張 穎 孫小勇 張愛琳 田 楓

(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部，北京 100191)

目前實驗性大鼠雙側(cè)卵巢摘除造模術(shù)，廣泛應(yīng)用于藥理藥效等研究，如摘除雌性大鼠的卵巢以減輕性激素對某些實驗的影響[1]。普通卵巢摘除法是采用眼科鑷將卵巢取出腹腔后子宮角與卵巢雙側(cè)結(jié)扎，再利用眼科剪進行切除，最后用青霉素肌肉注射。該方法有少量血液滲出，易發(fā)生腹腔內(nèi)感染。為提高手術(shù)成功率，經(jīng)過多次摸索，本實驗自制了專用于探索及固定卵巢的工具，改雙側(cè)結(jié)扎為單側(cè)結(jié)扎，青霉素肌肉注射改為腹腔注射。對比實驗顯示，新方法更簡單易操作，手術(shù)成功率更高。

1 材料和方法

1.1 實驗動物及分組

清潔級雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，體質(zhì)量(170.0±20.0)g【購自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部，合格證號：SCXK(京)2016-0010】。飼養(yǎng)于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物科學(xué)部的屏障環(huán)境中【合格證號：SYXK(京)2016-0041】。飼喂全價清潔級大小鼠繁殖飼料，由北京科澳協(xié)力飼料有限公司生產(chǎn)【合格證號：SYXK(京)2014-0010】。

隨機分為兩組，每組20只。對照組平均體質(zhì)量為(177.2±20.0)g,采用普通方法除去卵巢；實驗組平均體質(zhì)量為(176.6±20.0)g，采用新方法除去卵巢。兩組體質(zhì)量差異不顯著(P>0.05)。

1.2 實驗材料

1 mL注射器(BD舒銳U40)、青霉素注射粉劑(中牧獸藥1g 160萬單位)、氯化鈉(齊魯藥業(yè)100 mL:0.9 g)、瑞氏-姬姆薩染盒(Solarbio)、自制小鉤見圖1。

注：此小鉤用銅絲彎成，上方為手握圓環(huán)，下方為小彎鉤Note:This small hook is made of copper wire, with ahand-held ring at the top and a small curved hook below圖1 自制小鉤Fig.1 homemade hook

1.3 實驗方法

采用兩種手術(shù)方法切除大鼠的卵巢。對照組：術(shù)前大鼠禁食，手術(shù)時先從大鼠背部用眼科鑷取出卵巢，對子宮角與卵巢雙側(cè)結(jié)扎后用眼科剪剪除卵巢，最后用青霉素肌肉注射，手術(shù)過程見圖2。實驗組方法是：術(shù)前大鼠不禁食，手術(shù)時先從大鼠背部用自制小鉤取出卵巢，單側(cè)結(jié)扎子宮角后用燒燙的眼科剪切除卵巢，最后用青霉素腹腔注射，手術(shù)過程見圖3。

圖2 對照組大鼠雙側(cè)卵巢背部切除術(shù)過程示意圖Fig.2 Schematic diagram of bilateral experimental ovary dorsal resection of the rats in control group

圖3 實驗組大鼠雙側(cè)卵巢背部切除術(shù)過程示意圖Fig.3 Schematic diagram of bilateral ovary dorsal resection in experimental rats

1.4 實驗指標(biāo)

1.4.1手術(shù)耗時:從備皮開始計時，直至傷口縫合結(jié)束。

1.4.2術(shù)后實驗動物的存活率：

1.4.3術(shù)后實驗動物的體質(zhì)量變化：術(shù)后第7天、第14天對存活的實驗動物稱重。

1.4.4陰道涂片觀察：從術(shù)后第10天起，每組隨機選5只大鼠進行涂片。每天上午對各組大鼠進行陰道涂片觀察。單手大鼠保定，將排泄物清理干凈，用沾有0.9%氯化鈉溶液的棉簽輕緩的插入大鼠的陰道，順時針轉(zhuǎn)動，然后將棉簽抽出，進行瑞氏-姬姆薩染色，顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 手術(shù)過程

如圖4所示，用眼科鑷和自制小鉤都能順利取出卵巢，對照組創(chuàng)口面積更大，出血更多，自制小鉤操作更方便。

圖4 兩種方法取出卵巢的對比圖Fig.4 Comparison of two methods to remove the ovary

2.2 檢測指標(biāo)

兩組大鼠均無死亡，傷口沒有裂開，沒有感染。但實驗組傷口分泌物更少些(表1)。

新手術(shù)方法所需時間為(8.0±1.2 )min,原方法所需時間為(10.3±1.6 )min。與對照組相比，實驗組手術(shù)時間明顯減少(p<0.05)。

從表1可以看出，術(shù)后兩組大鼠體質(zhì)量都有增加，但實驗組大鼠體質(zhì)量一直高于對照組(P<0.05)。

表1 兩種手術(shù)方法的檢測指標(biāo)比較圖Table 1 Comparison of detection indicators for the two surgical methods

3 結(jié)論

實驗大鼠雙側(cè)卵巢摘除手術(shù)在有關(guān)研究中應(yīng)用普遍，因此有必要對其手術(shù)方法進行改進。在本次實驗中，兩種方法都能達到目標(biāo)。但新方法手術(shù)時間縮短，術(shù)后動物恢復(fù)的更快更好。新方法的手術(shù)時間縮短原因在于：(1)采用了自制小鉤，縮短了尋找、取出卵巢的時間；(2)創(chuàng)口更小，有利于減少切開和縫合的時間；(3)手術(shù)過程中單側(cè)結(jié)扎子宮角，不用剝離周圍脂肪組織。術(shù)后動物恢復(fù)的更快更好，其原因在于：(1)實驗組手術(shù)前實驗動物不禁食；(2)實驗組手術(shù)創(chuàng)口小，出血少；(3)術(shù)后腹腔注射高劑量青霉素，對動物的保護效果更好。

本次實驗結(jié)果表明，實驗大鼠雙側(cè)卵巢摘除手術(shù)可采用自制小鉤將卵巢從腹腔內(nèi)取出后單側(cè)結(jié)扎子宮角，再用眼科剪剪除卵巢，最后用青霉素腹腔注射。此方法可以減小創(chuàng)口面積和出血量，加快大鼠術(shù)后的恢復(fù)。