亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        植物氮素利用途徑中硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因的研究進(jìn)展

        2022-11-19 23:35:13劉文平梁烜赫張春宵李淑芳曹鐵華李曉輝
        中國(guó)土壤與肥料 2022年7期
        關(guān)鍵詞:硝酸鹽突變體擬南芥

        劉文平,梁烜赫,張春宵,李淑芳,曹鐵華*,李曉輝*

        (1.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院玉米研究所,吉林 公主嶺 136100;2.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所,吉林 長(zhǎng)春 130033;3.吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物資源研究所,吉林 公主嶺 136100)

        氮素是植物生長(zhǎng)發(fā)育必需的大量元素之一,是氨基酸、核酸和葉綠素等不可缺少的組成成分。土壤中的氮含量會(huì)嚴(yán)重影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育,氮含量低時(shí),植株的根不斷伸長(zhǎng),側(cè)根數(shù)量增多,生長(zhǎng)變慢、分枝和分蘗都變少[1-2]。土壤中的氮素會(huì)被細(xì)菌硝化成硝酸鹽,所以土壤中通常存在大量的硝酸鹽,是植物獲取氮素的主要來(lái)源。由于植物不能像動(dòng)物一樣自由移動(dòng),為了適應(yīng)不同的氮素環(huán)境條件,進(jìn)化出了復(fù)雜巧妙的調(diào)控機(jī)制去適應(yīng)時(shí)刻變化的外界環(huán)境。植物從土壤中吸收硝酸鹽是一個(gè)復(fù)雜的生物過(guò)程,包括硝酸鹽吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和同化等[3-4]。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程,硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因是一個(gè)多基因的基因家族,這些基因在植株不同部位特異表達(dá),基因功能也各不相同,并且存在一因多效的基因。在整個(gè)生物過(guò)程中,需要不同的硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因在植株的不同部位各司其職并共同調(diào)控作用才能完成。植物通過(guò)根系細(xì)胞膜上的硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白吸收硝酸鹽,然后從根部細(xì)胞向地上部轉(zhuǎn)運(yùn),經(jīng)過(guò)木質(zhì)部和韌皮部的裝載及卸載,最后轉(zhuǎn)運(yùn)到葉片細(xì)胞,被同化或者被儲(chǔ)存在液泡中[5-6]。

        提高作物的產(chǎn)量主要是通過(guò)增施氮肥,但是大量施用氮肥不僅會(huì)造成能源的浪費(fèi)和生產(chǎn)成本的增加,還會(huì)加劇土壤酸化和水體的富營(yíng)養(yǎng)化。為了提高氮肥利用效率,闡明植物如何從土壤中獲取氮素的分子機(jī)理是植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)科的研究熱點(diǎn)之一。近年來(lái),前人從植物的根、莖、葉等部位和從細(xì)胞水平到分子水平對(duì)植物氮素吸收利用進(jìn)行了深入研究,全面闡述植物是如何從外界環(huán)境中吸收氮素,轉(zhuǎn)運(yùn)到植株的不同部位,并進(jìn)行同化利用[7]。本文綜述了植物硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因的研究進(jìn)展,以期利用基因編輯技術(shù)對(duì)NRT關(guān)鍵基因進(jìn)行編輯,提高NRT蛋白對(duì)硝酸鹽的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和再分配的效率,提高植株對(duì)氮素的利用效率,培育氮高效利用的作物品種,以減少氮肥的投入,從而實(shí)現(xiàn)節(jié)能減排的作物可持續(xù)生產(chǎn)。

        1 硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因

        硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因在植物中對(duì)硝酸鹽的吸收利用具有至關(guān)重要的作用。硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因家族成員十分復(fù)雜,在功能上也不相同,它們的組織特異表達(dá)部位各不相同[1,8]。已被鑒定的硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因成員主要分為4大類:NRT1(Nitrate transporter1/peptide family)、NRT2、CLC(Chloride channel)和SLAC/SLAH(Slow anion channel-associated homologues)[9]。為了高效地從土壤中吸收硝酸鹽,植物進(jìn)化出不同功能的NRT基因,這些基因的功能從控制根系發(fā)育、地下部向地上部轉(zhuǎn)運(yùn)硝酸鹽,到氮素的儲(chǔ)存和再分配等,從而形成了復(fù)雜的氮素吸收信號(hào)通路。在環(huán)境中硝酸鹽濃度低時(shí),植物從外界環(huán)境中吸收硝酸鹽主要是硝酸鹽高親和轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)在發(fā)揮作用;反之,在環(huán)境中的硝酸鹽濃度高時(shí),植物從外界環(huán)境中吸收硝酸鹽的系統(tǒng)是低親和轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng),在已鑒定NRT1基因成員中主要包括NRT1.1和NRT1.2基因;NRT1.1基因是個(gè)例外,它是硝酸鹽雙親和基因[10-11]。這些不同的NRT基因在氮吸收信號(hào)通路中發(fā)揮不同的作用,并且也影響植物的性狀。

