陳 珍，張炎達(dá)，施少華,，黃翠琴，潘慧青，楊榮平，趙 齊，劉榮昌，黃 瑜

(1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福建 福州 350013；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所動(dòng)物生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350013；3.福建貝迪藥業(yè)有限公司，福建 寧德 355300；4.龍巖學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，福建 龍巖 364012)

太子參為石竹科植物孩兒參的干燥塊根，富含氨基酸、多糖、皂苷、環(huán)肽、黃酮和揮發(fā)物等成份，具有降血糖、抗氧化、抗皮炎、增強(qiáng)免疫力和改善肺功能等作用[1-4]。太子參須與太子參塊根基礎(chǔ)物質(zhì)一致，功效相似，太子參須約占太子參塊根干重的14.93%，其太子參須皂苷總量約為0.25%[5-7]。吳建華等[8]研究證明，太子參須提取物能夠促進(jìn)仔豬免疫系統(tǒng)調(diào)控，提升仔豬免疫功能；本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，太子參須提取物還具有顯著的雞源乳酸菌和飼用枯草芽孢桿菌的體外益生功能[9-10]。目前為止，尚未見太子參須在水禽上的應(yīng)用報(bào)道。本試驗(yàn)通過研究太子參須制劑對(duì)水禽I型副黏病毒疫苗的作用效果，為其在水禽上的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 主要材料 1日齡健康番鴨，購自莆田某家禽有限公司，經(jīng)采集血清檢測(cè)禽I型副黏病毒抗體為陰性；太子參須針劑、太子參須顆粒、太子參須提取干粉，均由福建貝迪藥業(yè)有限公司提供。以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，通過苯酚-濃硫酸法測(cè)得太子參須針劑、太子參須顆粒、太子參須提取干粉多糖含量分別為25%、30%和60%。禽I型副黏病毒滅活疫苗是以分離鑒定的鴨源禽I型副黏病毒FP1/02株經(jīng)滅活后制備的油乳劑疫苗。

1.2 動(dòng)物分組 將270只1日齡健康番鴨按常規(guī)飼養(yǎng)方法網(wǎng)上平養(yǎng)，以全價(jià)配合飼料飼喂，自由采食及飲水，于4日齡時(shí)挑取240只雛番鴨并隨機(jī)分成4個(gè)組，分別為太子參須針劑組、太子參須顆粒組、太子參須提取干粉組和未給藥免疫組，每組60只，并按照表1方案進(jìn)行給藥，連用7 d。在7日齡時(shí)，各組番鴨均頸背部皮下注射禽I型副黏病毒滅活疫苗，0.3 mL/羽，于不同時(shí)間點(diǎn)采集血清，進(jìn)行血清抗體檢測(cè)，并進(jìn)行體重測(cè)定、免疫器官指數(shù)測(cè)定。

表1 試驗(yàn)分組及給藥方案

1.3 體重測(cè)定 于免疫后7、14、21、28 d和35 d從各組隨機(jī)選取10只番鴨，分別空腹稱重，記錄數(shù)據(jù)，以計(jì)算免疫后的體重變化。

1.4 血清抗體檢測(cè) 于免疫后7、14、21、28、35、42、49 d和56 d從各組隨機(jī)選取20只番鴨，按常規(guī)方法翅下靜脈采血0.5 mL，置于1.5 mL離心管中，室溫放置2 h后于4 ℃冰箱過夜，然后以3 000 r/min離心10 min分離血清，采用微量法測(cè)定禽Ⅰ型副黏病毒抗體[11]。

1.5 免疫器官指數(shù)測(cè)定 于免疫后5、7、14 d和21 d從各組隨機(jī)選取3只番鴨，空腹稱重后處死，取胸腺、脾臟和法氏囊，去除表面的脂肪后分別稱重，記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算各免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)=免疫器官重(mg)/宰前空腹體重(g)

