鄧松岳，孟建升，蔣俊春

(商丘市食品藥品檢驗檢測中心，河南 商丘 476000)

華蟾素有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用，其制劑是臨床常用藥物。對于腫瘤患者，經(jīng)過積極的手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療等綜合治療以后，同時配合使用華蟾素，可以起到一定的輔助治療作用，對于防止腫瘤的復(fù)發(fā)、延緩疾病的進展、改善預(yù)后具有一定作用。華蟾素腸溶膠囊是由干蟾皮加工制成的中藥制劑，蟾皮及其制品臨床應(yīng)用廣泛，特別是以干蟾皮為主要原料制成的水溶性制劑華蟾素為我國自行研發(fā)的二類新藥，對各種原發(fā)性惡性腫瘤具有較好的療效。蟾皮的化學(xué)成分復(fù)雜，目前分離獲得的主要單體有蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯類、吲哚生物堿類、蟾蜍環(huán)酰胺等化合物；其中吲哚生物堿類化合物具有一定的藥理作用，特別是抑制性神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺。為了加強華蟾素腸溶膠囊的質(zhì)量控制，保證產(chǎn)品療效，本研究參照《中國藥典》2020年版四部通則(溶出度與釋放度測定法)[1]，采用第三法小杯法，以5-羥色胺為測定指標，探討華蟾素腸溶膠囊的體外溶出度測定方法，以期為該制劑的臨床應(yīng)用提供質(zhì)量保障。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器5-羥色胺鹽酸鹽對照品由中國食品藥品檢定研究院提供(批號：111656-200401)，五氧化二磷、對二甲氨基苯甲醛(天津市大茂化學(xué)試劑廠)、鹽酸(洛陽市化學(xué)試劑廠)、磷酸鈉(天津市德恩化學(xué)試劑有限公司)均為分析純，華蟾素腸溶膠囊購自陜西東泰制藥有限公司(每粒 0.25 g；國藥準字Z20050846)；紫外分光光度計購自安捷倫(中國)有限公司，電子分析天平購自島津企業(yè)管理(中國)有限公司，全自動溶出試驗儀購自祿亙儀器設(shè)備(上海)有限公司，真空干燥箱購自上海博迅實業(yè)有限公司，超聲處理機購自深圳福洋科技集團有限公司。

1.2 方法

1.2.1 溶出方法由于樣品含量比較低，故采用小杯法測定華蟾素腸溶膠囊在鹽酸和磷酸鹽緩沖液中的溶出情況。將4粒華蟾素膠囊樣品加入到100 mL 溶出杯中，溶出介質(zhì)分別為0.1 mol·L-1鹽酸溶液和酸堿度(hydrogen ion concentration,pH)6.8磷酸鹽緩沖液，溶出介質(zhì)體積 100 mL，將溶出杯置于全自動溶出試驗儀，溶出溫度(37.0±0.5)℃，儀器轉(zhuǎn)速 100 r·min-1，樣品于0.1 mol·L-1鹽酸溶液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的取樣時間分別為2 h 和 30 min。將溶出液經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液。

1.2.2 建立標準曲線取5-羥色胺鹽酸鹽對照品適量，在真空干燥箱中干燥至恒重，稱取約10 mg(精確至0.1 mg)，加水制成濃度為40 mg·L-1的溶液，作為對照品溶液。精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分別置于10 mL量瓶中，加水至5.0 mL，再加入體積分數(shù)15%對二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液至刻度，搖勻，放置30 min，以水作空白對照，使用紫外分光光度計于555 nm波長處測定吸光度值，以吸光度值為縱坐標(y)，以對照品濃度為橫坐標(x)，繪制標準曲線。

1.2.3 紫外-可見分光光度法檢測溶出度取1.2.1 所得續(xù)濾液10 mL，置于20 mL量瓶中，用體積分數(shù)15%對二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液稀釋至刻度搖勻，放置30 min，以水作空白對照，使用紫外分光光度計在555 nm波長處測定吸光度值，帶入標準曲線，計算華蟾素腸溶膠囊在0.1 mol·L-1鹽酸溶液和磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中5-羥色胺的溶出度。實驗重復(fù)3次，取均值?！吨袊幍洹穂1]中要求：腸溶制劑在酸中溶出度不大于標示量的10%；在緩沖液中溶出度不低于標示量的70%。

1.2.4 精密度試驗取5份5-羥色胺對照品溶液5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加入體積分數(shù)15%對二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液至刻度，搖勻，放置30 min，以水作空白對照，使用紫外分光光度計于555 nm波長處測定吸光度值。

1.2.5 重復(fù)性試驗取同一批華蟾素腸溶膠囊樣品，按照擬定的溶出度測定方法檢測華蟾素腸溶膠囊在0.1 mol·L-1鹽酸溶液和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中5-羥色胺的溶出度，實驗重復(fù)5次，取均值。