        1.1 硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因在硝酸鹽吸收中的作用

        氮素來(lái)源于土壤,在整個(gè)生育期植物如何從土壤環(huán)境中吸取氮源是至關(guān)重要的第一步。植物硝酸鹽吸收轉(zhuǎn)運(yùn)信號(hào)通路中,被鑒定的第一個(gè)硝酸鹽雙親和基因是NRT1.1(CHL1/NPR6.3),它是植物根系細(xì)胞中硝酸鹽的受體,能開關(guān)硝酸鹽信號(hào)途徑中其他基因的表達(dá)[12]。在氮素充足的條件下,與對(duì)照植株相比,擬南芥nrt1.1突變體的硝酸鹽含量下降了45%[13];在0.2 mmol/L硝酸鹽條件下,擬南芥nrt2.1/2.2雙突變體植株的硝酸鹽吸收率下降了50%;而nrt1.1/2.1/2.2三突變體植株則比雙突變體植株的硝酸鹽吸收率下降更多,達(dá)到38%,并且三突植株比二突植株生長(zhǎng)遲緩。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,NRT1.1是植株在低氮素生長(zhǎng)條件下吸收硝酸鹽必不可少的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白[12]。NRT1.1在硝酸鹽低親和與高親和模式的轉(zhuǎn)換依賴于外界環(huán)境中硝酸鹽的濃度,在蛋白的第101位點(diǎn)蘇氨酸磷酸化和去磷酸化影響著該蛋白的功能。磷酸化會(huì)改變NRT1.1的二聚化以及構(gòu)象,這個(gè)位點(diǎn)是開閉AtNRT1.1蛋白硝酸鹽高親和與低親和模式轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵氨基酸。在外界環(huán)境氮素充足的條件下,這個(gè)位點(diǎn)不被磷酸化,采取硝酸鹽低親和模式吸收硝酸鹽;當(dāng)外界的硝酸鹽濃度變低時(shí),AtNRT1.1蛋白該位點(diǎn)的蘇氨酸被磷酸化,采用硝酸鹽高親和模式吸收硝酸鹽[14-15]。

        擬南芥NRT1.1既是硝酸鹽的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,也是側(cè)根中生長(zhǎng)素的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白;NRT1.1通過(guò)調(diào)控根系的生長(zhǎng)素分布,從而控制側(cè)根的形成和生長(zhǎng)[16-17]。在低氮素條件下,擬南芥nrt1.1突變體植株在側(cè)根積累了大量生長(zhǎng)素;NRT1.1朝遠(yuǎn)離側(cè)根頂端方向轉(zhuǎn)運(yùn)生長(zhǎng)素,導(dǎo)致側(cè)根頂端的生長(zhǎng)素含量變低,側(cè)根的生長(zhǎng)受到抑制[18-20]。擬南芥NRT1.2蛋白是硝酸鹽低親和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,它的表達(dá)與NRT1.1基因不同,是組成型表達(dá),但也是在根系中表達(dá)。在氮素充足的培養(yǎng)條件下,與對(duì)照相比,nrt1.2突變體植株的硝酸鹽含量下降[21-23]。在水稻和玉米中,與擬南芥NRT1.1為同源基因,功能與擬南芥相似,都具有吸收硝酸鹽的功能。水稻OsNRT1.1B是硝酸鹽低親和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,也在水稻的根系表達(dá),控制植株從土壤中吸收硝酸鹽[1,24-25]。OsNRT1.1B蛋白還能轉(zhuǎn)運(yùn)硒元素,把硒元素從地下部向地上部運(yùn)輸,OsNRT1.1B基因過(guò)表達(dá)的水稻植株谷粒硒元素含量比對(duì)照高1.83倍[26]。玉米中與擬南芥AtNRT1.1蛋白序列相似度達(dá)到67%的2個(gè)基因分別是ZmNRT6.4和ZmNRT6.6,只有ZmNRT6.6基因的表達(dá)響應(yīng)硝酸鹽。ZmNPF6.6也是一個(gè)硝酸鹽雙親和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,ZmNPF6.6蛋白的第104位點(diǎn)蘇氨酸的改變,影響ZmNPF6.6的硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)活性,這個(gè)位點(diǎn)對(duì)應(yīng)擬南芥NRT1.1的第101位點(diǎn);而第362位點(diǎn)的組氨酸改變,會(huì)導(dǎo)致ZmNPF6.6基因失去吸收硝酸鹽的功能。在低氮水培條件下,ZmNPF6.6蛋白在氮吸收高效玉米雜交種中的表達(dá)量比氮吸收低效雜交種高,而且在處理48 h后,氮吸收高效玉米吸收的硝酸鹽含量超過(guò)了氮吸收低效玉米含量的50%~60%。ZmNPF6.6基因是否是玉米中感知硝酸鹽的受體目前尚未確定,是否如同擬南芥AtNRT1.1基因一樣調(diào)控側(cè)根的生長(zhǎng)和其他NRTs基因的表達(dá)也尚未報(bào)道[27-29]。

