唐艷龍，王麗娜，戴慧玲，何久梅，康 奎，張彥龍，曹亮明*

（1.遵義師范學(xué)院生物與農(nóng)業(yè)科技學(xué)院/貴州省赤水河流域動(dòng)物資源保護(hù)與應(yīng)用研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遵義 563002；2.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院森林生態(tài)環(huán)境與自然保護(hù)研究所/國(guó)家林業(yè)和草原局森林保護(hù)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100091）

松褐天牛腫腿蜂Sclerodermus alternatusi與管氏腫腿蜂S.guani、川硬皮腫腿蜂S.sichuanensis和白蠟吉丁腫腿蜂S.pupariae同屬膜翅目Hymenoptera腫腿蜂科Bethylidae硬皮腫腿蜂屬Sclerodermus[1]，是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)于云南寄生于松褐天牛Monochamusalternatus幼蟲(chóng)的體外寄生蜂，其雌蜂個(gè)體明顯大于另外3種腫腿蜂，其對(duì)松褐天牛和光肩星天牛Anoplophoraglabripennis等中大型天牛的幼蟲(chóng)寄生率較高，此外還具有后代雌性比高，雌蜂壽命長(zhǎng)，繁殖、擴(kuò)散和搜索寄主能力強(qiáng)等特點(diǎn)，是防治中大型天牛良好的天敵昆蟲(chóng)[2-4]。

釋放腫腿蜂防治松褐天牛，存在一個(gè)最佳釋放時(shí)間的問(wèn)題，在廣州、江蘇、福建和江西等省最佳釋放時(shí)間在 6—7月[5,6]。有關(guān)松褐天牛腫腿蜂的最佳釋放時(shí)間報(bào)道較少，張彥龍等[4]報(bào)道松褐天牛腫腿蜂對(duì)松褐天牛低齡幼蟲(chóng)的寄生率和致死率更高，因此推斷其最佳釋放時(shí)間應(yīng)與管氏腫腿蜂一致。這就需要在較短時(shí)間內(nèi)集中大量釋放松褐天牛腫腿蜂以保證最佳效果，因此在釋放之前大量繁殖和儲(chǔ)存松褐天牛腫腿蜂是極其重要的。

儲(chǔ)存腫腿蜂的研究主要包括溫度和時(shí)長(zhǎng)，姚圣忠等[7]報(bào)道儲(chǔ)存管氏腫腿蜂的適宜溫度為5～10 ℃，而王新亮[8]研究了低溫下儲(chǔ)存管氏腫腿蜂的時(shí)長(zhǎng)，報(bào)道指出不同寄主繁育的管氏腫腿蜂耐儲(chǔ)存能力不同，其中雙條杉天牛Semanotus bifasciatus幼蟲(chóng)繁育的管氏腫腿蜂最長(zhǎng)不宜超過(guò)70 d。對(duì)松褐天牛腫腿蜂適宜的儲(chǔ)存溫度以及低溫下最佳儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)均未見(jiàn)報(bào)道，因此，本試驗(yàn)選擇在10 ℃低溫下，以麻天牛Thyestilla gebleri幼蟲(chóng)為寄主，研究在不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下，松褐天牛腫腿蜂母蜂的死亡情況及對(duì)其子代的發(fā)育歷期和數(shù)量的影響，以期明確 10 ℃下松褐天牛腫腿蜂的最佳儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)，為松褐天牛腫腿蜂的繁育和應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與條件

本次試驗(yàn)替代寄主麻天牛購(gòu)買(mǎi)自天津市花鳥(niǎo)市場(chǎng)；寄生蜂為松褐天牛腫腿蜂，由國(guó)家林業(yè)和草原局森林保護(hù)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。試驗(yàn)時(shí)用天平稱(chēng)重，用智能培養(yǎng)箱控制溫濕度條件，用體視鏡觀察發(fā)育情況。

1.2 低溫儲(chǔ)存下松褐天牛腫腿蜂的死亡率

選取松褐天牛腫腿蜂50管（雌蜂已全部羽化且在1 d內(nèi)），計(jì)數(shù)每管內(nèi)的雌蜂和雄蜂總數(shù)，編號(hào)后置于10 ℃氣候箱中（相對(duì)濕度為 50%～70%，通過(guò)人工氣候箱調(diào)節(jié)），不飼喂食物。之后，每15 d 計(jì)數(shù)一次管內(nèi)雌蜂和雄蜂的死亡個(gè)數(shù)，直到管內(nèi)雌蜂和雄蜂全部死亡，計(jì)算累積死亡率。

