文│張應(yīng)斌（山東省濟(jì)南市鋼城區(qū)艾山街道辦事處畜牧獸醫(yī)站）

能夠引起豬腹瀉的疫病很多，如豬流行性腹瀉、豬傳染性胃腸炎、豬輪狀病毒病、豬細(xì)小病毒病、豬白痢、豬副傷寒、豬球蟲病、豬弓形蟲病、豬球蟲病等。其中豬流行性腹瀉（Porcine epidemic diarrhea，PED）是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV-CoV）感染引起的高度傳染性腸道感染病，主要的臨床癥狀包括腹瀉（白色或黑色的水樣糞便，氣味惡臭）、脫水（高滲出性腹瀉引起嚴(yán)重脫水）、嘔吐（嘔吐物中常有未消化的乳糜）、腹部腫脹、食欲減退和精神沉郁等。不同年齡的豬對豬流行性腹瀉均易感，主要發(fā)生在兩周齡的仔豬。不同日齡的豬感染后癥狀不同，十日齡內(nèi)的仔豬感染后的平均死亡率為50%，最高能達(dá)90%，感染仔豬耐過后可能變成發(fā)育緩慢的僵豬。肥育豬感染后一般癥狀輕微，基本能夠自行恢復(fù)，平均死亡率在3%以下。該病的流行存在季節(jié)性，在冬春季節(jié)多發(fā)。豬流行性腹瀉分布廣泛，給豬養(yǎng)殖業(yè)造成的經(jīng)濟(jì)損失嚴(yán)重，2013—2015年美國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)生了嚴(yán)重的豬流行性腹瀉疫情，損失了約700萬頭豬。隨著發(fā)達(dá)國家執(zhí)行嚴(yán)格的生物安全措施，豬流行性腹瀉疫情呈現(xiàn)下降趨勢，而亞洲地區(qū)豬流行性腹瀉疫病近年來頻發(fā)，并且呈現(xiàn)出高度復(fù)雜的變異性。

一、豬流行性腹瀉病理變化

豬發(fā)生感染后，對病豬剖檢后可見明顯的腸道病變，一周齡內(nèi)仔豬消化道脹氣，小腸內(nèi)脹氣且有積液，伴有零星出血。胃壁、腸壁變薄，胃內(nèi)容物呈凝集狀，胃黏膜上皮細(xì)胞有脫落或呈空泡狀，胃腺上皮細(xì)胞壞死，腸壁出現(xiàn)滲出性出血。小腸絨毛細(xì)胞脫落，腸絨毛萎縮或斷裂，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可能出現(xiàn)萎縮。腸道內(nèi)發(fā)生炎癥的部位主要以十二指腸和空腸的病變最明顯，十二指腸的腸腔內(nèi)充滿黏液，空腸腸腔內(nèi)存在大量的白色黏稠滲出物。有的病豬肺泡內(nèi)出現(xiàn)少量的炎性滲出物，腎表皮出現(xiàn)點(diǎn)狀出血，脾表層充血，肝表皮細(xì)胞出現(xiàn)顆粒變性。

二、豬流行性腹瀉病毒及其感染機(jī)制

PEDV-CoV屬于套病毒目冠狀病毒科冠狀病毒屬，最早于1971年首次被報道。冠狀病毒引起的各種傳染病對人類和動物健康構(gòu)成了巨大威脅，如當(dāng)今流行全球的新型冠狀病毒（COVID-19）。PEDV-CoV的粒子直徑為95～190納米之間，平均直徑為130納米，主要為球形。冠狀病毒屬包括PEDV-CoV、豬傳染性胃腸炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV-CoV）、豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒（Swine acute diarrhoea syndrome coronavirus，SADSCoV）和豬delta冠狀病毒（Porcine deltacoronavirus，PD-CoV）等。從臨床癥狀上難以區(qū)分PEDV-CoV和TGEV-CoV感染，但TGEV-CoV感染引起的病癥相對輕緩，PEDV-CoV感染引起臨床癥狀最為強(qiáng)烈，死亡率也最高。另外，豬輪狀病毒（Porcine retavirus，PRV）感染引起的臨床癥狀也與PEDV-CoV感染相似，因此很難通過臨床癥狀的不同診斷具體的感染病毒，需要應(yīng)用實驗室診斷方法。PEDV-CoV和其他冠狀病毒類似，PEDV-CoV感染、復(fù)制過程的主要步驟包括附著和進(jìn)入、病毒復(fù)制酶翻譯、基因組轉(zhuǎn)錄和復(fù)制、結(jié)構(gòu)蛋白翻譯以及病毒粒子組裝和釋放。PEDVCOV是RNA病毒，對乙醚、氯仿等脂溶性試劑和一般消毒劑均敏感，但當(dāng)前卻沒有有效的抗生素對PEDV-CoV有效，對PED的防控主要是綜合防控和疫苗預(yù)防。而且豬腹瀉很多時候是多種感染并存，預(yù)防和治療需要考慮其他可能的疫病。

