氯酞酸甲酯（Chlorthal-dimethyl或Dacthal），分子式C10H6Cl4O4，化學(xué)名2,3,5,6-四氯對(duì)苯二甲酸二甲酯，常用商品名為敵草索（DCPA）。氯酞酸甲酯屬于苯甲酸類(lèi)除草劑，可被禾本科植物的胚芽鞘和下胚軸吸收，對(duì)發(fā)芽的種子進(jìn)行除殺，常用于洋蔥、大蒜、韭菜、西紅柿、生菜、大豆、棉花和景觀植物等作物中[1-2]。該產(chǎn)品于20世紀(jì)50年代在美國(guó)市場(chǎng)推出，在北美應(yīng)用較為廣泛，八九十年代開(kāi)始在美國(guó)、加拿大多地的土壤、水體、大氣中都能檢測(cè)出氯酞酸甲酯及其代謝物的殘留[3-5]。我國(guó)直到2021年9月3日實(shí)施的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763—2021）中才首次為氯酞酸甲酯制定最大殘留限量，涵蓋谷物、油料、蔬菜、水果、堅(jiān)果、飲料類(lèi)、調(diào)味料和藥用植物等各類(lèi)植物源性食品，最大殘留限量均為0.01 mg·kg-1[6]。2022年國(guó)家食品安全監(jiān)督抽檢首次將氯酞酸甲酯納入監(jiān)督抽檢項(xiàng)目（茶葉）。

目前GB 2763—2021中指定的氯酞酸甲酯檢測(cè)方法為參照SN/T 4138—2015，采用QuEChERS前處理，負(fù)化學(xué)源（NCI）-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定低限為0.008 mg·kg-1[7]。但該標(biāo)準(zhǔn)適用的基質(zhì)僅為蔬菜和水果，對(duì)茶葉并未驗(yàn)證。此外，目前采用CI源的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)不多，且大部分檢測(cè)項(xiàng)目都有可供選擇的其他標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致CI源氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀普及遠(yuǎn)不如EI源。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（Gas Chromatgraphy-Tandem Mass Spectrometry，GC-MS/MS） 法 自 GB 23200.113—2018實(shí)施以來(lái)已經(jīng)成為重要的農(nóng)藥檢測(cè)手段，且該標(biāo)準(zhǔn)適用于蔬果、糧谷、茶葉、植物油等各類(lèi)植物源性食品[8]。因此，本文建立了一種茶葉中氯酞酸甲酯的GC-MS/MS檢測(cè)方法，該方法快速簡(jiǎn)便、靈敏度和準(zhǔn)確度高，定量限能滿足標(biāo)準(zhǔn)要求，適用于茶葉中氯酞酸甲酯的定量檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

標(biāo)準(zhǔn)品：氯酞酸甲酯（97.4%，CAS號(hào)1861-32-1）、外環(huán)氧七氯B（99.4%，CAS號(hào)1024-57-3）；乙腈、乙酸、乙酸乙酯、丙酮、正己烷和甲苯，均為分析純；QuEChERS萃取鹽包（含6 g無(wú)水硫酸鎂、1.5 g乙酸鈉）、QuEChERS凈化管（含1.2 g硫酸鎂、400 mg PSA、400 mg C18、200 mg GCB）；固相萃取柱：石墨碳/弗羅里硅土（GCB/Florisil）聯(lián)用柱（500 mg/500 mg，6 mL）、石墨碳/PSA（GCB/PSA）聯(lián)用柱（500 mg/500 mg，6 mL）、石墨碳/氨基（GCB/NH2）聯(lián)用柱（500 mg/500 mg，6 mL）；0.22 μm微孔有機(jī)濾膜。

