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        注射前列腺素對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊超數(shù)排卵效果的影響

        2022-11-17 03:53:00馬文奎王建魁李廣棟孫光澤肖西山劉建斌鄧學(xué)梅阿布力孜吾斯曼劉國(guó)世
        中國(guó)畜牧雜志 2022年11期
        關(guān)鍵詞:細(xì)毛羊前列腺素供體

        馬文奎,王建魁,李廣棟,吳 昊,孫光澤,高 爽,李 瑞,肖西山,劉建斌,鄧學(xué)梅,阿布力孜·吾斯曼,劉國(guó)世*

        (1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,新疆烏魯木齊 830052;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,北京 100193;3.內(nèi)蒙古草原金峰畜牧有限公司,內(nèi)蒙古赤峰 024000;4.北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系,北京 102400;5.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所,甘肅蘭州 730050)

        胚胎移植技術(shù)可充分發(fā)揮優(yōu)良母畜在家畜品種改良和種群擴(kuò)繁中的潛力[1],還可使優(yōu)質(zhì)種畜基因穩(wěn)定遺傳下去,有效縮短世代間隔[2-5],是普遍使用的快速擴(kuò)繁手段[6]。前列腺素在調(diào)節(jié)母畜發(fā)情、超數(shù)排卵、人工流產(chǎn)等羊業(yè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用[7-8]。當(dāng)前技術(shù)人員不能借助現(xiàn)有的B 超儀器將30 d 以內(nèi)的胎兒檢測(cè)出來(lái),因此對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊埋栓前進(jìn)行前列腺素處理,不但可以起到人工流產(chǎn)的作用,而且可以治療繁育障礙,還能提高同期發(fā)情和胚胎移植效率。但在胚胎移植中采集到的胚胎質(zhì)量會(huì)影響胚胎移植的整體效果[9],因此在手術(shù)沖胚后對(duì)收集到的胚胎進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析和鑒定獲得的高質(zhì)量胚胎能顯著提高胚胎移植效率。本實(shí)驗(yàn)旨在探究甘肅高山美利奴細(xì)毛羊在CIDR 埋栓前14 d 注射前列腺素是否會(huì)提高排卵效率,以期為提高羊良種繁育效率提供參考。

        1 材料和方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用內(nèi)蒙古赤峰市草原金峰畜牧有限公司12 只甘肅高山美利奴細(xì)毛羊作為供體,體重在45~76 kg,年齡2~3 歲,體況良好,無(wú)繁殖疾病。選用膘情良好,無(wú)繁殖疾病的2~3 歲烏珠穆沁羊做受體,供受體胎次均為3~5 胎。采精公羊性欲旺盛,精液品質(zhì)檢查優(yōu)良,精子活力0.6 以上。

        1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑 促卵泡素(Follicle-Stimulating Hormone,F(xiàn)SH)、促黃體素(Luteinizing hormone,LH)、孕馬血清促性腺激素(Pregnant Mare Serum Gonadotropin,PMSG)、氯前列醇鈉注射液(Prostagla ndin,PG)均由寧波三生生物科技有限公司生產(chǎn);陰道栓CIDR:購(gòu)買新西蘭產(chǎn)EAZI-BREED-CIDR,20 個(gè)/袋;Holding 培養(yǎng)液:新西蘭生產(chǎn),50 mL/袋;75%酒精、碘伏、高濃度新潔爾滅、磺胺、維生素AD、林可霉素、生理鹽水等為國(guó)產(chǎn)。

        1.3 設(shè)備和器械 采精設(shè)備(假陰道)、精液品質(zhì)檢測(cè)顯微鏡、內(nèi)窺鏡輸精設(shè)備、手術(shù)架、沖卵管、恒溫板、體視鏡(檢胚)、手術(shù)刀柄、直剪、止血鉗、子宮鉗、創(chuàng)巾鉗等。

        1.4 供體羊超數(shù)排卵 將試驗(yàn)羊分成試驗(yàn)組和對(duì)照組,均采用CIDR+FSH+PMSG 法。試驗(yàn)羊肌肉注射前列腺素1 mL(劑量0.2mg),注射后第14 天埋置CIDR 栓,同時(shí)肌肉注射3~5 mL 維生素AD。埋栓后第10 天開(kāi)始注射FSH,根據(jù)體重和手術(shù)次數(shù)調(diào)控劑量,總劑量區(qū)間為300~500 IU/ 只,4 d 8 針注射法依次遞減,第13 天注射最后1 針(第7 針)FSH 時(shí)同時(shí)取出CIDR 栓,取栓后12 h 注射PMSG,劑量330~450 IU/只。