        NRT2基因成員的表達(dá)受到硝酸鹽的誘導(dǎo),該家族成員中主要有NRT2.1、NRT2.2、NRT2.4和NRT2.5基因,在根系的硝酸鹽吸收中發(fā)揮作用[19,30-31]。在 低 氮 條 件 下,主 要 是NRT2.1和NRT2.2蛋白在硝酸鹽吸收中起重要的作用,它們的表達(dá)量會(huì)迅速增加;NRT2.4和NRT2.5蛋白則是在植物處于缺氮的條件下發(fā)揮功能,NRT2.4是在植株氮素極低時(shí)才發(fā)揮功能;NRT2.5是在植株處于長(zhǎng)時(shí)間氮素缺乏時(shí),其表達(dá)量才開始上升,成為氮高效吸收的主要基因[9,32-33]。通過(guò)細(xì)胞定位和免疫印跡發(fā)現(xiàn),擬南芥NRT2.1基因在根的細(xì)胞壁表達(dá)[34]。與對(duì)照相比,擬南芥nrt2.1的突變體植株硝酸鹽吸收效率降低了75%,突變體的側(cè)根長(zhǎng)度反而比對(duì)照長(zhǎng);在長(zhǎng)期低氮條件下,突變體植株生長(zhǎng)嚴(yán)重受到影響。NRT2.1蛋白既在低氮環(huán)境中吸收硝酸鹽,又協(xié)調(diào)了根系的發(fā)育[33,35-36]。擬南芥NRT2.2基因的表達(dá)也是受到硝酸鹽的誘導(dǎo),但是表達(dá)量不高,主要在植物的根系部位表達(dá);nrt2.2突變體植株的硝酸鹽含量也是比對(duì)照低,影響植物從外界環(huán)境中吸收硝酸鹽[37-38]。擬南芥AtNRT2.4基因的蛋白序列與NRT2.1和NRT2.2的蛋白序列具有很高的同源性。在缺氮條件下,AtNRT2.4基因在NRT2成員中的表達(dá)量是最高的;但是氮充足條件下,會(huì)抑制它的表達(dá)[39]。在長(zhǎng)時(shí)間缺氮條件下,擬南芥AtNRT2.5基因的表達(dá)量迅速增加,它的表達(dá)量比NRT2.1和NRT2.2基因高。在nrt2.1突變體植株中過(guò)表達(dá)NRT2.5基因,過(guò)表達(dá)植株的硝酸鹽吸收量比對(duì)照顯著提高。在nrt2.5突變體植株中,硝酸鹽含量明顯比對(duì)照低,只達(dá)到對(duì)照的63%[40-41]。NRT2.5基因在不同的植物中表達(dá)部位略有不同。在擬南芥、玉米和小麥中都在根和葉中表達(dá),在擬南芥和小麥的種子中也有表達(dá),在玉米雌穗、穗軸和苞葉中也有表達(dá)。玉米ZmNRT2.5基因的表達(dá)量也受到低氮的誘導(dǎo),主要是在植株的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)期表達(dá),在生殖生長(zhǎng)時(shí)期的根中反而不表達(dá),但是在苞葉中高表達(dá),苞葉對(duì)籽粒灌漿期的氮素分布發(fā)揮著關(guān)鍵作用[32]。

