS的診斷價(jià)值最大(AUC=0.917，95%CI：0.855～0.976)，其敏感度為96.5%，特異度為81.4%，詳見表6。

表6 血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平對(duì)PCOS診斷價(jià)值Table 6 Diagnostic values of serum miR-194-3p,miR-296-3p and AMH levels for PCOS

項(xiàng)目最佳截?cái)嘀礎(chǔ)UC95%CI敏感度(%)特異度(%)陽性預(yù)測(cè)值(%)陰性預(yù)測(cè)值(%)miR-194-3p+AMH—0.8250.767～0.88785.076.379.581.7miR-296-3p+AMH—0.8660.807～0.92888.284.681.891.3miR-194-3p+miR-296-3p—0.8430.784～0.90187.579.677.589.6三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合—0.9170.855～0.97696.581.484.293.0

2.7 血清miR-194-3p、miR-296-3p表達(dá)水平與AMH的相關(guān)性

Pearson相關(guān)分析顯示，PCOS患者血清miR-194-3p、miR-296-3p表達(dá)水平與AMH均呈正相關(guān)(r值分別為0.807、0.863，P<0.001)，見圖1。

圖1 血清miR-194-3p、miR-296-3p表達(dá)水平與AMH的相關(guān)性Fig.1 Correlations of serum expression levels of miR-194-3p and miR-296-3p with serum expression level of AMH

3 討論

3.1 miRNA及AMH在PCOS中的應(yīng)用

PCOS是一種好發(fā)于育齡期女性的內(nèi)分泌紊亂疾病。在PCOS患者的顆粒細(xì)胞、脂肪組織、卵泡液、血清和外周血中可檢測(cè)到miRNA的異常表達(dá)，且與PCOS的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，這將為PCOS的診療提供新的思路與方法[8]。研究表明，miRNA的異常表達(dá)與卵泡發(fā)育或功能障礙、卵巢激素的調(diào)節(jié)、顆粒細(xì)胞增殖和凋亡等有關(guān)，在PCOS的病理生理過程中發(fā)揮重要作用，可能是一種潛在的生物標(biāo)志物[9]。Butler等人[10]研究發(fā)現(xiàn)，PCOS患者的miRNA表達(dá)水平與正常人相比存在明顯差異，推測(cè)miRNA異常表達(dá)可能在基因水平參與PCOS的發(fā)病機(jī)制。AMH是一種二聚糖蛋白激素，其水平變化與卵泡生長(zhǎng)發(fā)育、排卵障礙及代謝異常密切相關(guān)，廣泛應(yīng)用于PCOS的診斷和療效評(píng)估，指導(dǎo)治療方案的選擇[11]。

3.2 miR-194-3p、miR-296-3p及AMH與PCOS發(fā)生發(fā)展的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn)PCOS患者血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平明顯高于對(duì)照組，提示miR-194-3p、miR-296-3p及AMH在PCOS中呈高表達(dá)，可能參與PCOS的發(fā)病過程。Jiang等人的[12]研究也發(fā)現(xiàn)，miR-194在PCOS患者中表達(dá)上調(diào)，其高表達(dá)與PCOS患者卵泡發(fā)育、胰島素抵抗和糖代謝紊亂有關(guān)，可能參與了PCOS的病理生理過程。Du等人[13]研究證實(shí)，PCOS患者早期卵泡發(fā)育存在明顯障礙，與AMH水平升高密切相關(guān)，AMH有可能被用作PCOS診斷的生物標(biāo)志物。

肥胖、高雄激素血癥和胰島素抵抗是PCOS發(fā)生發(fā)展的主要病理基礎(chǔ)：高水平的雄激素可拮抗雌激素，促進(jìn)卵巢顆粒細(xì)胞凋亡，進(jìn)而導(dǎo)致卵泡閉鎖，最終引起排卵功能障礙；肥胖的PCOS患者更易發(fā)生胰島素抵抗，高胰島素可抑制卵巢顆粒細(xì)胞增殖，引起顆粒細(xì)胞功能失調(diào)，導(dǎo)致卵泡無法正常生長(zhǎng)和排卵。本研究顯示，PCOS肥胖組、高雄激素組和胰島素抵抗組患者的血清miR-194-3p、miR-296-3p及AMH水平明顯高于非肥胖組、非高雄激素組和非胰島素抵抗組，且血清miR-194-3p、miR-296-3p表達(dá)水平與AMH呈正相關(guān)，提示miR-194-3p、miR-296-3p及AMH三者共同影響卵泡的正常發(fā)育。S?rensen等人[14]研究表明，miRNA在PCOS患者顆粒細(xì)胞和卵泡液中異常表達(dá)，可能在PCOS高雄激素、卵泡異常發(fā)育或功能障礙的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。Fu等人[15]研究顯示，血清AMH水平在高雄激素 PCOS患者中較非高雄激素患者顯著升高，AMH水平與激素水平異常、排卵障礙及胰島素抵抗密切相關(guān)，可能參與PCOS的發(fā)生發(fā)展過程。

3.3 miR-194-3p、miR-296-3p及AMH對(duì)PCOS診斷價(jià)值

本研究ROC分析顯示，miR-194-3p、miR-296-3p及AMH三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷PCOS的AUC最大，敏感度和特異度相對(duì)較好；相關(guān)分析也顯示，PCOS患者miR-194-3p、miR-296-3p表達(dá)水平與AMH呈正相關(guān)，表明miR-194-3p、miR-296-3p及AMH三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)PCOS的診斷效能較高，有望作為PCOS診斷的臨床輔助指標(biāo)。Chen等人[16]研究認(rèn)為，miRNA在PCOS病理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，與健康女性相比，PCOS患者miRNA表達(dá)的改變可能作為PCOS的非侵入性生物標(biāo)志物和新的治療靶點(diǎn)。另有研究表明，PCOS患者血清AMH水平較正常女性升高，在評(píng)價(jià)女性卵巢功能及預(yù)測(cè)促排卵過程中有著重要價(jià)值，有望成為PCOS診斷的可靠指標(biāo)[17]。

綜上所述，血清miR-194-3p及miR-296-3p表達(dá)水平在PCOS患者中明顯升高，其高表達(dá)可能參與了PCOS患者肥胖、高雄激素和胰島素抵抗，二者聯(lián)合AMH檢測(cè)對(duì)PCOS具有較高的診斷價(jià)值。