1.3 儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)對(duì)松褐天牛腫腿蜂子代發(fā)育歷期和數(shù)量的影響

用天平稱(chēng)取麻天牛老熟幼蟲(chóng)，選擇體質(zhì)量相近（0.200～0.250 g）的幼蟲(chóng)做寄主。將選取的幼蟲(chóng)裝進(jìn)長(zhǎng)50 mm，直徑10 mm的有底無(wú)蓋玻璃指形管內(nèi)，每管1頭，每組30管，編號(hào)后備用。

根據(jù)1.2試驗(yàn)結(jié)果，將松褐天牛腫腿蜂雌蜂放置在10 ℃低溫下分別儲(chǔ)存0 d、30 d、60 d、90 d、120 d和150 d，在儲(chǔ)存過(guò)的腫腿蜂中選取健康、活力強(qiáng)、已交配的無(wú)翅雌蜂，按照蜂蟲(chóng)比1∶1的比例，接入上述玻璃管中，用醫(yī)用脫脂棉堵緊管口，放入智能培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察（溫度27 ℃，相對(duì)濕度50%～70%，光周期為短光照，即8L∶16D，光照強(qiáng)度3000 lx）。

接種后每天觀察2次，記錄雌蜂開(kāi)始產(chǎn)卵的時(shí)間（母蜂產(chǎn)第一粒卵的時(shí)間），卵孵化時(shí)間（第一粒卵孵化的時(shí)間），幼蟲(chóng)結(jié)繭時(shí)間（第一個(gè)老熟幼蟲(chóng)結(jié)繭的時(shí)間），羽化時(shí)間（第一個(gè)蛹羽化的時(shí)間）。并統(tǒng)計(jì)計(jì)算出產(chǎn)卵前期（接種到產(chǎn)卵的時(shí)間），卵歷期（產(chǎn)卵時(shí)間到孵化時(shí)間），幼蟲(chóng)歷期（孵化時(shí)間到老熟幼蟲(chóng)的時(shí)間），蛹?xì)v期（結(jié)繭到羽化的時(shí)間）以及發(fā)育歷期（卵至成蟲(chóng)的發(fā)育時(shí)間）。待子代全部羽化后，計(jì)數(shù)子代雄蜂數(shù)量、子代有翅雌蜂數(shù)量、子代無(wú)翅雌蜂數(shù)量，計(jì)算雌蜂總數(shù)、子代總數(shù)和子代性比（子代雄蜂總數(shù)/子代總數(shù)×100%）。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

本次試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2010、SPSS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和單因素方差分析，利用LSD法多重比較各處理間的差異水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下松褐天牛腫腿蜂的累積死亡率

不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下，松褐天牛腫腿蜂雌蜂和雄蜂的壽命差異較大，儲(chǔ)存15 d時(shí)，雄蜂死亡率即達(dá)24.84%，30 d時(shí)，雄蜂累積死亡率已達(dá)98.23%，只有極少數(shù)雄蜂壽命超過(guò)30 d。而雌蜂在儲(chǔ)存15 d時(shí)，死亡率僅0.48%，30 d時(shí)，累積死亡率只有1.41%，60 d時(shí)不足10%，為6.90%，之后，其累積死亡率開(kāi)始小幅上升，至90 d時(shí)達(dá)23.67%，120 d時(shí)達(dá)42.46%，之后，其累積死亡率直線上升，150 d時(shí)達(dá)77.16%，165 d時(shí)超過(guò)90%，180 d則全部死亡（圖1）。

圖1 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下松褐天牛腫腿蜂雌蜂和雄蜂的累積死亡率Fig.1 The cumulative mortality of Sclerodermus alternatusi female and male with different storage time

松褐天牛腫腿蜂雌蜂累積死亡率隨儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)的變化趨勢(shì)符合邏輯斯蒂模型：y＝123.2099/(1＋e4.6958—0.0345x)（F＝1590.478，P＝0.0001，R＝0.9986）。