        目前,對(duì)NRT2基因的蛋白修飾研究報(bào)道不是很多。通過(guò)對(duì)NRT2.1的磷酸化研究發(fā)現(xiàn),NRT2.1存在3個(gè)磷酸化位點(diǎn),其中一個(gè)位點(diǎn)在其N端第28個(gè)絲氨酸,植株在低氮條件下該位點(diǎn)被磷酸化;反之,在補(bǔ)充了氮的培養(yǎng)條件下,該位點(diǎn)迅速去磷酸化,可能是通過(guò)該位點(diǎn)的去磷酸化調(diào)控NRT2.1在低氮和高氮條件下硝酸鹽的吸收活性。然而,第501位點(diǎn)蘇氨酸的磷酸化,只是影響了NRT2.1硝酸鹽的轉(zhuǎn)運(yùn)活性[33,42-43]。通過(guò)爪蟾卵母細(xì)胞和酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),NRT2.1和NAR2.1蛋白互作后,才能夠形成吸收硝酸鹽的轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)。擬南芥NRT2.1基因的表達(dá)量在nar2.1突變體中仍然很高,但是在細(xì)胞膜上看不見NRT2.1;NAR2.1與NRT2.1互作激活了NRT2.1的功能,NAR2.1蛋白對(duì)于NRT2.1蛋白的穩(wěn)定具有極其重要的作用[42,44-47]。然而,在其他植物中也會(huì)有例外。水稻的OsNRT2.3b和OsNRT2.4蛋白不用與OsNAR2.1互作就能發(fā)揮吸收氮素的功能。OsNRT2.3b基因主要在韌皮部表達(dá),它的功能是通過(guò)對(duì)pH值的變化來(lái)感知,從而開關(guān)硝酸鹽的轉(zhuǎn)運(yùn)活性;其在水稻中過(guò)表達(dá),能提高植株的pH緩沖能力和增加氮、鐵和磷的吸收,提高了植株40%的氮素利用效率[48-49]。

        玉米ZmNRT2.1和ZmNRT2.2基因的蛋白序列相似性達(dá)到98%,它們?cè)诟械谋磉_(dá)受到硝酸鹽的誘導(dǎo);ZmNRT2.1基因在根中特異表達(dá),ZmNRT2.2基因則在皮層和側(cè)根的原基表達(dá)[50-51]。通過(guò)爪蟾細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,ZmNRT2.1蛋白是硝酸鹽高親和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,它的功能是從外界環(huán)境吸收硝酸鹽,ZmNRT2.1也是需要和NAR2.1互作才能發(fā)揮作用[52-54]。玉米ZmNRT2.1基因在煙草中過(guò)表達(dá),在高氮素條件下,轉(zhuǎn)基因煙草比對(duì)照的根系生長(zhǎng)旺盛,而且生物量也比對(duì)照高,但轉(zhuǎn)基因煙草與對(duì)照植株的硝酸鹽含量沒有明顯的差異[55]。水稻OsNRT2.1基因在水稻中過(guò)表達(dá)能增強(qiáng)植株的根長(zhǎng),硝酸鹽含量比對(duì)照植株高24.3%[55-56]。

        植物既有對(duì)硝酸鹽的吸收,也存在對(duì)硝酸鹽外排的現(xiàn)象,但是外排的生理機(jī)制尚不清楚[19]。在沒有外界脅迫壓力下,植物硝酸鹽外排量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于吸收量。在脅迫條件下,擬南芥NAXT1蛋白可能是通過(guò)對(duì)硝酸鹽的外排,從而能夠調(diào)控細(xì)胞的滲透壓[57]。植株生長(zhǎng)在氮素充足的土壤中,根系會(huì)很發(fā)達(dá),側(cè)根數(shù)量很多。植株在氮素含量變低的情況下,根系會(huì)迅速往土壤深層生長(zhǎng),促進(jìn)根的伸長(zhǎng)去吸收深層土壤中的氮素。土壤環(huán)境中的氮素量對(duì)植物根系的生長(zhǎng)存在調(diào)節(jié),適量的氮素可刺激植株側(cè)根的生長(zhǎng)。硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的信號(hào)通路與控制根系的發(fā)育是如何相互交叉在一起的,還需要進(jìn)一步的研究[18,58-59]。