1.6 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)均采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示，以P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 體重測(cè)定 結(jié)果如表2所示，免疫后7 d時(shí)，未給藥免疫組的番鴨體重為(44.25±3.51)g，太子參須針劑組、太子參須顆粒組和太子參須提取干粉組番鴨平均體重與未給藥免疫組相比差異不顯著(P>0.05)；免疫后14 d時(shí)，與未給藥免疫組相比，太子參須提取干粉組番鴨體重顯著增加(P<0.05)；至免疫后21 d，太子參須針劑組、太子參須顆粒組和太子參須提取干粉組番鴨體重均顯著高于未給藥免疫組(P<0.05)，到免疫后35 d，太子參須提取干粉組番鴨的體重仍顯著高于未給藥免疫組(P<0.05)。

表2 不同藥物對(duì)番鴨體重的影響

2.2 血清抗體檢測(cè) 結(jié)果如表3所示，免疫后7 d時(shí)，未給藥免疫組的禽I型副黏病毒抗體水平為(3.03±0.51)Log2，太子參須針劑組、太子參須顆粒組和太子參須提取干粉組的禽I型副黏病毒抗體水平均高于未給藥免疫組，但差異不顯著(P>0.05)；但免疫后14 d時(shí)，太子參須提取干粉組抗體水平顯著提高(P<0.05)，且這個(gè)現(xiàn)象一直持續(xù)到免疫后35 d；而太子參須顆粒組的抗體水平雖比未給藥免疫組高，但除免疫后35 d外，其余時(shí)間點(diǎn)均差異不顯著(P>0.05)；除免疫后21、28 d和35 d外，其余時(shí)間點(diǎn)太子參須針劑組與未給藥免疫組相比差異不顯著(P>0.05)。

表3 不同藥物對(duì)禽I型副黏病毒抗體水平的影響

2.3 免疫器官指數(shù)測(cè)定 結(jié)果如表4所示，免疫后5 d和7 d時(shí)，未給藥免疫組的番鴨平均胸腺指數(shù)為(3.58±0.58)mg/g和(4.56±0.26)mg/g，與未給藥免疫組相比，太子參須提取干粉組、太子參須針劑組、太子參須顆粒組番鴨的平均胸腺指數(shù)均顯著增高(P<0.05)，且太子參須針劑組在免疫后14 d和21 d番鴨的平均胸腺指數(shù)也顯著高于未給藥免疫組(P<0.05)。免疫后5 d時(shí)，未給藥免疫組的番鴨平均脾臟指數(shù)為(1.05±0.17)mg/g，太子參須提取干粉組番鴨的平均脾臟指數(shù)與未給藥免疫組相比差異顯著(P<0.05)，而太子參須針劑組、太子參須顆粒組番鴨的平均脾臟指數(shù)與未給藥免疫組相比差異不顯著(P>0.05)；免疫后7 d時(shí)，太子參須針劑組、太子參須提取干粉組番鴨的平均脾臟指數(shù)與未給藥免疫組相比差異顯著(P<0.05)，且太子參須提取干粉組繼續(xù)保持對(duì)番鴨脾臟強(qiáng)烈的刺激作用，于免疫后14 d和21 d時(shí)，太子參須提取干粉組番鴨的平均脾臟指數(shù)均顯著高于未給藥免疫組(P<0.05)，而免疫后14 d和21 d時(shí)，太子參須針劑組與未給藥免疫組的平均脾臟指數(shù)差異不顯著(P>0.05)。免疫后5、7、14 d和21 d，太子參須提取干粉組番鴨的平均法氏囊指數(shù)與未給藥免疫組相比差異顯著(P<0.05)，而太子參須針劑組、太子參須顆粒組番鴨的平均法氏囊指數(shù)與未給藥免疫組相比差異不顯著(P>0.05)。

