趙月生，陶昆麟，李祖彬

(齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院乳腺外科，黑龍江 齊齊哈爾 161000)

乳腺癌是女性發(fā)病率居首位的惡性腫瘤，該疾病是在乳腺上皮細胞等多種致癌因子共同作用下形成的，早期以乳房腫塊、乳頭溢液以及腋窩淋巴結(jié)腫大等為主要癥狀，晚期可發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，對患者生命安全造成直接影響[1-2]。相關(guān)研究[3]表明，乳腺癌經(jīng)系統(tǒng)治療后，五年生存率較為可觀。但是也有研究[4]報道，復發(fā)率、侵襲性、遠處轉(zhuǎn)移仍是影響患者5年生存率的主要危險因素，故對乳腺癌轉(zhuǎn)移的研究成為臨床亟待解決的問題。微小RNA(miRNA)是一類單鏈小分子RNA，可以與靶RNA進行配對，miRNA-182-5p為癌基因的表達產(chǎn)物，在乳腺癌、肺癌等多種腫瘤中表達增加[5]。另外miR-182-5p通過下調(diào)胃癌患者癌細胞的RAB27A來增強細胞的活力、有絲分裂、遷移和侵襲[6]；在肝細胞癌中，miR-182-5p可激活Wnt/β-catenin信號通路信號，對FOXO3a進行抑制，從而達到抑制β-聯(lián)蛋白退化，提高與β-聯(lián)蛋白之間的交互作用。此結(jié)果提示miR-182-5p可通過多種方式作用于癌細胞的增殖、轉(zhuǎn)移以及分化過程中，因此對miR-182-5p的研究可能對癌細胞的轉(zhuǎn)移提供思路。染色體丟失的磷酸酶基因(PTEN)是一個抑癌基因，可特異性地使磷脂酰肌醇-3，4，5-三磷酸(PIP3)去磷酸化，拮抗PI3K/Akt信號傳導通路，從而發(fā)揮抑制腫瘤細胞的作用[7]。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2018年3月～2021年3月于齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院接受手術(shù)治療的106例乳腺癌患者病例組。①納入標準:符合乳腺癌的診斷標準[8]；臨床資料完整；術(shù)前未接受放療、化療、免疫治療等其他抗腫瘤治療。②排除標準：合并其他惡性腫瘤的患者；行乳腺假體植入；依從性差者。年齡38～65歲，平均(51.36±13.01)歲；體重指數(shù)(BMI)18～24 kg/m2，平均(20.12±1.67)kg/m2；TNM分期：Ⅰ期：49例，Ⅱ期37例，Ⅲ期12例；Ⅳ期8例；分化程度：低分化68例，中分化24例；高分化14例；腫瘤直徑：<2 cm 86例，≥2 cm 20例。納入同期進行健康體檢的97例健康人群為對照組。①納入標準：既往無放化療或免疫治療史者；臨床資料完整者。②排除標準：合并其他惡性腫瘤者；行乳腺假體植入；依從性差者。年齡37～64歲，平均(50.96±12.98)歲；BMI 18～25 kg/m2，平均(20.52±1.92)kg/m2。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學倫理委員會同意。

1.2研究方案：對兩組進行miR-182-5p及PTEN靶點檢測。分析兩組一般資料、PTEN及miR-182-5p的表達水平。根據(jù)miR-182-5p表達水平的高低分為低表達組和高表達組，分析兩組患者一般資料以及PTEN在兩組患者中的表法水平。

1.3方法：將患者的石蠟標本和對照組人群乳腺組織作為標本并進行預處理。將凍存的乳腺細胞株復蘇后進行培養(yǎng)，將其接種于遠孔板中，待細胞豐度達到90%時終止培養(yǎng)，并運用PBS沖洗2次，然后加入miRNA提取試劑盒中裂解液，收集細胞并放于-80℃的冰箱中備用。取約200 mg的乳腺組織并置于液氮中進行固化、研碎和加入miRNA提取試劑盒中裂解液，作為備用。使用miRNA提取試劑盒直接提取miRNA，用分光光度計(NanoDrop，Wilmington，DE，USA)檢測miRNA的質(zhì)量以及濃度。反轉(zhuǎn)錄后，加入反轉(zhuǎn)錄試劑合成互補的miRNA。使用TRIzol試劑(Invitrogen)從組織或細胞中分離總RNA。按照擴增說明，用熒光定量(PCR)儀器進行擴增。擴增完成后分析miR-182-5p或PTEN的表達。

1.4統(tǒng)計學方法：采用SPSS22.0軟件進行t檢驗，χ2檢驗、秩和檢驗。

2 結(jié)果

2.1隨訪結(jié)果：對病例組106例患者進行為期1年的隨訪發(fā)現(xiàn)，共計有86例患者生存，總生存率為81.13%。

2.2兩組miR-182-5p和PTEN比較：病例組miR-182-5p表達水平高于對照組，PTEN低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組miR-182-5p和PTEN比較

2.3高miR-182-5p表達組和低miR-182-5p表達組一般資料及PTEN比較：兩組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，高表達組病理分期較低表達組差，PTEN較低表達組低(P<0.05)。見表2。

表2 高低miR-182-5p表達組一般資料及PTEN比較[n(%)]

2.4高miR-182-5p表達組和低miR-182-5p表達組生存率比較：對所有患者進行為期1年的隨訪發(fā)現(xiàn)，高表達組患者生存率65.22%(45/69)低于低表達組83.78%(31/37)，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=4.091P=0.043)。