        1.2 硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因在硝酸鹽運(yùn)輸中的作用

        植物從土壤環(huán)境中獲取到氮源,需要把氮源運(yùn)輸?shù)教囟ńM織,這離不開對(duì)硝酸鹽的運(yùn)輸。因此,植物對(duì)氮素的運(yùn)輸是制約氮素利用效率提高的重要環(huán)節(jié)之一。植株從外界環(huán)境吸收的硝酸鹽需要從根部運(yùn)輸?shù)街仓甑牟煌课?,維管束組織在植株地上部和地下部的物質(zhì)運(yùn)輸中具有舉足輕重的地位[60-61]。NRT1.5基因在根系的中柱鞘細(xì)胞表達(dá),它的功能是將硝酸鹽從中柱細(xì)胞裝載入木質(zhì)部,負(fù)責(zé)把硝酸鹽從地下部向地上部運(yùn)輸。與對(duì)照相比,nrt1.5突變體在根系積累的硝酸鹽量比對(duì)照植株高。在硝酸鹽長(zhǎng)距離運(yùn)輸途徑中,NRT1.5基因不是植物中唯一的硝酸鹽運(yùn)輸途徑,還存在其他NRT基因或別的基因控制硝酸鹽的運(yùn)輸[62-63]。盡管NRT1.5和NRT1.8基因在進(jìn)化關(guān)系上非常近,然而二者在根和莖部位的表達(dá)量卻恰恰相反,NRT1.5基因在根中的表達(dá)量比莖部位高,NRT1.8基因則正好相反,它們?cè)谙跛猁}信號(hào)途徑中的功能也是相反的。NRT1.8基因還可以在木質(zhì)部的薄壁細(xì)胞中特異表達(dá)。硝酸鹽經(jīng)過(guò)長(zhǎng)距離運(yùn)輸后,需要分配到不同的組織部位中進(jìn)行同化,NRT1.8基因的功能是卸載木質(zhì)部中的硝酸鹽[64]。然而,NRT1.5控制硝酸鹽從地下部組織向地上部組織運(yùn)輸,在根系需要大量硝酸鹽時(shí),硝酸鹽也能把儲(chǔ)存在葉片中的硝酸鹽向地下部組織運(yùn)輸[11]。NRT1.9基因在植株根的韌皮部伴生細(xì)胞中特異表達(dá),負(fù)責(zé)將硝酸鹽裝載入韌皮部向下運(yùn)輸。擬南芥nrt1.9突變體植株的地上部積累了大量的硝酸鹽,NRT1.9蛋白在硝酸鹽從地下部向地上部的運(yùn)輸過(guò)程中起到負(fù)調(diào)控作用,它可能是作為一個(gè)安全閥,調(diào)控地上部和地下部硝酸鹽含量的分配。如果增加植株地上部對(duì)硝酸鹽的同化能力和葉片對(duì)多余硝酸鹽儲(chǔ)存的能力,能否促使植物從土壤中吸收大量的硝酸鹽,特別是在籽粒形成時(shí)期,大量?jī)?chǔ)存的氮素被再利用,并通過(guò)代謝過(guò)程成為籽粒的成分?目前,關(guān)于植物根系如何將硝酸鹽從地下部向地上部轉(zhuǎn)運(yùn)的分子調(diào)控水平研究報(bào)道不多[65]。

        與擬南芥AtNRT1.8蛋白同源的水稻OsNPF7.2也是硝酸鹽低親和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,它在根的厚壁組織、皮層和葉脈中表達(dá)。它的功能可能與擬南芥的基因功能相似,負(fù)責(zé)硝酸鹽的裝載和卸載[51,66]。水稻OsNPF2.4是一個(gè)在根系部位表達(dá)的硝酸鹽雙親和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在硝酸鹽吸收中起到重要的作用,也控制硝酸鹽的長(zhǎng)距離轉(zhuǎn)運(yùn)和再分配;與對(duì)照相比,水稻osnrt2.4突變體植株的側(cè)根數(shù)量會(huì)減少、長(zhǎng)度也會(huì)變短,硝酸鹽吸收量也會(huì)減少,表型和功能與擬南芥NRT1.1基因相似[67-68]。水稻OsNRT2.3a是擬南芥AtNRT2.5的同源基因,OsNRT2.3a蛋白需要和OsNAR2.1互作才能調(diào)控對(duì)硝酸鹽的吸收,也控制硝酸鹽從地下部向地上部的運(yùn)輸;在水稻中過(guò)表達(dá)OsNRT2.3a基因,不僅能增強(qiáng)大田中水稻在高氮素或者低氮素條件下對(duì)硝酸鹽吸收的能力,還能提高水稻的產(chǎn)量和氮素利用效率[32,69]。

        1.3 硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因在硝酸鹽儲(chǔ)存中的作用

        植物在不同生長(zhǎng)階段對(duì)氮素的需求量不同,硝酸鹽的吸收和同化存在一個(gè)動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)。在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中,植物建立了體內(nèi)多余硝酸鹽的儲(chǔ)存機(jī)制,存儲(chǔ)的硝酸鹽則可作為后期大量需求氮素的主要來(lái)源之一。植物吸收的硝酸鹽在被同化利用后,大約99%剩余的硝酸鹽被儲(chǔ)存在葉片的液泡中。擬南芥AtNRT1.4基因在葉片的葉柄部位和主脈處特異表達(dá),不受硝酸鹽的誘導(dǎo);在葉柄和葉片主脈處的硝酸鹽含量很高,且硝酸鹽還原酶活性低。nrt1.4突變體植株的葉柄和葉片主脈處的硝酸鹽含量只有對(duì)照的45%~50%。NRT1.4基因也影響了葉片的生長(zhǎng),突變體比對(duì)照植株的葉片寬;葉片負(fù)責(zé)硝酸鹽儲(chǔ)存的基因不止一個(gè),但只有AtNRT1.4基因已被鑒定[70]??赡苁且?yàn)镹RT基因數(shù)量太多,同一個(gè)基因在不同的部位發(fā)揮的作用會(huì)有所不同,且同一功能又同時(shí)存在多個(gè)NRT基因發(fā)揮同樣的作用,這使控制硝酸鹽儲(chǔ)存的基因鑒定及其困難。

