程新杰，卞廣利，李德強(qiáng)，閆凱，徐艷梅，高燕霞

(1.河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，石家莊 050011；2.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，石家莊 050000)

木蝴蝶為紫葳科植物木蝴蝶屬木蝴蝶Oroxylumindicum(L.)Vent的干燥成熟種子，又稱(chēng)千層紙、玉蝴蝶等，其廣泛地分布于亞洲國(guó)家[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，木蝴蝶具有抗氧化、抗菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗癌、降糖、抗誘變等多種生物活性[2-6]；植物化學(xué)研究表明，其主要成分為黃酮類(lèi)化合物，是其發(fā)揮生物活性的主要成分[6-7]。然而，木蝴蝶化學(xué)成分復(fù)雜、活性物質(zhì)含量較低，且共存大量的干擾物質(zhì)[8]。因木蝴蝶分布廣泛、來(lái)源復(fù)雜，生長(zhǎng)環(huán)境、產(chǎn)地氣候、采收時(shí)期及儲(chǔ)藏方法等不盡相同，其活性成分必然存在很大差異，使木蝴蝶活性成分的全面質(zhì)量控制成為研究難點(diǎn)和熱點(diǎn)。近年來(lái)，隨著科技的進(jìn)步及對(duì)天然藥物研究的重視，出現(xiàn)許多新興分析技術(shù)，使中藥活性成分的質(zhì)量控制得到了長(zhǎng)足的發(fā)展，對(duì)天然藥物的研究也越來(lái)越深入。本文查閱近年來(lái)國(guó)內(nèi)外木蝴蝶的研究文獻(xiàn)，對(duì)木蝴蝶活性成分的質(zhì)量控制做一綜述，以期為木蝴蝶的開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考。

1 木蝴蝶活性成分

植物活性成分指構(gòu)成植物體內(nèi)的物質(zhì)，除水分、蛋白質(zhì)、脂肪酸等必要物質(zhì)外，還包括其次生代謝產(chǎn)物，如萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿、甾體類(lèi)等。現(xiàn)代研究表明，木蝴蝶中含有多種活性成分，其中黃酮類(lèi)化合物是其主要活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗癌等廣泛的生物活性。目前，已知木蝴蝶中黃酮類(lèi)化合物有木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黃芩素、黃芩苷、白楊素、千層紙素A、木蝴蝶定、粗毛豚草素、白楊素-7-O-β-D-龍膽二糖苷、5，6-二羥基-7-甲氧基黃酮等30余種。其中，木蝴蝶苷B是木蝴蝶藥材中的特有成分，目前在其他藥材中尚未發(fā)現(xiàn)。木蝴蝶苷C和木蝴蝶苷D[9]、orlumin A[10]、oroxylumosides A和B[11]是近年來(lái)從木蝴蝶植物中最新分離得到的黃酮類(lèi)化合物。木蝴蝶中除了含有黃酮類(lèi)化合物外，還含有具有多種藥效作用的其他類(lèi)成分，如紅景天苷、麥角甾苷、洋丁香苷等對(duì)羥基苯乙醇化合物，連翹環(huán)己醇、異連翹環(huán)己醇、5，6-二氫化-7-羥基-棘木苷等環(huán)己醇類(lèi)化合物，2'，3'-二氫-2'-甲基-2'-十二烷基-2，3-呋喃妥因紫檀堿、2'，3'-二氫-2'-庚基-2，3-呋喃-8-羥基紫檀堿、2'，3'-二氫-2'-己基-2，3-呋喃-8-羥基紫檀堿等紫檀堿類(lèi)化合物，丁基羥基甲苯、苯乙酮、2，3，6-三甲基吡啶等揮發(fā)性成分，油酸、棕櫚酸、硬脂酸等有機(jī)酸類(lèi)化合物[12-14]；VIEN等[15]從木蝴蝶莖皮中分離出Oroxindols A 和B兩種新型癸二烷二萜化合物。在上述活性成分中，含量較高且研究較多的一類(lèi)化合物是黃酮類(lèi)化合物。

