張思琪 李靜 仵倩紅

結(jié)核病作為一種具有極高傳染性的疾病，早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療是減少傳播、控制疫情的關(guān)鍵[1]。結(jié)核病初期診斷依賴于痰涂片鏡檢是否觀察到抗酸桿菌，即采用萋-尼染色法進行抗酸染色，通過人工鏡檢，在100倍的油鏡下觀察50～300個視野[2]，通過是否觀察到抗酸桿菌做出最終診斷。痰涂片顯微鏡檢查是基層結(jié)核病診療機構(gòu)診斷肺結(jié)核最常用的實驗室檢查方法，具有操作簡單、方便的特點，在結(jié)核病控制工作中對于發(fā)現(xiàn)傳染源、疾病診斷、療效評價等具有重要意義，但也存在不足和局限[3-5]，如在操作過程中人工鏡檢耗時長且漏檢率高，陽性檢出率低，不能為臨床提供很好的參考價值。然而，結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)適用于各類醫(yī)療單位微生物室、結(jié)核實驗室，對萋尼抗酸染色樣本進行全自動掃描讀取、智能識別與分析，可以在很大程度上彌補人工鏡檢的不足，能夠準確地篩選出多數(shù)陰性痰涂片，提高陽性檢出率。為研究結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)的診斷效能，筆者收集了陜西省結(jié)核病防治院結(jié)核病患者的痰標本，通過對結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)與人工鏡檢進行對比，評估結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)在結(jié)核病診斷中的應用價值。

資料和方法

一、標本收集

收集2021年12月1—31日陜西省結(jié)核病防治院收治的1717例疑似結(jié)核病住院患者的痰標本。請患者留取晨痰，置于無菌帶螺旋蓋樣本瓶中，樣本量不能少于5 ml，否則視為不合格標本，需重新留取。

二、儀器與試劑

本研究使用的儀器包括結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)、溫箱、高壓蒸汽滅菌器、冰箱、振蕩器、光學顯微鏡；試劑采用自配的萋-尼抗酸染色試劑。

三、研究方法

1.離心沉淀集菌涂片法：首先將留取好的痰液標本通過高壓蒸汽(1.0 kg/cm2，121 ℃，15～20 min)液化處理，取出放冷后，取5～10 ml盛于容積為50 ml的離心管中，加滅菌蒸餾水20～30 ml，于振蕩器上振蕩5～10 min，以離心半徑40 cm，3000 r/min離心15～30 min，使結(jié)核分枝桿菌集中于試管底部，用其沉渣按照直接涂片鏡檢法進行涂片、染色和鏡檢[6]。

2.痰培養(yǎng)法：嚴格按照文獻[6]操作。取2 ml痰標本經(jīng)N-乙酰-L-半胱胺酸-氫氧化鈉法(NALC-NaOH，終濃度為1.5%)消化去污處理后，室溫靜置15 min，用磷酸鹽緩沖液中和(pH值為6.8)后再以3000×g離心15 min，棄上清，以2 ml磷酸鹽緩沖液重懸沉淀物，取0.5 ml重懸液接種至BACTEC MGIT 960(簡稱“MGIT 960”)培養(yǎng)管中，加入0.8 ml 營養(yǎng)添加劑(OADC)和雜菌抑制劑(PANTA)的混合液，嚴格按照說明書進行操作。將接種好的MGIT 960培養(yǎng)管放入MGIT 960系統(tǒng)中孵育，儀器對分枝桿菌的生長進行自動監(jiān)測。儀器報陽后采用結(jié)核分枝桿菌抗原檢測試劑盒(MPB64)進行鑒定，判斷是結(jié)核分枝桿菌還是非結(jié)核分枝桿菌[6]。

3.結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)：采用寧波舜宇儀器有限公司生產(chǎn)的FS200結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)。

4.閱片方法：將涂片放入掃描儀中進行檢閱，統(tǒng)計陽性結(jié)果與陰性結(jié)果。然后在不得知結(jié)果的情況下由2名具有痰檢質(zhì)控資質(zhì)的檢驗師進行鏡下閱片，統(tǒng)計陽性和陰性結(jié)果。