        1.4 硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因在籽粒中的作用

        植物在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段體內(nèi)儲(chǔ)存了大量的硝酸鹽,這些硝酸鹽是植株后期生殖生長(zhǎng)需要的氮源。這部分氮素的再利用是提高氮素利用效率和提高產(chǎn)量至關(guān)重要的一步。在籽粒形成過(guò)程中,特別是小麥和玉米葉片中氮素被再利用占據(jù)了籽粒中氮素的50%~90%[71]。擬南芥AtNRT1.7基因在葉片的葉脈韌皮部特異表達(dá),它的功能是負(fù)責(zé)將老葉片中的硝酸鹽裝載入韌皮部,并運(yùn)輸?shù)叫律~片中,調(diào)控氮素從源到庫(kù)的再利用。擬南芥AtNRT1.6基因在生殖生長(zhǎng)期的長(zhǎng)角果中特異表達(dá),在植株授粉后,AtNRT1.6基因的表達(dá)量迅速增加,其功能是參與硝酸鹽向種子的運(yùn)輸。nrt1.6突變體種子的氮含量也比對(duì)照低,突變體也出現(xiàn)胚發(fā)育不正常的現(xiàn)象,達(dá)到40%,嚴(yán)重影響結(jié)實(shí)率。在nrt1.6突變體植株種子形成過(guò)程中的1~4個(gè)細(xì)胞發(fā)育階段就會(huì)出現(xiàn)發(fā)育不正常的胚。NRT2.7基因是在種子形成的后期表達(dá),特別是在種子的成熟后期;NRT2.7基因有助于種子胚的成熟。在nrt2.7突變體植株的胚形成過(guò)程中,早期的胚發(fā)育正常,只是在后期出現(xiàn)異常。NRT1.6和NRT2.7在種子的形成過(guò)程中,在不同的階段和部位發(fā)揮功能,確保種子中氮素的運(yùn)輸和儲(chǔ)存。擬南芥nrt2.7的突變體種子的硝酸鹽含量比對(duì)照低,但是氨基酸和淀粉等物質(zhì)的含量不受影響。AtNRT2.7基因在后期胚的成熟過(guò)程中是否還與硝酸鹽的轉(zhuǎn)運(yùn)有關(guān),尚不清楚[72-74]。

        2 硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)基因在植物育種中的利用

        氮素從根系運(yùn)輸?shù)饺~片中儲(chǔ)存,在植株后期大量需求氮素時(shí)作為主要氮源之一[21]。硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的特定部位表達(dá)模式?jīng)Q定了其在植株體內(nèi)的功能。AtNRT1.7基因的功能是負(fù)責(zé)把儲(chǔ)存的硝酸鹽裝載入韌皮部,并轉(zhuǎn)運(yùn)到新生的葉片中;通過(guò)基因克隆等技術(shù)選擇NRT1.1基因的第2~5個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域和NRT1.2基因的N端第1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)氨基酸序列及后6個(gè)膜結(jié)構(gòu)氨基酸序列組建一個(gè)全新的NRT(NC4N)基因,再利用NRT1.7基因的啟動(dòng)子使NC4N基因在特異部位表達(dá);利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)把NC4N基因分別轉(zhuǎn)入擬南芥、煙草和水稻中,對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的產(chǎn)量測(cè)定發(fā)現(xiàn),NC4N基因提高了擬南芥、煙草和水稻的生物量,收獲的種子數(shù)量也比對(duì)照高。在這3種植株中老葉片的含氮量比對(duì)照低,不僅在植株的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)時(shí)期,而且在生殖生長(zhǎng)時(shí)期也促進(jìn)了植株中氮素的再轉(zhuǎn)化。這證實(shí)了提高植株氮素從源到庫(kù)的轉(zhuǎn)運(yùn),可以提高植株的氮素利用效率[75]。

