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        動(dòng)物源性食品中抗生素殘留物質(zhì)的 快速檢測(cè)方法

        2022-11-20 04:10:16李敏,商春鋒,李鳳姣
        現(xiàn)代食品 2022年17期
        關(guān)鍵詞:類抗生素檢測(cè)法源性

        在我國(guó),由于獸醫(yī)用藥制度的不完善及相應(yīng)的檢測(cè)監(jiān)督系統(tǒng)不健全,再加上經(jīng)濟(jì)利益方面的影響,常會(huì)出現(xiàn)抗生素類藥物濫用現(xiàn)象,其潛在致病危害逐漸引起了社會(huì)的普遍關(guān)注??股氐氖褂煤图?xì)菌的耐藥性是互相依存、互相制約的兩個(gè)方面,人們食用了有抗生素殘留的動(dòng)物性食品后,體內(nèi)的耐藥菌株和抗生素藥物的毒副作用都會(huì)嚴(yán)重威脅身體健康,因此積極尋求簡(jiǎn)單、快速、高效和準(zhǔn)確的抗生素殘留檢測(cè)技術(shù)成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)問題[1-2]。

        1 動(dòng)物源性食品中抗生素的分類

        動(dòng)物源性食品中的抗生素一般包括β-內(nèi)酰胺類抗生素、氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、氯霉素類以及林可酰胺類等幾種類型。

        β-內(nèi)酰胺類抗生素主要包括青霉素類、頭孢菌素類等。青霉素類抗生素是最早用于臨床的抗生素,作用于革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陽性桿菌和部分革蘭氏陰性球菌,它是通過抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的生成而達(dá)到殺菌的目的,主要用于治療敏感細(xì)菌導(dǎo)致的敗血癥、肺部感染等疾病,是一種窄譜抗生素,因此針對(duì)性強(qiáng),具有療效高、毒性低、臨床應(yīng)用廣泛等特點(diǎn)。其毒副作用比較明顯,易引起過敏反應(yīng),嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致過敏性休克。頭孢菌素類抗生素是從冠頭孢菌培養(yǎng)液中分離的頭孢菌素C,經(jīng)改造側(cè)鏈而得到的一系列半合成抗生素,抗菌譜廣,對(duì)厭氧菌有高效的殺傷力,和青霉素作用機(jī)理相同,也是通過抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的生成而達(dá)到殺菌的目的,屬于繁殖期殺菌藥。由于其不良反應(yīng)和毒副作用較低,是當(dāng)前開發(fā)較快的一類抗生素。

        氨基糖苷類抗生素的性質(zhì)比較穩(wěn)定,主要作用是與細(xì)菌核糖體結(jié)合,抑制蛋白質(zhì)的合成,并破壞細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性,是一類靜止期殺菌劑,抗菌譜較廣,在有氧條件下能對(duì)敏感細(xì)菌起到良好的消殺作用。它的副作用比較明顯,劑量超標(biāo)易引起腎中毒、呼吸衰竭等反應(yīng)。

        大環(huán)內(nèi)酯類抗生素是一種快速抑菌劑,常見的有紅霉素、阿奇霉素、克拉霉素等。它是通過選擇性抑制蛋白質(zhì)的合成達(dá)到殺菌的作用,主要作用于需氧的革蘭氏陽性菌和革蘭陰性菌,在輕中度感染中有著廣泛應(yīng)用。它的毒副作用也較明顯,主要表現(xiàn)為消化道癥狀和肝毒性。

        四環(huán)素類抗生素主要包括四環(huán)素、土霉素和強(qiáng)力霉素等,是由放線菌產(chǎn)生的,具有抑菌作用并在極高濃度時(shí)有殺菌作用的一大類半合成廣譜抗生素,除常見的革蘭陽性菌、革蘭陰性菌以及厭氧菌外,還應(yīng)用于多數(shù)立克次氏體、衣原體、支原體等所導(dǎo)致的感染。畜禽養(yǎng)殖過程中,四環(huán)素類抗生素作為防治藥物添加到飼料中,用于防治腸道感染、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng),在水產(chǎn)養(yǎng)殖中其也被廣泛應(yīng)用于預(yù)防和治療多種感染性疾病。長(zhǎng)期攝入四環(huán)素殘留超標(biāo)的食品會(huì)引起人體嚴(yán)重的肝損害,對(duì)骨和免疫系統(tǒng)也有影響。

        氯霉素是由委內(nèi)瑞拉鏈絲菌產(chǎn)生的抗生素,抗菌譜極廣。它作用于核糖體上,能抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成,因此對(duì)大多數(shù)的G+菌和G-菌都有較好的消殺效果,同時(shí)它的脂溶性較高,易進(jìn)入腦脊液和腦組織,對(duì)許多病原體有著良好的抑制作用。雖然氯霉素類抗生素的作用比較廣泛,但毒副作用較多,會(huì)導(dǎo)致再生障礙性貧血,嚴(yán)重者會(huì)產(chǎn)生致命性的危害,因此使用量逐漸減少,很多國(guó)家在水產(chǎn)、畜牧生產(chǎn)中已經(jīng)禁止使用。