2.2 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下松褐天牛腫腿蜂的產(chǎn)卵前期

不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下，松褐天牛腫腿蜂雌蜂的產(chǎn)卵前期差異顯著（F＝37.818，df＝5,174，P＝0.0001）。其中，儲(chǔ)存150 d，松褐天牛腫腿蜂雌蜂的產(chǎn)卵前期最長(zhǎng)，平均為9.62 d，顯著長(zhǎng)于另外5個(gè)處理。不儲(chǔ)存的次之，平均為9.00 d。儲(chǔ)存120 d，平均為8.17 d。儲(chǔ)存30 d、60 d和90 d，其產(chǎn)卵前期較短，平均分別為7.24 d、7.17 d和7.23 d（圖2）。

圖2 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下松褐天牛腫腿蜂的產(chǎn)卵前期Fig.2 The pre-oviposition period of Sclerodermus alternatusi female with different storage time

2.3 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)對(duì)松褐天牛腫腿蜂發(fā)育歷期的影響

不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下，松褐天牛腫腿蜂子代卵歷期差異不顯著（F＝0.982，df＝5,174，P＝0.4304），其中，不儲(chǔ)存的卵歷期最長(zhǎng)，平均為4.33 d，儲(chǔ)存150 d的次之，平均為4.17 d，儲(chǔ)存90 d的最短，平均為3.97 d。

不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下，松褐天牛腫腿蜂子代幼蟲(chóng)歷期、蛹?xì)v期和發(fā)育歷期均差異顯著（F＝127.024，df＝5,166，P＝0.0001；F＝90.744，df＝5,161，P＝0.0001；F＝236.744，df＝5,161，P＝0.0001）。其中，儲(chǔ)存120 d和150 d，松褐天牛腫腿蜂的子代幼蟲(chóng)歷期較長(zhǎng)，均超過(guò)10 d，顯著長(zhǎng)于另外4個(gè)處理，儲(chǔ)存30 d和60 d的幼蟲(chóng)歷期較短，平均為7.25 d和7.00 d，不儲(chǔ)存的幼蟲(chóng)歷期平均為8.00 d。儲(chǔ)存150 d，松褐天牛腫腿蜂的子代蛹?xì)v期最長(zhǎng)，平均為21.46 d，顯著長(zhǎng)于另外5個(gè)處理，120 d的次之，平均為19.45 d，儲(chǔ)存30 d和60 d的蛹?xì)v期較短，平均為16.79 d和16.24 d，不儲(chǔ)存的蛹?xì)v期平均為17.88 d。儲(chǔ)存150 d，松褐天牛腫腿蜂的子代發(fā)育歷期最長(zhǎng)，平均為35.54 d，120 d的次之，平均為32.97 d，儲(chǔ)存30 d和60 d的發(fā)育歷期較短，平均為28.04 d和 27.34 d，不儲(chǔ)存的發(fā)育歷期平均為30.23 d（表1）。

表1 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下松褐天牛腫腿蜂子代的發(fā)育歷期Table 1 Developmental stage of Sclerodermus alternatusi progeny with different storage time

2.4 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)對(duì)松褐天牛腫腿蜂子代數(shù)量的影響

不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)對(duì)松褐天牛腫腿蜂子代雌蜂數(shù)的影響差異顯著（F＝20.116，df＝5,156，P＝0.0001）。其中，不儲(chǔ)存與儲(chǔ)存30 d的子代雌蜂數(shù)較大，顯著大于其他4個(gè)處理，不儲(chǔ)存的子代雌蜂數(shù)最大，平均為57.92頭，儲(chǔ)存30 d的次之，平均為54.54頭，儲(chǔ)存60 d和90 d的子代雌蜂數(shù)下降到平均40頭左右，120 d時(shí)，略有上升，至150 d時(shí)，子代雌蜂數(shù)量顯著下降，僅26.04頭。

不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)對(duì)松褐天牛腫腿蜂子代雄蜂數(shù)的影響差異顯著（F＝2.342，df＝5,156，P＝0.0442）。其中，儲(chǔ)存150 d的子代雄蜂數(shù)顯著高于另外5個(gè)處理，平均為4.48頭，且有3個(gè)重復(fù)中出現(xiàn)較多雄蜂后代。儲(chǔ)存30 d和不儲(chǔ)存的處理，子代雄蜂數(shù)平均為2頭左右，另外3個(gè)處理平均僅1頭多，有的重復(fù)中僅1頭雄蜂。