樣品：選取紅茶、綠茶、烏龍茶、普洱茶、花茶（茉莉花茶）、調(diào)味茶（蜜桃烏龍）和代用茶（干菊花）各1種進(jìn)行驗(yàn)證，均購(gòu)自佛山市內(nèi)某超市。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 8890-7000D氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（Agilent）；MV5氮吹儀（LaBTech）；RV10旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（AIKA）；ME204E電子天平（Mettler Toledo）；FJ-200均質(zhì)器（上海標(biāo)本模型廠）；3-18KS離心機(jī)（SIGMA）；VORTEX-5渦旋振蕩器。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量的氯酞酸甲酯和外環(huán)氧七氯B，用乙酸乙酯分別配制成1 000 mg·L-1的氯酞酸甲酯儲(chǔ)備液和100 mg·L-1的外環(huán)氧七氯B內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，再分別稀釋成100 mg·L-1的氯酞酸甲酯工作液和5 mg·L-1的內(nèi)標(biāo)溶液，-18 ℃避光儲(chǔ)存。氯酞酸甲酯根據(jù)需要用空白樣品基質(zhì)逐步稀釋配成基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線以供使用。

1.3.2 試樣制備

取茶葉樣品500 g，粉碎后充分混勻，放于聚乙烯瓶中，-18 ℃保存。

1.3.3 樣品前處理

（1）QuEChERS前處理。稱(chēng)取2 g試樣于50 mL塑料離心管，加10 mL水渦旋混勻，靜置30 min。加入15 mL預(yù)先在4 ℃冷卻的乙腈-乙酸（99+1）溶液、1包萃取鹽包，蓋上離心管蓋，劇烈振蕩1 min，5 000 r·min-1離心5 min。吸取10 mL上清液到一支凈化小管中，渦旋混勻1 min。5 000 r·min-1離心5 min，準(zhǔn)確吸取3 mL上清液于10 mL試管中，40 ℃水浴氮吹至近干。加入20 μL內(nèi)標(biāo)溶液（5 mg·L-1），加入1 mL乙酸乙酯復(fù)溶，過(guò)微孔濾膜，用于測(cè)定。

（2）固相萃取前處理。稱(chēng)取5 g試樣于100 mL塑料離心管，加10 mL水渦旋混勻，靜置30 min。加入20 mL乙腈，高速勻漿2 min，加入約7 g氯化鈉劇烈振蕩數(shù)次，5 000 r·min-1離心5 min。準(zhǔn)確吸取10 mL上清液于100 mL茄型瓶中，40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至1 mL左右，氮?dú)獯抵两?，待凈化。? mL乙腈-甲苯（3+1）溶液預(yù)淋洗固相萃取柱，棄去流出液。下接150 mL雞心瓶，將上述待凈化溶液用3 mL乙腈-甲苯溶液洗滌至固相萃取柱中，再用2 mL乙腈-甲苯溶液洗滌茄形瓶，將洗滌液移入柱中，重復(fù)2次。用25 mL乙腈-甲苯溶液淋洗小柱，收集以上所有流出液于150 mL雞心瓶中，40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干。加入20 μL內(nèi)標(biāo)溶液（5 mg·L-1），加入1 mL乙酸乙酯復(fù)溶，過(guò)微孔濾膜，用于測(cè)定。

1.3.4 儀器條件

色譜柱：VF-1701ms色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；色譜升溫程序：40 ℃保持1 min，然后以40 ℃·min-1升至 120 ℃，再以 5 ℃·min-1升至 240 ℃，再以12 ℃·min-1升至300 ℃，保持6 min；載氣：氦氣，純度≥99.999%，流速1.0 mL·min-1；氮?dú)?，純度?9.999%；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；進(jìn)樣量：1 μL；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣。

電離能量：70 eV；離子源溫度：280 ℃；傳輸線溫度：280 ℃；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM），離子對(duì)及碰撞能見(jiàn)表1；溶劑延遲：5 min。