        在多年的進(jìn)化和馴化過(guò)程中,植物基因出現(xiàn)了自然變異和選擇壓力的變異,這些位點(diǎn)的變異可以微調(diào)這些基因功能,最終表現(xiàn)在這些基因如何參與具體的生物過(guò)程[76]。Hu等[24]通過(guò)分析秈、粳稻的OsNRT1.1B基因序列多態(tài)性,發(fā)現(xiàn)兩者的氮吸收效率差異是因?yàn)镺sNRT1.1B基因的一個(gè)氨基酸的變異所導(dǎo)致,通過(guò)基因編輯技術(shù)改變其位點(diǎn),則能提高粳稻的氮素利用效率。在不影響植株正常生長(zhǎng)的前提下,通過(guò)對(duì)氮素利用途徑中多個(gè)關(guān)鍵基因的過(guò)表達(dá)和多個(gè)基因組合共表達(dá),有利于提高產(chǎn)量[77]。NRT2需要與NAR2.1互作才能發(fā)揮氮素吸收效率,同時(shí)在水稻中過(guò)表達(dá)OsNAR2.1基因和OsNRT2.3a基因,田間測(cè)產(chǎn)表明過(guò)表達(dá)基因植株比對(duì)照增加了24.6%的產(chǎn)量;單獨(dú)過(guò)表達(dá)OsNAR2.1基因,只增加了14.1%的產(chǎn)量。Liu等[78]研究發(fā)現(xiàn),在少施氮肥條件下,與對(duì)照植株相比較,OsTCP19基因能夠提高水稻20%~30%的氮肥利用率。然而,隨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的氮肥施用,OsTCP19基因在大量水稻品種中逐漸消失。OsTCP19蛋白既能抑制DLT基因的表達(dá),也與OsABI4和OsULT1等蛋白互作,參與到ABA、發(fā)育信號(hào)等多條信號(hào)通路;在水稻的氮素利用通路中,也影響了相關(guān)的NRT基因的功能發(fā)揮。因此,通過(guò)研究與NRT互作的關(guān)鍵基因,也可能挖掘到影響農(nóng)藝性狀至關(guān)重要的基因。

        3 展望

        植物對(duì)氮素的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存、同化和再利用是多個(gè)基因和環(huán)境因子共同作用的結(jié)果。硝酸鹽被根系吸收、硝酸鹽在木質(zhì)部和韌皮部裝載運(yùn)輸和在液泡中儲(chǔ)存等整個(gè)生物過(guò)程中,不同類型的硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白復(fù)雜催化結(jié)構(gòu)的差異,導(dǎo)致了吸收硝酸鹽能力和功能等方面的差異[79-80]。硝酸鹽吸收存在多個(gè)調(diào)控模塊,目前還沒有完全解析吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)的信號(hào)通路。通過(guò)對(duì)植物氮素利用途徑的研究,了解這些組成部分是如何相互作用并成為一個(gè)有機(jī)整體而發(fā)揮作用,有利于找到制約植物氮素最大化利用的關(guān)鍵點(diǎn)[81]。隨著對(duì)硝酸鹽的運(yùn)輸和再利用等途徑中基因的挖掘和功能鑒定,可以利用基因編輯等技術(shù)對(duì)關(guān)鍵基因進(jìn)行編輯,通過(guò)對(duì)關(guān)鍵堿基的替換,改變基因的表達(dá);從而改變改良品種關(guān)鍵基因的功能,提高植株對(duì)氮素的運(yùn)輸效率和數(shù)量,實(shí)現(xiàn)植物氮素利用效率的提高[10]。例如,水稻OsNRT1.1B基因在粳、秈稻間由于單核苷酸的多態(tài)性而導(dǎo)致氮素利用效率的不同,因此可以通過(guò)基因編輯技術(shù)進(jìn)行單堿基的改變[81]。目前,水稻轉(zhuǎn)基因技術(shù)和基因編輯技術(shù)已經(jīng)很成熟,可以通過(guò)單堿基的改變,關(guān)閉限制氮素吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)、存儲(chǔ)及同化利用相關(guān)基因的表達(dá),從而改良水稻推廣品種的氮吸收效率,達(dá)到提高水稻產(chǎn)量的目標(biāo)。

        NRT基因成員中在吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)硝酸鹽的效率上存在差異,導(dǎo)致差異的原因是關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域氨基酸殘基的影響。通過(guò)對(duì)NRT基因轉(zhuǎn)運(yùn)結(jié)構(gòu)域的改造,可以提高其轉(zhuǎn)運(yùn)硝酸鹽的效率。對(duì)NRT1.7基因的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)域位點(diǎn)進(jìn)行改造,提高了NRT1.7基因?qū)Φ貜睦先~片向籽粒的轉(zhuǎn)運(yùn)效率,提高了植株的產(chǎn)量[75]。NRT基因也與其他基因互作,從而參與到其他信號(hào)通路中。NRT1.1/NRT2.1基因的表達(dá)量提高會(huì)抑制植物中光響應(yīng)調(diào)節(jié)因子FT和CO基因的表達(dá),從而影響植株的開花時(shí)間。利用基因編輯技術(shù)在NRT1.1/NRT2.1基因的啟動(dòng)子序列中插入一段序列,提高這兩個(gè)基因的表達(dá)量,從而提高植株對(duì)氮素的吸收和改變開花時(shí)間[82]。