表4 不同藥物對(duì)番鴨免疫器官指數(shù)的影響

3 討論

太子參含有苷類、多糖類和人體必需的氨基酸和微量元素，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫的功效，同時(shí)在抗炎癥方面具有顯著作用[12-13]。黃文哲等[14]研究發(fā)現(xiàn)，太子參中的苷類和多糖等是提高機(jī)體免疫功能的有效物質(zhì)，而太子參多糖具有抗應(yīng)激和免疫增強(qiáng)作用。劉訓(xùn)紅等[15]利用太子參多糖進(jìn)行抗應(yīng)激和免疫增強(qiáng)藥理試驗(yàn)，結(jié)果表明太子參多糖具有抗疲勞、耐缺氧、耐低溫以及抗應(yīng)激和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用。鐘方曉等[16]通過藥理試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，太子參多糖與太子參水煎液結(jié)果相似，能增加小鼠體力和非特異免疫功能。蔡晶等[17]從免疫器官、免疫細(xì)胞水平方面進(jìn)行研究，結(jié)果顯示太子參多糖粗提物具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠增強(qiáng)輔助性T細(xì)胞(Th)、抑制性T細(xì)胞(Ts)活性；能夠增加小鼠免疫器官重量，提高正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，用藥之初太子參須針劑、太子參須顆粒和太子參須提取干粉對(duì)禽I型副黏病毒抗體水平促進(jìn)作用并不明顯，免疫后14 d時(shí)，用藥效果初步呈現(xiàn)，特別是太子參須提取干粉的作用更為明顯，且這個(gè)現(xiàn)象一直持續(xù)到免疫后35 d；但太子參須針劑、太子參須顆粒對(duì)抗體水平的促進(jìn)作用并不明顯，排除劑型因素影響外，提示太子參須制劑對(duì)禽I型副黏病毒抗體水平的促進(jìn)作用可能有劑量依賴性，這種現(xiàn)象也可反映在太子參須劑量對(duì)番鴨體重的影響上，下一步可進(jìn)行太子參須多糖濃度梯度試驗(yàn)加以驗(yàn)證。

胸腺、脾臟、法氏囊為機(jī)體的免疫器官，它們是T、B細(xì)胞定居、抵御抗原剌激所產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場(chǎng)所。動(dòng)物免疫力的高低一定程度上直接受免疫器官的發(fā)育狀況的影響，多糖對(duì)動(dòng)物機(jī)體的免疫器官具有良好的促進(jìn)作用，主要表現(xiàn)為其對(duì)胸腺、脾臟等免疫器官的改善作用。嚴(yán)勝澤[18]、陳耀金等[19]、宋玉龍等[20]用太子參制劑處理昆明小鼠或BALB/c小鼠，發(fā)現(xiàn)太子參制劑可顯著提高小鼠胸腺、脾臟的重量。在本試驗(yàn)中，免疫禽I型副黏病毒滅活疫苗后5 d和7 d各太子參須試驗(yàn)組番鴨的平均胸腺指數(shù)顯著增高，至免疫后21 d，太子參須針劑組番鴨的平均胸腺指數(shù)仍顯著高于未給藥免疫組；免疫后5、7、14 d和21 d，太子參須提取干粉對(duì)番鴨的脾臟和法氏囊具有刺激作用，而太子參須針劑、太子參須顆粒對(duì)番鴨脾臟的刺激作用不明顯，這些可能是因?yàn)槿叩奶訁㈨毝嗵堑暮坎煌?，?dǎo)致其效果有所差異，太子參須多糖含量與其免疫指數(shù)的相關(guān)性還需進(jìn)一步加以確定。

綜上所述，本試驗(yàn)結(jié)果表明，太子參須提取干粉對(duì)禽I型副黏病毒抗體水平、番鴨體重、免疫器官指數(shù)均具有顯著的促進(jìn)作用，可作為未來疫苗佐劑的潛在劑型產(chǎn)品進(jìn)行開發(fā)。