表1 定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、碰撞氣能量表

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)條件優(yōu)化

本文所用VF-1701ms色譜柱及氣相色譜升溫程序均參考GB 23200.113—2018[8]，經(jīng)過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全掃描（SCAN）分析觀察，0.1 mg·L-1的氯酞酸甲酯峰形良好，響應(yīng)較高，出峰時(shí)間適中（見(jiàn)圖1）。在該條件下繼續(xù)進(jìn)行碰撞能和碎片離子的選擇，最終得到合適的定量、定性離子對(duì)和碰撞能。

圖1 氯酞酸甲酯（0.1 mg·L-1）的定量離子對(duì)及定性離子對(duì)質(zhì)譜圖

2.2 前處理選擇

茶葉基質(zhì)復(fù)雜，前處理過(guò)程中往往伴隨大量色素、氨基酸、生物堿、多酚類(lèi)物質(zhì)等一同提取，可能會(huì)對(duì)檢測(cè)造成干擾。本文對(duì)植物源性樣品中農(nóng)藥殘留最常用的前處理方法QuEChERS法和固相萃取法作了比較，其中固相萃取選取了同一品牌的石墨碳/弗羅里硅土聯(lián)用柱（GCB/Florisil）、石墨碳/PSA聯(lián)用柱（GCB/PSA）、石墨碳/氨基聯(lián)用柱（GCB/NH2）3種農(nóng)殘檢測(cè)中最為常用的固相萃取柱。選取加標(biāo)0.05 mg·kg-1的紅茶樣品，各前處理方法各進(jìn)行3次實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 不同前處理方法回收率示意圖

圖2結(jié)果表明，QuEChERS法回收率最高，可達(dá)90%以上，而3種固相萃取法回收率略低，在80%～85%。從凈化后溶液顏色來(lái)看，3種固相萃取柱都能吸附樣品液中的大部分色素，而QuEChERS法凈化后溶液仍呈明顯的亮黃色，這可能是由于固相萃取柱在吸附了色素的同時(shí)也一定程度上吸附了氯酞酸甲酯，在后續(xù)洗脫步驟中未能充分將氯酞酸甲酯洗脫從而使得回收率偏低?？紤]到QuEChERS法消耗溶劑較少，操作較為簡(jiǎn)便，回收率較高，在實(shí)際工作中推薦使用QuEChERS法作為前處理方法。不過(guò)考慮到固相萃取法回收率亦較高較穩(wěn)定，對(duì)樣品基質(zhì)的凈化效果更好，對(duì)儀器襯管、色譜柱、離子源等的污染更低，在條件不滿足QuEChERS法的情況下也采取GCB/PSA、GCB/NH2固相萃取柱聯(lián)用進(jìn)行處理。

2.3 線性范圍、檢出限和定量限

用基質(zhì)溶液配制2.0～500.0 ng·mL-1系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，結(jié)果表明在5.0～500.0 ng·mL-1線性良好，線性相關(guān)系數(shù)R2=0.999 6。通過(guò)在空白基質(zhì)中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液，使標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)信號(hào)為3倍信噪比時(shí)該濃度為檢出限，10倍信噪比時(shí)為定量限，測(cè)得本方法檢出限為0.003 mg·kg-1， 定 量 限 為 0.008 mg·kg-1， 能 滿 足GB 2763—2021的檢測(cè)需求。

2.4 回收率和精密度

采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)添加回收的方法，在不含氯酞酸甲酯的茶葉中添加低、中、高3個(gè)濃度水平進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度平行測(cè)定6次，考察方法精密度，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加標(biāo)回收率和精密度表

3 結(jié)論

本文通過(guò)對(duì)QuEChERS和GCB/Florisil、GCB/PSA、GCB/NH23種固相萃取柱前處理方法的篩選優(yōu)化，以及氯酞酸甲酯的離子對(duì)篩選優(yōu)化，建立了適用于各類(lèi)茶葉和代用茶中的氯酞酸甲酯的檢測(cè)方法，該方法準(zhǔn)確度、靈敏度高，能滿足GB 2763—2021的檢測(cè)需求。