四、質(zhì)量控制

本課題人員均接受過專業(yè)培訓，掌握課題的實施方案。研究的標本進行了嚴格的臨床調(diào)查，實施過程中嚴格按照實施方案標準進行患者納入、表格登記、實驗操作、結(jié)果判斷等。每天做好儀器維修保養(yǎng)登記，在實驗過程中嚴格做好質(zhì)量控制。

五、統(tǒng)計學處理

采用SPSS 18.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。以痰培養(yǎng)及檢測到結(jié)核分枝桿菌作為標準，采用χ2檢驗比較結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)與人工鏡檢的陽性檢出率，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié) 果

1717例疑似結(jié)核病患者中，以痰培養(yǎng)及檢測到結(jié)核分枝桿菌作為標準，檢測出244例陽性患者。結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)與人工鏡檢的陽性檢出率分別為94.67%(231/244)和59.02%(144/244)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=87.166，P=0.001)。

討 論

目前，結(jié)核病的診斷主要通過臨床表現(xiàn)、細菌學檢驗、影像學檢查、免疫學檢查、支氣管鏡檢查和活體組織檢查等[3]。涂片法屬于細菌學檢驗方法，為目前結(jié)核病臨床診斷首要檢測方法，是初步篩查結(jié)核病的重要檢測手段。痰涂片顯微鏡檢查在結(jié)核病控制工作中對于發(fā)現(xiàn)傳染源、疾病診斷、療效評價等具有重要意義，萋-尼染色涂片鏡檢是我國結(jié)核病控制工作中最主要的實驗室診斷方法，其特異度高，成本低，是國家結(jié)核病控制規(guī)劃中發(fā)現(xiàn)患者效率較高的方法[7]。因此，本研究旨在通過比較結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)與人工鏡檢的診斷效能，找出能夠提高陽性檢出率的方法，進而輔助結(jié)核病的臨床診斷。

涂片法是診斷結(jié)核病最直接、簡單、快速的方法，是初期篩查結(jié)核病的重要檢測方法，更加適用于基層醫(yī)療機構(gòu)和結(jié)核病專科醫(yī)院。陜西省結(jié)核病防治院為結(jié)核病?？漆t(yī)院，每日需檢測的標本量非常多，然而陽性檢出率低，分析原因發(fā)現(xiàn)，由于標本量較大，需要的檢驗人員較多，一名鏡檢人員鏡下檢查300個視野至少需要5 min，且連續(xù)閱讀10～12張玻片后應休息約20 min[7]。因此，需要大量工作人員完成此項工作，并且在鏡檢過程中檢驗人員視覺疲勞會導致漏檢和錯檢，假陰性和假陽性結(jié)果也會隨之增多，影響臨床的判斷。在引進結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)后，可以節(jié)省對檢驗人員的需求，提高檢驗效率，節(jié)省檢驗時間，檢驗者僅需要將結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)疑似或確定的陽性涂片進行人工鏡檢，并挑選10%的陰性片進行人工復檢，從而提高集菌涂片的陽性率，為臨床診斷結(jié)核病提供參考價值。

在使用結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)的過程中發(fā)現(xiàn)，其仍存在假陰性的可能，分析原因發(fā)現(xiàn)可能是因為菌量較少(1～5條)，結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)的掃描范圍是由技術(shù)人員設定區(qū)域，當痰涂片的載菌量較低時，在掃描儀能夠掃描的范圍內(nèi)(300視野)有可能無法被發(fā)現(xiàn)，發(fā)生漏檢。當技術(shù)人員將掃描范圍擴大至500視野甚至更高的視野后，會降低假陰性的概率。而儀器出現(xiàn)假陽性的原因在于染色過程中，鹽酸酒精脫色這一步驟很難把握，從而有可能導致脫色不干凈，有殘渣存在，在閱片過程中，把殘渣誤認為是結(jié)核分枝桿菌從而報陽；在人工鏡檢復查過程中被篩選出來。所以在后期要特別重視染色部分，對涂片染色部分進行嚴格把關(guān)，從而減少假陽性的概率。

結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)用于檢測集菌涂片更加方便、快捷、有效，其陽性檢出率高于人工鏡檢。隨著結(jié)核分枝桿菌掃描系統(tǒng)的逐漸成熟，目前國內(nèi)多家結(jié)核病定點醫(yī)院已投放使用，其快速、準確、高效的檢測結(jié)果，可為進一步診治提供幫助。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突