PEDV-CoV已被證實可以感染鴨腸上皮細(xì)胞、蝙蝠肺泡細(xì)胞和人肺泡巨噬細(xì)胞，由于PEDV-CoV的宿主不僅僅是豬，PED具有跨物種傳播的潛力。序列分析表明，PEDV-CoV和SADS-CoV可能起源于蝙蝠冠狀病毒，而PD-CoV則起源于麻雀冠狀病毒這也證明了冠狀病毒的跨物種傳播特性。PEDV-CoV通過消化道傳播（糞或其他污染物—口傳播）、母乳傳播和精液傳播，主要經(jīng)口鼻進(jìn)入豬體內(nèi)。PEDV-COV進(jìn)入腸道后，通過氨基肽酶功能性受體的介導(dǎo)感染腸絨毛上皮細(xì)胞和杯狀細(xì)胞，并能逐漸感染腸隱窩細(xì)胞和腸系膜淋巴結(jié)。在小腸絨毛上皮細(xì)胞內(nèi)大量增殖，造成細(xì)胞損傷、絨毛萎縮，對腸道內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收出現(xiàn)障礙，引起滲出性腹瀉。乳糖酶、蔗糖酶、麥芽糖酶、亮氨酸氨基肽酶和堿性磷酸酶等腸道酶生成不足，對營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用不足。同時PEDV-CoV的感染也能引起線粒體功能障礙，進(jìn)一步造成腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的利用不足，造成滲出性腹瀉。腸道杯狀細(xì)胞受損，數(shù)量減少，黏蛋白分泌減少，致使腸道對致病菌群的抵抗力減弱，更易引起其他疾病的感染。

三、診斷

微量血清中和試驗，林志雄等采用PEDV-G1株感染PK-15細(xì)胞作指示細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)發(fā)生過PED的豬場豬血清均為陽性。

電鏡和免疫電鏡，電鏡觀察可以從形態(tài)上區(qū)分PEDV-CoV和TGEV，但差異很小，難以區(qū)分，免疫電鏡能夠直觀地定性，但因為設(shè)備昂貴，并不適于大規(guī)模診斷。

酶聯(lián)免疫吸附法，現(xiàn)已有可以從糞便中檢出PEDV-CoV抗原和從血清中檢出PEDV-CoV抗體的酶聯(lián)免疫吸附法。酶聯(lián)免疫吸附法被認(rèn)為是檢測血清抗體最敏感、最特異的方法。

膠體金技術(shù)，與酶聯(lián)免疫吸附法一樣已開發(fā)出許多商品試劑盒或試紙條，能夠較廣泛地應(yīng)用于現(xiàn)場大批量檢測。

反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RTPCR）法，已建立各種RT-PCR方法，檢測靈敏，但所需儀器設(shè)備限制了其應(yīng)用，不適用于臨床診斷。在RT-PCR法的基礎(chǔ)上，已開發(fā)出環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)，操作簡便，檢測結(jié)果可以直觀地肉眼判斷。

熒光定量RT-PCR法，比常規(guī)RT-PCR法的靈敏度更高，且速度更快，現(xiàn)已開發(fā)出能夠同時檢測PEDVCoV和TGEV的熒光定量RT-PCR法。

四、疫苗

疫苗研制的關(guān)鍵是低毒、高滴度和高免疫原性菌株的選擇。傳統(tǒng)疫苗主要是滅活疫苗和減毒活疫苗。滅活疫苗的優(yōu)點(diǎn)在于安全性良好，易于生產(chǎn)。但滅活疫苗的免疫原性可能會在滅活過程中發(fā)生改變，滅活疫苗不能在宿主體內(nèi)復(fù)制，因此通常需要多次注射或加強(qiáng)注射，或者高免疫劑量。減毒活疫苗經(jīng)單次免疫通常足以誘導(dǎo)保護(hù)性免疫，但其適用性有限，安全性差，研制周期長。

亞單位疫苗的安全性高，無傳染性，其免疫原性較低，不過可以提供性質(zhì)明確的統(tǒng)一抗原，可以與佐劑或與免疫增強(qiáng)劑融合以提高免疫原性。PEDV-CoV S蛋白是開發(fā)亞單位疫苗的主要抗原蛋白，研究人員已利用大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、桿狀病毒、腺病毒和轉(zhuǎn)基因植物（如L. plantarum）系統(tǒng)表達(dá)了部分PEDVCoV S蛋白，通過口服、肌內(nèi)注射、皮下注射或腹腔注射后的小鼠和豬產(chǎn)生了高水平的IgG和IgA?；赑EDVCoV N蛋白和PEDV-CoV M蛋白的亞單位疫苗尚未見報道。

核酸疫苗包括DNA疫苗和mRNA疫苗，優(yōu)點(diǎn)是安全性高，抗原基因序列和表達(dá)載體等都可以在所建立的平臺上共享，有助于在短時間內(nèi)開發(fā)新出現(xiàn)的PEDV-CoV的疫苗。PEDVCoV與TGEV-CoV的二價DNA疫苗已經(jīng)開發(fā)出來，但尚未進(jìn)行臨床試驗。RNA疫苗具有廣闊的應(yīng)用前景，與DNA疫苗相比，mRNA疫苗具有更高的免疫效力，但在體內(nèi)更不穩(wěn)定。美國Harrisvaccines公司已經(jīng)推出PEDVCoV的mRNA疫苗。

疫苗防控并不僅局限在疫苗研制本身，也要結(jié)合實際情況開發(fā)。腸黏膜上皮細(xì)胞分泌的SIgA能夠中和PEDV-CoV病毒，母豬初乳中的SIgA能夠保護(hù)新生仔豬免受PEDV感染。因此可以通過將PEDV-CoV減毒菌株包埋在特殊材料中，輸送至腸黏膜誘導(dǎo)黏膜免疫。也可以通過滅活疫苗對懷孕母豬產(chǎn)前14天進(jìn)行接種，使懷孕母豬具有高血清lgG和lgA水平，并保障初乳中IgA抗體滴度以保護(hù)哺乳仔豬。

五、小結(jié)

當(dāng)前距離完全揭示PEDV-CoV的感染和致病機(jī)制還有一段距離，藥物和疫苗等有效防控措施仍然有待開發(fā)。關(guān)于PED的防控重點(diǎn)在于改善養(yǎng)豬場的生物安全措施，開發(fā)快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)的檢測方法對疾病進(jìn)行實時監(jiān)測，以及進(jìn)行新型的研制。