不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)對(duì)松褐天牛腫腿蜂子代總數(shù)的影響差異顯著（F＝3.762，df＝5,156，P＝0.0031）。其中，不儲(chǔ)存子代總數(shù)最多，平均為59.96頭，儲(chǔ)存30 d的次之，平均為56.64頭，儲(chǔ)存60 d和90 d的子代總數(shù)下降到40.71頭和41.64頭，儲(chǔ)存120 d的略有上升，至150 d，其子代總數(shù)顯著下降到30.52頭（表2）。

表2 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下松褐天牛腫腿蜂的子代數(shù)量Table 2 Progeny number of Sclerodermus alternatusi with different storage time

2.5 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)對(duì)松褐天牛腫腿蜂子代雄性比的影響

不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)對(duì)松褐天牛腫腿蜂子代性比（子代雄性比例）的影響差異顯著（F＝3.762，df＝5,161，P＝0.0031）。其中，儲(chǔ)存150 d的子代性比最大，平均為15.42%，顯著大于另外5個(gè)處理。不儲(chǔ)存和儲(chǔ)存30 d、60 d、90 d和120 d的子代性比差異不大，平均值分別為3.81%、3.92%、3.10%、4.11%和3.69%（圖3）。

圖3 不同儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)下松褐天牛腫腿蜂子代雄性比的比較Fig.3 The male rate of Sclerodermus alternatusi progeny with different storage time

3 討論

與川硬皮腫腿蜂一樣，松褐天牛腫腿蜂亦屬于卵諧產(chǎn)類(lèi)寄生蜂，即母蜂的卵并非一次性成熟，而是在成蟲(chóng)羽化后逐漸發(fā)育成熟[9]，因此，一般這類(lèi)寄生蜂都需要補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)以完成卵的發(fā)育，常見(jiàn)的寄生蜂主要依靠吸食寄主體液或者采食花蜜補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，腫腿蜂類(lèi)寄生蜂屬前者，它們?cè)诩闹魃砩袭a(chǎn)卵之前，先通過(guò)注射毒液麻痹寄主，再吸食寄主體液補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，這一過(guò)程中，可見(jiàn)到其腹部逐漸增大，節(jié)間膜清晰可見(jiàn)[10]。從腫腿蜂找到并刺蜇麻痹寄主到產(chǎn)卵的產(chǎn)卵前期，與腫腿蜂的種類(lèi)、寄主、溫度等有關(guān)[11-13]。本文研究結(jié)果表明，低溫儲(chǔ)存母蜂對(duì)松褐天牛腫腿蜂產(chǎn)卵前期亦有顯著影響，適當(dāng)儲(chǔ)存雌蜂可以縮短松褐天牛腫腿蜂的產(chǎn)卵前期。剛羽化的雌蜂，其卵尚未完全成熟，所以需要較長(zhǎng)的產(chǎn)卵前期來(lái)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，而儲(chǔ)存一段時(shí)間的雌蜂，其卵趨于成熟，只需要較短的時(shí)間補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)即可產(chǎn)卵，但儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，會(huì)導(dǎo)致雌蜂體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)的消耗，間接影響了卵的發(fā)育，所以也需要較長(zhǎng)的產(chǎn)卵前期來(lái)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。因此，適當(dāng)?shù)牡蜏貎?chǔ)存可以加快松褐天牛腫腿蜂的寄生進(jìn)程。

腫腿蜂雌蜂自身狀態(tài)不僅影響雌蜂的產(chǎn)卵前期，對(duì)子代的發(fā)育亦有影響。白蠟吉丁腫腿蜂雌蜂大小會(huì)影響子代幼蟲(chóng)歷期，而雌蜂密度同樣會(huì)影響子代幼蟲(chóng)歷期和發(fā)育歷期[14]。松褐天牛腫腿蜂雌蜂密度會(huì)影響其子代幼蟲(chóng)歷期、蛹?xì)v期和發(fā)育歷期[15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低溫儲(chǔ)存后，雌蜂壽命對(duì)其子代的發(fā)育歷期亦有影響，其中影響較為明顯的是幼蟲(chóng)歷期和蛹?xì)v期，總體而言，松褐天牛腫腿蜂幼蟲(chóng)歷期和蛹?xì)v期隨雌蜂儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)的增加呈增加趨勢(shì)，不儲(chǔ)存和儲(chǔ)存30～90 d，其幼蟲(chóng)歷期為7～8 d，蛹?xì)v期為16～18 d，儲(chǔ)存150 d，其幼蟲(chóng)歷期增加到10 d，蛹?xì)v期增加到20 d。綜合來(lái)看，可能是腫腿蜂雌蜂的營(yíng)養(yǎng)狀況間接影響了子代發(fā)育，具體機(jī)制還需要深入研究。