        林可酰胺類抗生素是一種由鏈霉菌產(chǎn)生的具有強(qiáng)效、窄譜的抑菌性抗菌藥物,主要包括林可霉素和克林霉素,該類抗生素針對(duì)性強(qiáng),對(duì)革蘭陽性菌及厭氧菌具有良好的抗菌活性。

        2 動(dòng)物源性食品中抗生素殘留的檢測(cè)方法

        2.1 前處理方法

        2.1.1 液-液萃取法

        液-液萃取主要是根據(jù)物質(zhì)在兩相系統(tǒng)分配系數(shù)不同的特性展開相應(yīng)的提取和分離操作。該方法的操作比較簡(jiǎn)單,但其需要使用大量的檢測(cè)試劑,對(duì)于實(shí)驗(yàn)人員和實(shí)驗(yàn)環(huán)境具有一定的危害,實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性較差,整體的回收率也較低。液-液萃取法在基質(zhì)比較復(fù)雜的動(dòng)物源性食品檢測(cè)中應(yīng)用較少,需結(jié)合其他處理和檢測(cè)方法來保證實(shí)驗(yàn)的合理性[3]。借助兩步液-液萃取對(duì)目標(biāo)樣本進(jìn)行提取,使用乙酸乙酯和丙酮進(jìn)行分別萃取處理,采用Oasis MCX混合陽離子固相萃取小柱對(duì)提取液實(shí)施凈化富集處理操作,最后借助高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(High Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry,HPLCMS)對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。

        2.1.2 固相萃取法

        固相萃取技術(shù)的原理是通過固體吸附劑對(duì)目標(biāo)組分實(shí)施選擇性吸附操作,以此來實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的高效分離、純化和濃縮處理。固相萃取技術(shù)在發(fā)展和應(yīng)用過程中因其自身簡(jiǎn)潔高效的特點(diǎn)而得到了大范圍的推廣和應(yīng)用。固相萃取法檢測(cè)所需時(shí)間短,很快就可得出檢測(cè)結(jié)果,同時(shí)能夠節(jié)省一定量的溶劑,重現(xiàn)性良好。固相萃取檢測(cè)法需結(jié)合應(yīng)用其他分析方法和處理技術(shù)進(jìn)行抗生素殘留物質(zhì)的檢測(cè),針對(duì)不同基質(zhì)形成專屬性方法。固相萃取法對(duì)檢測(cè)樣品有著較好的富集作用,同時(shí)可顯著降低基質(zhì)的干擾程度[4]。但針對(duì)基質(zhì)較為復(fù)雜的動(dòng)物源性食品樣品的檢測(cè)工作,只使用一般的固相萃取方法無法同時(shí)兼容和考慮到不同類別的多種抗生素殘留檢測(cè),同時(shí)對(duì)其進(jìn)行提取凈化處理。

        2.2 快速檢測(cè)方法

        2.2.1 免疫親和色譜

        免疫親和色譜是借助抗體或與抗體相關(guān)的材料作為固定相的色譜,與抗原性物質(zhì)特異性結(jié)合,而其他樣品基質(zhì)和雜質(zhì)不與固定相結(jié)合,從而進(jìn)行檢測(cè)。在實(shí)際的檢測(cè)過程中,技術(shù)人員應(yīng)借助瓊脂糖包埋克倫特羅多克隆抗體的免疫親和預(yù)柱展開樣品的預(yù)處理和測(cè)定。相較其他檢測(cè)方法,免疫親和色譜檢測(cè)技術(shù)的特異性較強(qiáng),實(shí)驗(yàn)過程需使用大量的純化特異性抗體作為固定相,因此要花費(fèi)較多的成本和資金,這在一定程度上限制了免疫親和色譜檢測(cè)技術(shù)在動(dòng)物源性食品抗生素殘留檢測(cè)中的進(jìn)一步發(fā)展和應(yīng)用。

        2.2.2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

        目前,在動(dòng)物源性食品的抗生素殘留檢測(cè)中,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)是重要的分析分離方法。該技術(shù)是以液相色譜為分離系統(tǒng),質(zhì)譜為檢測(cè)系統(tǒng),樣品經(jīng)液相色譜分離后,在質(zhì)譜的離子源中被離子化,質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開,最后經(jīng)檢測(cè)器得到質(zhì)譜圖。這種技術(shù)有效結(jié)合了色譜的高分離能力和質(zhì)譜的定性檢測(cè)能力,是一種復(fù)雜混合物定性定量分析的有效方法。與其他方法相比,液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法靈敏度高,選擇性強(qiáng),檢測(cè)過程快捷高效,在抗生素殘留檢測(cè)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。