        1.5 供體羊配種 供體羊在取栓后48~54 h 進(jìn)行內(nèi)窺鏡人工輸精。提前組裝好內(nèi)窺鏡輸精設(shè)備。將無(wú)傳染性疾病,性欲旺盛的供體公羊生殖器部位用衛(wèi)生紙擦拭干凈,找1 只發(fā)情母羊,利用假陰道采集精液。供體母羊仰臥保定,備好表皮,在距離乳房下側(cè)6~8 cm 處進(jìn)行微創(chuàng)打孔,一般左右兩側(cè)對(duì)稱。最后左手持內(nèi)窺鏡進(jìn)入羊腹腔找到子宮角,右手利用輸精槍將公羊精液輸入即可,子宮左右側(cè)各輸精0.2 mL。

        1.6 胚胎收集和質(zhì)量檢測(cè) 內(nèi)窺鏡輸精后第5~6 天手術(shù)法從子宮角沖胚,回收胚胎。在40 倍體視顯微鏡下?lián)斐雠咛?,剔除未受精卵,觀察受精卵狀態(tài)、色澤、大小、數(shù)量、飽滿度以及發(fā)育期和發(fā)育階段。

        1.7 受體羊的處理和腹腔鏡胚胎移植 采用CIDR+PMSG法處理,與供體同步埋栓,且同時(shí)撤栓,撤栓時(shí)肌肉注射PMSG,劑量330~450 IU/只,撤栓后24~36 h 試情,記錄發(fā)情時(shí)間。供體在5~6 d 進(jìn)行沖胚,受體通過(guò)腹部微創(chuàng)手術(shù)法進(jìn)行移植,采用腹腔鏡觀察子宮兩側(cè),單側(cè)發(fā)現(xiàn)1~3個(gè)黃體則可進(jìn)行移植,術(shù)后注射抗生素進(jìn)行消炎。

        1.8 供受體羊術(shù)后管理 供受體羊術(shù)后分欄喂養(yǎng),保持足夠飲水和飼料,圈舍內(nèi)保持干燥整潔,防止術(shù)后感染,觀察1~2 d,在胚胎移植后45 d 進(jìn)行妊娠檢查。

        1.9 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)先用Excel 歸類匯總,使用SPSS 26.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,結(jié)果如未特殊說(shuō)明,均使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤進(jìn)行表示,以P<0.05 作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 注射前列腺素對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊發(fā)情率和黃體數(shù)的影響 由表1 可知,注射前列腺素對(duì)發(fā)情率、平均黃體數(shù)、平均左側(cè)黃體數(shù)、平均右側(cè)黃體數(shù)沒(méi)有顯著影響。試驗(yàn)組的發(fā)情率為100%,對(duì)照組為83.33%;試驗(yàn)組的平均黃體數(shù)為18.50 枚,對(duì)照組為14.66 枚;試驗(yàn)組的平均左側(cè)黃體數(shù)為9.17 枚,對(duì)照組為7.33 枚;試驗(yàn)組平均右側(cè)黃體數(shù)為7.67 枚,對(duì)照組為7.33 枚。

        表1 注射前列腺素對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊發(fā)情率和黃體數(shù)的影響

        2.2 注射前列腺素對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊回收胚胎數(shù)和可用胚胎數(shù)的影響 由表2 可知,試驗(yàn)組的平均回收胚胎數(shù)、平均可用胚胎數(shù)以及胚胎回收率均高于對(duì)照組(P<0.05)。注射前列腺素有利于胚胎移植中獲得平均回收胚胎數(shù)、平均可用胚胎數(shù)和提高胚胎回收率。

        表2 注射前列腺素對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊回收胚胎數(shù)和回收胚胎率的影響

        2.3 注射前列腺素對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊受精率和胚胎質(zhì)量的影響 由表3 可知,試驗(yàn)組的受精率為91.18%,對(duì)照組為89.36%(P>0.05);試驗(yàn)組的平均桑椹胚數(shù)為5.33 枚,對(duì)照組為3.83 枚(P>0.05),試驗(yàn)組的平均囊胚數(shù)高于對(duì)照組(P<0.05)。注射前列腺素有利于提高胚胎移植中獲得的囊胚數(shù)。

        表3 注射前列腺素對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊受精率和胚胎質(zhì)量的影響

        2.4 注射前列腺素對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊受胎率的影響 由表4 可知,妊娠率試驗(yàn)組85.06%,對(duì)照組81.58%(P>0.05)。