管氏腫腿蜂通過(guò)一段時(shí)間冷藏后，釋放到林間，由于饑餓，搜索攻擊天牛等寄主就更積極、主動(dòng)，從而提高寄生效率[16]。顯然，冷藏腫腿蜂，不僅為提前繁育商品蜂提供了理論支持，也有利于提高腫腿蜂的寄生效率。周娜指出儲(chǔ)存管氏腫腿蜂雖然會(huì)提高搜索寄生效率，但隨著儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)，其死亡率逐漸上升，子代出蜂率逐漸下降[17]，本文對(duì)松褐天牛腫腿蜂的研究與之類(lèi)似。隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，松褐天牛腫腿蜂累積死亡率逐漸上升，60 d前死亡率較低，60 d后開(kāi)始死亡率明顯增加，至120 d時(shí)，累積死亡率達(dá)42.46%，之后，其累積死亡率直線上升，165 d時(shí)超過(guò)90%，180 d則全部死亡。其子代數(shù)量隨儲(chǔ)存時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低，至150 d時(shí)，子代數(shù)量下降了一半。表明儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，不僅影響雌蜂的存活，對(duì)雌蜂的產(chǎn)卵量也會(huì)造成顯著影響。溫度可以影響到寄生蜂的繁殖、發(fā)育以及取食，長(zhǎng)時(shí)間的低溫儲(chǔ)存對(duì)蜂種造成了不可逆的影響，降低了蜂種的繁殖能力，造成子代總數(shù)和雌蜂總數(shù)大幅度減少。雌蜂在對(duì)抗低溫的過(guò)程中消耗了較多能量，導(dǎo)致供卵發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)不足，從而使得子代數(shù)量減少。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，儲(chǔ)存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)后，松褐天牛腫腿蜂子代出現(xiàn)較多雄性個(gè)體，這可能是在長(zhǎng)期低溫下，導(dǎo)致雌蜂體內(nèi)儲(chǔ)存的精子存活率下降，進(jìn)而導(dǎo)致受精卵減少，雌蜂只能產(chǎn)下未受精卵發(fā)育為雄性。受試驗(yàn)條件所限，腫腿蜂雌蜂體內(nèi)精子的存活情況未能通過(guò)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，低溫儲(chǔ)存對(duì)精子存活率的影響尚待進(jìn)一步研究證實(shí)。

腫腿蜂的儲(chǔ)存時(shí)長(zhǎng)因溫度和寄主差異而不同。吳曉云等[18]研究了白蠟吉丁腫腿蜂的儲(chǔ)存條件，表明在11 ℃，RH 75%條件下，經(jīng)過(guò) 60 d 保藏，其雌蜂的存活率仍達(dá)80%以上，用青楊天牛作寄主擴(kuò)繁的白蠟吉丁腫腿蜂雌蜂比用黃粉蟲(chóng)蛹擴(kuò)繁的雌蜂更耐低溫保藏。用雙條杉天牛幼蟲(chóng)繁育的管氏腫腿蜂最長(zhǎng)可儲(chǔ)存70 d，而用黃粉甲蛹、蜜蜂幼蟲(chóng)繁育的管氏腫腿蜂最長(zhǎng)可儲(chǔ)存45 d[19]。黃瓊等[20]報(bào)道利用黃粉蟲(chóng)繁育的川硬皮腫腿蜂60 d時(shí)為56.4%，最適川硬皮腫腿蜂貯藏的溫度為12 ℃。本文實(shí)驗(yàn)表明，在10 ℃下，用麻天牛繁育的松褐天牛腫腿蜂在儲(chǔ)存60 d時(shí)，其死亡率僅6.9%，其子代數(shù)量雖有下降，但差異較小。120 d時(shí)雌蜂死亡率超過(guò)40%，但子代數(shù)量差異較小。綜合來(lái)看，低溫儲(chǔ)存松褐天牛腫腿蜂的最佳適宜時(shí)長(zhǎng)為60 d，最長(zhǎng)不宜超過(guò)120 d。