        部分NRT基因的功能已經(jīng)得到解析,但是其在某些組織中表達(dá)的生物學(xué)意義尚不清楚。例如:NRT1.1基因在植株的葉柄特異表達(dá),其功能未能解釋。還需要通過(guò)研究該基因在葉柄處互作的蛋白種類,從而推測(cè)其功能。而且對(duì)植株中氮素的儲(chǔ)存研究尚未深入,除了已知的AtNRT1.4基因控制氮素的儲(chǔ)存,其他影響氮素儲(chǔ)存的基因還沒鑒定出來(lái);需要通過(guò)轉(zhuǎn)錄組學(xué)和代謝組學(xué)等組學(xué)的結(jié)合,集中研究硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白多基因突變體,將有助于鑒定NRT基因在氮素儲(chǔ)存中發(fā)揮的作用。利用酵母單雜交技術(shù)挖掘調(diào)控NRT基因表達(dá)的上游基因和NRT基因啟動(dòng)子中的關(guān)鍵元件,最終增加NRT基因的表達(dá)量,提高植株對(duì)氮素的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)效率。未來(lái)的研究可以通過(guò)整合信號(hào)途徑中多個(gè)NRT關(guān)鍵基因和調(diào)控因子,達(dá)到操縱硝酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體的活性,增強(qiáng)植株對(duì)硝酸鹽吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)等方面的能力。因此,采用多基因表達(dá)的模式,利用過(guò)表達(dá)根系吸收氮素基因、組織特異表達(dá)啟動(dòng)子控制籽粒灌漿時(shí)期的NRT基因和其他影響氮素在籽粒積累的基因共同組合成基因簇,提高植物的氮素利用效率[18];再結(jié)合植物不同生長(zhǎng)時(shí)期的氮肥施用量和田間管理,在顯著減少氮肥施用量的前提下,確保穩(wěn)產(chǎn)或增加產(chǎn)量,來(lái)減輕氮肥對(duì)環(huán)境的污染。

        猜你喜歡
        硝酸鹽突變體擬南芥
        擬南芥:活得粗糙,才讓我有了上太空的資格
        硝酸鹽并不致癌還或有益處
        中老年保健(2022年3期)2022-11-21 09:40:36
        尿黑酸對(duì)擬南芥酪氨酸降解缺陷突變體sscd1的影響
        兩種LED光源作為擬南芥生長(zhǎng)光源的應(yīng)用探究
        CLIC1及其點(diǎn)突變體與Sedlin蛋白的共定位研究
        擬南芥干旱敏感突變體篩選及其干旱脅迫響應(yīng)機(jī)制探究
        家畜硝酸鹽和亞硝酸鹽中毒的診斷、鑒別和防治
        Survivin D53A突變體對(duì)宮頸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響
        短期水分脅迫影響巴旦杏植株對(duì)硝酸鹽的吸收
        磷酸三酯酶突變體H23A的真核表達(dá)及性質(zhì)表征
        欧美日韩高清一本大道免费| 中文字幕国产精品一二三四五区| 国产午夜精品av一区二区麻豆| 老熟妇乱子伦av| 巨熟乳波霸若妻在线播放| 日韩欧美第一页| 最新亚洲av日韩av二区一区| 极品少妇一区二区三区四区视频 | 少妇被躁到高潮和人狍大战| 4455永久免费视频| 国产精品久久久久影院嫩草| 国产91对白在线观看| 日韩偷拍视频一区二区三区| 久久人妻中文字幕精品一区二区| 我和隔壁的少妇人妻hd| 国产成人无码一区二区在线播放| 色窝窝免费播放视频在线| 国产精品成人午夜久久| 在线a人片免费观看高清| 国产亚洲精品一区二区在线播放| 日韩精品久久午夜夜伦鲁鲁| 一二三四区中文字幕在线| 亚洲av无码成人专区片在线观看| 国产高清吃奶成免费视频网站| 情色视频在线观看一区二区三区 | 青草内射中出高潮| 老湿机香蕉久久久久久| 一级呦女专区毛片| 亚洲第一女人天堂av| 少妇又色又爽又高潮在线看| 天天爽夜夜爱| 中文字幕一区二区三区乱码不卡| 日韩av在线不卡一区二区三区 | 国产国产裸模裸模私拍视频| 国产精品久久久久久久成人午夜| 国产精品福利久久香蕉中文| 宅男视频一区二区三区在线观看 | 青青草高中生在线视频| 无码gogo大胆啪啪艺术| 成年男女免费视频网站| 免费视频成人 国产精品网站|