        2.2.3 免疫學(xué)檢測(cè)法

        免疫學(xué)檢測(cè)方法在動(dòng)物源性食品抗生素殘留檢測(cè)中也有著一定的應(yīng)用,在實(shí)際檢測(cè)過程中分為酶聯(lián)和層析兩種類型。酶聯(lián)免疫學(xué)檢測(cè)法一般是借助抗原與抗體、酶與底物之間的變化實(shí)施抗生素殘留物質(zhì)的有效檢測(cè),其可以完成對(duì)檢測(cè)目標(biāo)樣品的定量定性檢測(cè)和分析,實(shí)際檢測(cè)效果良好。免疫層析檢測(cè)方法是通過抗原與抗體之間的免疫學(xué)反應(yīng)和層析技術(shù)實(shí)現(xiàn)抗生素殘留檢測(cè)。

        2.2.4 微生物檢測(cè)法

        微生物檢測(cè)法是借助微生物抑制分析流程并結(jié)合抗生素物質(zhì)對(duì)特異微生物的抑制作用實(shí)現(xiàn)殘留物質(zhì)的有效檢測(cè)和定性分析。在檢測(cè)過程中,微生物檢測(cè)法具有樣品處理簡(jiǎn)單、回收率高的特點(diǎn),在抗生素殘留分析篩選中能夠發(fā)揮較大的作用?,F(xiàn)階段,部分技術(shù)人員和檢測(cè)人員將特異微生物作為工作菌,結(jié)合使用圓濾紙片法或杯蝶法對(duì)抗生素殘留物質(zhì)展開系統(tǒng)性分析和檢測(cè)[5]。微生物檢測(cè)法在檢測(cè)靈敏度和精度方面存在著一定的不足,特異性欠缺,僅可以在抗生素總殘留的檢測(cè)方面發(fā)揮一定的作用和效果,同時(shí)會(huì)受到其他抗生素物質(zhì)的干擾,技術(shù)人員應(yīng)結(jié)合應(yīng)用免疫法和儀器分析法展開綜合檢測(cè),以此來提高檢測(cè)結(jié)果的科學(xué)性與可靠性。

        3 動(dòng)物源性食品中抗生素殘留控制對(duì)策

        3.1 加強(qiáng)抗生素藥物使用管理工作

        結(jié)合國(guó)家在動(dòng)物源性食品抗生素類藥物和添加劑使用方面的法律規(guī)定,加強(qiáng)抗生素藥物的使用管理,同時(shí)對(duì)法律法規(guī)進(jìn)行合理補(bǔ)充和完善,提高對(duì)動(dòng)物食品安全立法問題的研究和重視程度,約束地方執(zhí)法行為,針對(duì)違規(guī)使用抗生素藥品和物質(zhì)的行為給與相應(yīng)的處罰,嚴(yán)厲打擊不同動(dòng)物源性食品中的抗生素藥物的違法生產(chǎn)、銷售和使用等行為[6]。

        3.2 加強(qiáng)宣傳,合理用藥

        針對(duì)動(dòng)物源性食品中抗生素藥物和添加劑殘留問題,相關(guān)部門應(yīng)組織養(yǎng)殖人員參加科學(xué)用藥培訓(xùn)工作,從而在一定程度上減少不合理的用藥行為。同時(shí)加強(qiáng)科普知識(shí)的科學(xué)宣傳和推廣,主管部門積極落實(shí)專題講座活動(dòng)和座談會(huì),大力宣傳動(dòng)物養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中的抗生素藥品使用相關(guān)的法律法規(guī),使養(yǎng)殖人員掌握正確的抗生素和添加劑使用方法。

        3.3 加強(qiáng)源頭監(jiān)管

        為進(jìn)一步提高畜牧產(chǎn)品的質(zhì)量,相關(guān)部門需在源頭上采取科學(xué)合理的監(jiān)管措施和方案,積極落實(shí)抗生素專項(xiàng)治理工作,借助執(zhí)法與監(jiān)管、檢測(cè)與查詢相結(jié)合的方式,建立上下聯(lián)動(dòng)機(jī)制限制抗生素違規(guī)使用現(xiàn)象。同時(shí),在基層工作開展過程中使用先進(jìn)的抗生素殘留檢測(cè)技術(shù)將檢測(cè)與動(dòng)物檢疫的行政行為充分結(jié)合起來,借助檢疫手段推動(dòng)檢測(cè)和養(yǎng)殖檔案的科學(xué)建立,規(guī)范抗生素用藥行為。

        4 結(jié)語

        綜上所述,在動(dòng)物源性食品抗生素殘留檢測(cè)過程中,檢測(cè)人員需合理應(yīng)用各中前處理和檢測(cè)技術(shù),結(jié)合實(shí)際情況聯(lián)合應(yīng)用不同的檢測(cè)技術(shù)和方法提高檢測(cè)的精準(zhǔn)度和效率。動(dòng)物源性食品殘留的抗生素物質(zhì)對(duì)人體健康有著較大的危害,相關(guān)部門需加強(qiáng)對(duì)此方面的監(jiān)管。相關(guān)人員應(yīng)積極研發(fā)并應(yīng)用先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)和方法,在保證食品安全的同時(shí)保證人們的健康,降低對(duì)環(huán)境的污染和影響。

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