2 質(zhì)量控制研究

《中華人民共和國(guó)藥典》2020版采用高效液相色譜法，以單成分木蝴蝶苷B作為含量測(cè)定的指標(biāo)用于木蝴蝶的質(zhì)量控制。除此之外，指紋圖譜技術(shù)、液相色譜(LC)及液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)(LC-MS)、一測(cè)多評(píng)技術(shù)等也被廣泛應(yīng)用于木蝴蝶的質(zhì)量控制。

2.1LC法 LC法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、靈敏、精密度高、重復(fù)性好、自動(dòng)化程度高，已被廣泛地應(yīng)用于木蝴蝶的分析檢測(cè)。

SINHA等[16]通過(guò)HPLC指紋分析結(jié)合單標(biāo)記物多組分定量分析(quantitative analysis of multi-components by a single marker，QAMS)，以黃芩素為內(nèi)標(biāo)，同時(shí)測(cè)定了木蝴蝶中野黃芩苷、高車(chē)前素、黃芩素和Biochanina-A四種化合物的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，QAMS法與傳統(tǒng)的外標(biāo)法(external standard method，ESM)之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明，在沒(méi)有多種對(duì)照品的情況下，QAMS法是一種可用于測(cè)定多種成分含量的一致且簡(jiǎn)便的方法。此外，該方法的線性關(guān)系、精密度、穩(wěn)定性、回收率和重復(fù)性也得到了很好的驗(yàn)證，可有效地應(yīng)用于木蝴蝶的質(zhì)量評(píng)估。

SITHISARN等[17]建立了同時(shí)測(cè)定木蝴蝶中三種主要黃酮類(lèi)成分的HPLC法，色譜柱為X-terra C18(150 mm×3.9 mm，5 μm)，流動(dòng)相為0.01%磷酸水(A)-乙腈(B)，梯度洗脫，在285 nm處進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定結(jié)果顯示黃芩苷、黃芩素和白楊素的線性范圍分別為1.04～104，1.08～108，1.12～112 μg·mL-1，相關(guān)系數(shù)均≥0.999 0，回收率在90%～101%，RSD<2%，系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)均符合要求，該方法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好，適用于木蝴蝶果實(shí)及種子中黃芩苷、黃芩素和白楊素的同時(shí)定量測(cè)定，可為木蝴蝶的全面質(zhì)量控制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。

ROJSANGA等[18]通過(guò)HPLC法研究了采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)的木蝴蝶植物組織三個(gè)不同生長(zhǎng)階段(4 d、3周和9周)和原生木蝴蝶種子提取物中的三種主要黃酮類(lèi)成分(黃芩苷、黃芩素和白楊素)的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在三種黃酮中，黃芩苷含量最高，其次是白楊素，而黃芩素的含量最低。值得注意的是，黃芩苷和白楊素含量在組織培養(yǎng)植物根和子葉的發(fā)育過(guò)程中保持較高水平，但當(dāng)真葉開(kāi)始生長(zhǎng)時(shí)，其含量下降，而黃芩素則在各個(gè)生長(zhǎng)階段保持穩(wěn)定。此外，所建方法的線性、精密度和重復(fù)性也得到了驗(yàn)證。研究結(jié)果表明，該方法簡(jiǎn)單、快速，可用于木蝴蝶提取物中三種黃酮類(lèi)化合物的定量分析，同時(shí)，這種基于不同生長(zhǎng)階段的分析方法可為木蝴蝶的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制提供參考。

2.2LC-MS法 LC-MS法集色譜分離系統(tǒng)和質(zhì)譜檢測(cè)系統(tǒng)為一體，具有高通量、高靈敏度、高準(zhǔn)確性、高選擇性及高穩(wěn)定性的特點(diǎn)，適用于中藥復(fù)雜體系中成分的定性定量分析。

魏欣等[19]建立了超高效液相色譜-質(zhì)譜串聯(lián)(UPLC-MS/MS)法對(duì)木蝴蝶中木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、槲皮素、黃芩苷、黃芩素、高車(chē)前素、芹菜素、野黃芩素、白楊素、金絲桃苷10種主要成分同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。采用Inertsutain C18(100 mm×3.0 mm，2 μm)色譜柱，柱溫40 ℃，流動(dòng)相為乙腈(A)-甲醇(B)-0.5%甲酸水(C)，梯度洗脫，流速為0.5 mL·min-1，負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式。結(jié)果表明所測(cè)的10種主要成分在各自線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.996 6，精密度、重復(fù)性與穩(wěn)定性良好，平均加樣回收率為94.0%～104.5%，RSD≤3.21%。該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高、專(zhuān)屬性強(qiáng)，適用于木蝴蝶的質(zhì)量控制。