1.2.6 回收率考察取華蟾素腸溶膠囊2粒，置于100 mL量瓶中，精密加入5-羥色胺鹽酸鹽對照品溶液(0.3 g·L-1)1.0 mL， 加入pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液溶解后，再加pH 6.8的磷酸鹽緩沖溶液至刻度，搖勻，精密量取該溶液5 mL，置于另一10 mL量瓶中，加入體積分數(shù)15%對二甲氨基苯甲醛鹽酸溶液至刻度，搖勻，放置30 min，以水作空白對照，在555 nm波長處測定吸光度值，計算回收率。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察結(jié)果標準曲線的回歸方程為y=0.021 85x+0.034 29，相關(guān)系數(shù)r=0.999 7，5-羥色胺對照品濃度在4.802～21.008 mg·L-1范圍內(nèi)與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。

2.2 溶出度測定結(jié)果華蟾素腸溶膠囊在0.1 mol·L-1的鹽酸溶液中的溶出度為(0.04±0.03)%，在磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中的溶出度為(84.6±1.9)%，符合《中國藥典》有關(guān)溶出度的要求。

2.3 精密度相對標準偏差(relative standard deviation，RSD) 為0.76%，精密度良好。

2.4 重復(fù)性華蟾素腸溶膠囊在0.1 mol·L-1的鹽酸溶液中5-羥色胺溶出度重復(fù)性測定的RSD為0.04%，在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中重復(fù)性測定的RSD為2.9%，重復(fù)性良好。

2.5 回收率華蟾素腸溶膠囊在0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中5-羥色胺的回收率為97.47%，RSD為1.6%。

3 討論

體外溶出度測定是考察口服固體制劑生物利用度的主要手段，溶出度測定方法在化學(xué)藥品中的應(yīng)用已經(jīng)發(fā)展的比較成熟。因為中藥制劑化學(xué)成分復(fù)雜，體外生物利用度的研究方法不夠成熟，所以關(guān)于中藥制劑體外溶出方法的研究發(fā)展相對較慢。但隨著傳統(tǒng)中藥的發(fā)展和儀器、技術(shù)的不斷更新，溶出度測定方法在中藥制劑質(zhì)量控制中的應(yīng)用也逐漸增多[2-4]。目前，華蟾素片的溶出度測定方法已有文獻報道[5-7]。華蟾素腸溶膠囊中華以蟾素毒基和酯蟾毒配基為測定指標的溶出度測定方法也有相關(guān)文獻文獻報道[8]。但華蟾素腸溶膠囊中5-羥色胺在0.1 mol·L-1鹽酸和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中的溶出度測定方法尚未見報道，腸溶膠囊可以有效地緩解藥物的不良反應(yīng)和胃部不適感，由于華蟾素腸溶膠囊有效成分的復(fù)雜性和難溶性，使得對其溶出度的測定研究意義重大。

華蟾素腸溶膠囊是以干蟾皮為主要原料加工制成的制劑?！吨袊幍洹穂6]中記載的蟾酥以華蟾酥毒基和酯蟾毒配基為測定有效成分。有研究報道，蟾酥藥材的另一有效成分為5-羥色胺，其生物活性也特別明顯[10-14]。華蟾素腸溶膠囊中5-羥色胺含量比華蟾酥毒基和酯蟾毒配基要高，在溶出介質(zhì)中更易于溶出，且穩(wěn)定性較好；而且采用紫外-可見分光光度法測定華蟾素腸溶膠囊中5-羥色胺含量在保證準確性的同時較液相色譜法更易于操作且省時，減少了有機溶劑的使用，更利于環(huán)保。故本研究建立華蟾素腸溶膠囊中5-羥色胺溶出度測定方法，以0.1 mol·L-1鹽酸溶液模擬胃液，以磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)模擬腸液，采用紫外-可見分光光度法測定華蟾素腸溶膠囊的體外溶出情況，以期用于華蟾素腸溶膠囊的質(zhì)量控制。

腸溶制劑在體內(nèi)的溶出和定位吸收情況要通過溶出度的測定來進行評價[15-17]。本研究結(jié)果顯示，華蟾素腸溶膠囊在0.1 mol·L-1鹽酸溶液中的溶出度為(0.04±0.03)%，在磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中的溶出度為(84.6±1.9)%，華蟾素腸溶膠囊在模擬胃液中的溶出度不超過10%，在模擬腸液中的溶出度不低于70%，符合《中國藥典》的要求。本研究方法線性關(guān)系考察結(jié)果顯示， 5-羥色胺鹽酸鹽對照品濃度在4.802～21.008 mg·L-1范圍內(nèi)與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。本研究方法精密度、重復(fù)性良好，且華蟾素腸溶膠囊在0.1 mol·L-1磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中5-羥色胺的回收率較高。

綜上所述，本研究所建立的華蟾素腸溶膠囊中5-羥色胺的體外溶出測定方法在模擬胃液中的溶出度不超過10%，在模擬腸液中的溶出度不低于70%，精密度、重復(fù)性良好，回收率高，可為華蟾素膠囊的質(zhì)量控制提供參考。