3 討論

乳腺癌由于早期缺乏特異性臨床癥狀，故該疾病在臨床確診時多為晚期，對于晚期患者而言由于其錯過放化療的最佳時間，乳腺癌根治術(shù)為其首選治療方式。但是乳腺癌根治術(shù)后約有10%～30%的患者出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，從而導致癌癥復發(fā)，增加死亡率[9]。近年來分子生物學的研究不僅使研究者對乳腺癌術(shù)后發(fā)生轉(zhuǎn)移病理生理學的理解，也對乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)分子機制進行全面概述，有助于找到潛在的預測性生物標志物和藥物靶點，以預防和治療腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。miRNA是一種具有基因調(diào)節(jié)功能的非編碼RNA，其可通過與靶mRNA的3′-非翻譯區(qū)結(jié)合起作用[10]，且因其具有顯著的組織特異性，故已被用于識別原發(fā)性癌癥組織。miR-182-5p可保護胃癌細胞中的細胞活力、遷移和侵襲。但是其在乳腺癌中的作用及其機制還不完全清楚。近年來相關(guān)研究[11]發(fā)現(xiàn)，miRNA可調(diào)節(jié)各種癌癥的靶向基因表達，因此通過對癌癥基因靶點的研究或許可對miR-182-5p在乳腺癌的發(fā)病機制中的作用進行闡述。PTEN被認為是一種腫瘤抑制因子，在多種癌癥中受損，其通過調(diào)節(jié)不同癌癥的代謝和生長，導致不同的生物學結(jié)果。

miRNA以癌基因或抑癌基因的角色在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，并且參與惡性腫瘤分化、增殖、代謝、凋亡的全部生理過程，在癌癥發(fā)生發(fā)發(fā)展過程中扮演重要角色[12-13]。當期人體內(nèi)有30多種miRNA，其在腫瘤細胞的表達中有上調(diào)的也有下降的。miR-182-5p是一種miRNA，其在miR-182-5p在肝癌、結(jié)直腸癌、胃癌、卵巢癌等癌癥中呈上升趨勢[14]，另外有研究[15]發(fā)現(xiàn)，miR-182-5p在三陰性乳腺癌患者中通過下調(diào)MTSSl水平而加快癌癥的轉(zhuǎn)移，且癌癥轉(zhuǎn)移速度同miR-182-5p表達水平呈正相關(guān)。本研究說明miR-182-5p在乳腺癌患者中也呈上升趨勢，此結(jié)果同陳智凱等人的研究[13]結(jié)果一致。當前大量的研究[16-17]均已證實PTEN與細胞增殖呈負相關(guān)，PTEN基因突變或缺失可導致細胞過度增殖，從而加速腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移。且現(xiàn)有的研究[18]結(jié)果顯示，在惡性膠質(zhì)瘤、原發(fā)性乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、肝癌等大量的腫瘤成分中證實了PTEN的缺失和突變。本研究說明PTEN可對癌癥因子進行抑制。PTEN是人類截至目前發(fā)現(xiàn)的第一個具有雙重特異性磷酸酶活性的抑癌基因，其通過脂質(zhì)磷酸酶活性使細胞內(nèi)第二信使3，4-二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)和3，4，5-三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)去磷酸化，誘導CDK抑制劑P27活性，使細胞周期阻滯在G1期而發(fā)揮其抑癌作用[19]。另外PTEN的末端區(qū)域的175個氨基酸序列與細胞骨架中的張力蛋白具有同源性，因此可共同參與細胞生長的調(diào)節(jié)，在PTEN具有抑制細胞周期進展、誘導細胞凋亡、抑制細胞遷移、鋪展和局部黏附等多種生理功能[20]。

楊悅等的研究[21]中通過對上調(diào)miRNA-137在腫瘤細胞發(fā)生發(fā)展的具體機制進行研究，發(fā)現(xiàn)了miRNA-137通過抑制PTEN，而調(diào)節(jié)PI3K/AKT信號通路，從而發(fā)揮抑癌作用，表明miRNA-137可通過調(diào)節(jié)PTEN而在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起作用，說明miRNA同PTEN具有關(guān)聯(lián)。趙興亮等人在其研究[22]中發(fā)現(xiàn)，在前列腺癌中過表達miR-182-5p，SMAD4蛋白表達下降、PC-3細胞增殖能力增強，抑制miR-182-5p表達后，SMAD4蛋白表達升高、PC-3細胞增殖能力下降，由此可見miR-182-5p表達水平對癌細胞的增殖、分化起著重要的作用，并且miR-182-5p表達水平越高，SMAD4蛋白表達越低，癌癥進展越為明顯，其結(jié)果表明miR-182-5p的表達水平和癌癥的發(fā)展緊密相關(guān)。本研究中高表達組病理分期較低表達組差，并且miR-182-5p表達水平和病理分期密切相關(guān)。其原因為：高表達的miR-182-5p可降低機體抵抗擊癌細胞增殖和侵襲的能力，進一步通過調(diào)節(jié)miR-182-5p耗竭對細胞增殖和侵襲有保護作用。另外高表達組PTEN較低表達組低，表明miR-182-5p通過抑制PTEN而參與癌癥的生理過程。PTEN是一種脂質(zhì)磷酸酶，且有研究[23]表明，PTEN是miR-182-5p的一個作用靶點，通過拮抗PI3K/AKT通路的活性而抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。而在一項動物實驗中發(fā)現(xiàn)，miR-182-5p的缺失通過上調(diào)PTEN表達抑制腫瘤生長，再次表明miR-182-5p和PTEN的表達水平呈負相關(guān)，PTEN通過拮抗miR-182-5p而發(fā)揮抑癌作用。另外對患者進行為期1年的隨訪表明miR-182-5p可對患者的生存期限進行影響。

綜上所述，miR-182-5p和PTEN在乳腺癌患者中呈異常表達，PTEN可以對miR-182-5p的表達進行抑制。