何民友等[20]采用超高效液相色譜三重四級(jí)桿質(zhì)譜聯(lián)用方法，建立木蝴蝶配方顆粒的特征指紋圖譜，并進(jìn)行含量測(cè)定。采用Agilent SB C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.8 μm)，流動(dòng)相分別為乙腈-0.01%甲酸和乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脫，流速為0.28 mL·min-1，柱溫設(shè)為30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為276 nm，結(jié)果顯示16批木蝴蝶配方顆粒和共有模式的相似性良好，相似度大于0.90，6種成分在各自測(cè)定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率在95.6%～102.8%，該方法可用于木蝴蝶配方顆?？焖?、全面、有效的質(zhì)量控制。

吳茵等[21]采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)結(jié)合Peakview數(shù)據(jù)分析平臺(tái)對(duì)木蝴蝶中黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行了快速地定性分析，色譜條件為Kinetex-XB C18色譜柱(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)，以乙腈-0.1%甲酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速為0.25 mL·min-1，采用負(fù)離子檢測(cè)模式，共分離和鑒定出36個(gè)黃酮類(lèi)化學(xué)成分，其中包括10種黃酮苷元及26種黃酮苷類(lèi)成分，該方法快速、準(zhǔn)確，可為木蝴蝶化學(xué)成分的鑒定提供一種新策略，同時(shí)也為木蝴蝶的進(jìn)一步質(zhì)量控制提供技術(shù)支持。

PENG等[22]建立了HPLC和LC-ESI-qTOF-MS/MS相結(jié)合的分析方法對(duì)木蝴蝶中化學(xué)成分進(jìn)行鑒定，并同時(shí)測(cè)定木蝴蝶中6種主要活性成分的含量。首先，通過(guò)LC-ESI-qTOF-MS/MS法對(duì)42個(gè)成分進(jìn)行鑒定，其中包括23種黃酮苷類(lèi)成分、13種黃酮類(lèi)成分和6種其他化合物；然后確定了指紋圖譜中19個(gè)共有峰的17個(gè)特征成分；最后采用液相色譜-紫外檢測(cè)(LC-UV)法同時(shí)測(cè)定6種主要活性成分。使用Waters Symmetry C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，0.1%甲酸水(A)和乙腈(B)為流動(dòng)相，以0.8 mL·min-1的流速進(jìn)行梯度洗脫，柱溫為35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，在負(fù)離子模式下進(jìn)行。結(jié)果顯示，6種組分的標(biāo)準(zhǔn)曲線在測(cè)試范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999 8，該方法快速、高效，可用于木蝴蝶的全面鑒別與質(zhì)量評(píng)價(jià)。

陳麗娜等[23]通過(guò)HPLC-DAD-ESI-MS技術(shù)對(duì)木蝴蝶甲醇提取物中的主要化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，使用Waters SunFire C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，采用以下條件進(jìn)行樣品分析：柱溫為40 ℃，流動(dòng)相為乙腈-純水(梯度洗脫)，流速為0.5 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm，負(fù)離子檢測(cè)模式。通過(guò)HPLC的分離、DAD 檢測(cè)器和電噴霧質(zhì)譜法的結(jié)構(gòu)確認(rèn)以及色譜圖和質(zhì)譜數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)的對(duì)比，共指認(rèn)了木蝴蝶苷B、2α，3β-二羥基羽扇豆醇、黃芩苷、腺苷、白楊素-7-葡萄糖酸苷、黃芩苷元、羽扇豆醇和白楊黃素等8個(gè)重要的化合物，該方法操作簡(jiǎn)單，分析快速，可用于木蝴蝶中化學(xué)成分的鑒定，并為木蝴蝶的質(zhì)量控制提供數(shù)據(jù)支持。