        表4 注射前列腺素對(duì)甘肅高山美利奴細(xì)毛羊受胎率的影響

        3 討 論

        3.1 同期發(fā)情效果分析 同期發(fā)情技術(shù)可以追溯到20世紀(jì)50 年代,最初以孕激素和前列腺素聯(lián)合使用為主。隨著養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,不同激素聯(lián)合使用顯著提高同期發(fā)情效果,因此研究制定同期發(fā)情方案成為了動(dòng)物繁殖領(lǐng)域的焦點(diǎn)問(wèn)題[10-11]。研究表明前列腺素在家畜同期發(fā)情過(guò)程中具有重要作用[12-13],應(yīng)用PMSG 結(jié)合前列腺素可以提高母牛同期發(fā)情效率[14]。胡雄貴等[15]證實(shí)使用前列腺素會(huì)提高母牛的發(fā)情率。鄧緣等[16]使用PG+PMSG 法對(duì)54 只湘東黑山羊在2~5 d 內(nèi)集中發(fā)情和配種,同期處理的發(fā)情率87.0%(47/54)顯著提高。李芳芳等[17]對(duì)努比亞山羊同期發(fā)情中使用CIDR+PMSG+PG、CIDR+FSH+PG、PIDR+PMSG+PG3種同期方案,發(fā)情率分別為100%、100%、91.67%。鄧緣等[16]在同期發(fā)情方案中,先注射前列腺素進(jìn)行溶解黃體,使母羊處于同一發(fā)情生理階段。李芳芳等[17]在同期發(fā)情方案中最后注射前列腺素,促進(jìn)卵泡發(fā)育和排卵效果。在本研究中,埋植CIDR 栓前14d 注射前列腺素,溶解綿羊卵巢黃體,和鄧緣等方案有類似功能,同期發(fā)情排卵數(shù)和卵母細(xì)胞質(zhì)量顯著提高。

        3.2 超數(shù)排卵效果分析 超數(shù)排卵技術(shù)是胚胎移植中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[18]。董志岷等[19]用CIDR+FSH+PMSG+PG對(duì)38 只杜泊羊進(jìn)行超數(shù)排卵,平均沖胚7.52 枚,結(jié)果顯示,注射PMSG 增加了內(nèi)源促黃體素含量,促進(jìn)了卵泡成熟和排卵后顆粒細(xì)胞黃體化,提高了超數(shù)排卵效果。本實(shí)驗(yàn)采用PG+CIDR+FSH+PMSG 進(jìn)行,平均沖胚15.50 枚與上述不同,可能與供體年齡、輸精方式等有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)高山美利奴羊進(jìn)行超排處理,最終平均胚胎回收率為92.00%。馮新宇等[20]在超排時(shí)將 6針遞減法(12.5 mL Folltropin-V)作為對(duì)照組;6 針遞減法(10 mL Folltropin-V)為試驗(yàn) I 組;采用 8 針遞減法(12.5 mL Folltropin-V)為試驗(yàn) II 組;不改變劑量和給藥方式,僅將畜舍內(nèi)溫度降至零下18℃ 時(shí)為試驗(yàn) III 組,結(jié)果表明,對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)I 組、II 組、III 組胚胎回收率分別為93.12%、65.13%、73.83%、82.77 %。高峰等[21]采用二次前列腺素(PG)法、陰道栓(CIDR)+PG 法和CIDR+PMSG+PG 法對(duì)6 組湖羊進(jìn)行同期發(fā)情試驗(yàn),結(jié)果表明3 種方法中 CIDR+PMSG+PG 法同期發(fā)情效果較理想。馮新宇與高峰等在超數(shù)排卵中使用不同F(xiàn)SH 注射劑量、給藥方式、環(huán)境溫度、超排方案等[20-21]。本試驗(yàn)與馮新宇和高峰試驗(yàn)方案不同,取得的結(jié)果有所不同,可能是與品種、試驗(yàn)方法等不同導(dǎo)致。在本研究中,CIDR 埋栓前14 天進(jìn)行注射前列腺素,發(fā)情率和高峰(93.2%)[22]的研究結(jié)果一致,胚胎回收率高于馮新宇[20]及高峰等[22](55.60%)。

        4 結(jié) 論

        在養(yǎng)羊生產(chǎn)中,注射前列腺素14 d 后母羊處于新的周期黃體期,周期黃體功能可能出現(xiàn)退化,此時(shí)埋置CIDR 孕酮陰道栓可延長(zhǎng)黃體期,14 d 左右撤栓(CIDR)后可顯著促進(jìn)卵泡發(fā)育,卵泡數(shù)增加。在同期發(fā)情前14 d 注射前列腺素,可以有效提高胚胎移植供體胚胎回收率和平均可用胚胎數(shù)。

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