2.3氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)法 GC-MS法結(jié)合GC分離和MS結(jié)構(gòu)解析，通過(guò)碎片分布進(jìn)行定性定量分析，專(zhuān)屬性強(qiáng)、選擇性高、靈敏度高、檢出限低、檢測(cè)范圍廣、分析速度快，對(duì)于中藥等復(fù)雜的樣品檢測(cè)具有很大優(yōu)勢(shì)。王義梅等[14]采用GC-MS技術(shù)測(cè)定了木蝴蝶果實(shí)不同組織的揮發(fā)性成分，采用HP-5 色譜柱(30 mm×0.25 mm，0.25 μm)，程序升溫，載氣流速為1 mL·min-1，質(zhì)量掃描范圍為40～800 amu。通過(guò)計(jì)算機(jī)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)(NIST2002)檢索結(jié)合參考文獻(xiàn)的比對(duì)，在木蝴蝶果實(shí)各組織中共測(cè)出丁基羥基甲苯、丁基-3-庚烷基-鄰苯二甲酸酯、苯乙酮、苯基乙醇、4-甲氧基苯乙酮、4'-羥基苯乙酮、6-Octadecenoic acid和檸檬酸丁酯等8種主要成分，且在各個(gè)組織中，以丁基羥基甲苯的含量最高。該方法簡(jiǎn)單、高效，可用于木蝴蝶中揮發(fā)性成分的檢測(cè)，并為木蝴蝶資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用和質(zhì)量控制提供依據(jù)。

2.4基于藥理活性的綠色質(zhì)量控制 鑒于中藥材質(zhì)量控制所需儀器設(shè)備昂貴、質(zhì)量控制指標(biāo)少、有機(jī)溶劑易對(duì)環(huán)境造成污染等缺點(diǎn)，有必要進(jìn)行基于藥理活性的“綠色”質(zhì)量控制研究。在已知木蝴蝶中的4種主要黃酮類(lèi)化合物木蝴蝶苷A、木蝴蝶苷B、黃芩素和白楊素具有酶抑制活性[24-25]的前提下，YIN等[26]以這4種主要的黃酮類(lèi)成分為質(zhì)量控制指標(biāo)，建立了一種簡(jiǎn)單、綠色、快速的木蝴蝶質(zhì)量控制方法。實(shí)驗(yàn)以低共熔溶劑(Deep eutectic solvents，DES)氯化膽堿/1，4-丁二醇(1：3)為綠色提取液，采用組織破碎提取技術(shù)(tissue-smashing extraction，TSE)對(duì)木蝴蝶中活性成分進(jìn)行超快速提取，并結(jié)合超高液相色譜-紫外檢測(cè)(UPLC-UV)方法對(duì)四種主要的黃酮類(lèi)化合物進(jìn)行定量分析。與常規(guī)方法相比，這種基于DES的TSE結(jié)合UPLC-UV技術(shù)大大縮短了提取時(shí)間、提高了提取效率、降低了能耗，而且減少了環(huán)境污染。此外，所建立的UPLC法具有良好的線性，準(zhǔn)確度和精密度。因此，該技術(shù)可作為一種簡(jiǎn)單、可靠、高效、靈敏的方法，用于木蝴蝶的綠色質(zhì)量控制。

3 結(jié)束語(yǔ)

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，中藥木蝴蝶具有多種顯著的藥理作用，是重要的藥食兩用物質(zhì)，有望成為治療心血管疾病、糖尿病、腫瘤等的藥物或被開(kāi)發(fā)為抗衰老和功能保健類(lèi)藥物，其社會(huì)效與經(jīng)濟(jì)效應(yīng)前景廣闊。因此，十分有必要對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格的把控。相信隨著對(duì)天然產(chǎn)物研究的不斷深入及科技的不斷革新，會(huì)出現(xiàn)更多簡(jiǎn)便、高效、快速、準(zhǔn)確的分析技術(shù)用于木蝴蝶的全面質(zhì)量控制研究，為木蝴蝶的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考，同時(shí)也為開(kāi)發(fā)安全高效的創(chuàng)新藥物奠定基礎(chǔ)。