周 雯，唐紫云，何思悅，劉小虎，周 玥

（大理大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，云南 大理 671000）

慢性髓細(xì)胞性白血?。╟hronic myeloigenous leukemia，CML）是一種骨髓增生性腫瘤，其特點(diǎn)是染色體9q34的ABL1基因與染色體22q11.2上的斷點(diǎn)簇區(qū)BCR基因的融合，這種重排被稱為費(fèi)城染色體〔1〕。K562細(xì)胞是從人CML急性病患者中分離的細(xì)胞，費(fèi)城染色體陽(yáng)性，被用作為CML的細(xì)胞模型?；熓钱?dāng)前治療白血病的主要方法，大部分患者通過(guò)化療可達(dá)到臨床完全緩解的治療效果。酪氨酸激酶抑制劑的廣泛使用使患者總體生存時(shí)間提高到幾乎接近于普通人群的預(yù)期壽命〔2〕。但化療藥物在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)對(duì)機(jī)體正常細(xì)胞也帶來(lái)不同程度的損傷〔3〕，使治療難以進(jìn)行。因此，探尋CML有效、安全的治療方法成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。

正常的造血需要骨髓微環(huán)境和造血干細(xì)胞之間的雙向相互作用。白血病細(xì)胞破壞了造血干細(xì)胞的微環(huán)境，其腫瘤細(xì)胞將微環(huán)境的穩(wěn)態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橛欣诎籽〖?xì)胞加速增殖的狀態(tài)。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMMSC）作為骨髓微環(huán)境的一員在白血病的發(fā)展和治療中發(fā)揮著不可或缺的作用〔4〕。據(jù)報(bào)道〔5-6〕，間充質(zhì)干細(xì)胞可通過(guò)分泌細(xì)胞因子或阻滯細(xì)胞周期來(lái)抑制K562細(xì)胞的增殖能力。Fathi等〔7〕研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素6、白細(xì)胞介素8和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β可通過(guò)Wnt5α/β-Catenin和p53通路降低白血病細(xì)胞端粒酶活性和端粒長(zhǎng)度。由此可見，間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)白血病細(xì)胞的增殖具備調(diào)控作用，但具體機(jī)制尚不清楚。p16INK4a蛋白是常見的衰老調(diào)控分子，它的激活已被證明是最有用的體內(nèi)衰老標(biāo)志物之一〔8〕。p16INK4a蛋白的表達(dá)是高度動(dòng)態(tài)的，在健康的年輕組織中基本不存在，但在許多老化的組織中被檢測(cè)到〔9〕。有報(bào)道〔10-11〕稱，將p16基因轉(zhuǎn)染至K562細(xì)胞后，K562細(xì)胞表面電荷密度增高，限制了K562細(xì)胞的增殖和遷移功能。提示p16基因的表達(dá)對(duì)K562細(xì)胞的功能起到一定的調(diào)控作用。本文旨在探究BMMSC能否通過(guò)誘導(dǎo)K562細(xì)胞衰老而抑制其增殖能力，同時(shí)探討p16INK4a蛋白在BMMSC誘導(dǎo)K562細(xì)胞衰老中的調(diào)控作用，為誘導(dǎo)白血病細(xì)胞衰老的途徑提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物K562細(xì)胞購(gòu)于齊氏生物科技有限公司。6~8周SPF級(jí)C57BL/6J雄性小鼠，體質(zhì)量20~30 g，購(gòu)于湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK（湘）2019-0004。

1.2 主要試劑及儀器DMEM/F12培養(yǎng)基、青-鏈霉素（賽業(yè)生物科技有限責(zé)任公司，批號(hào)：69010395、BL505A）；RPMI-1640培養(yǎng)基（普諾賽生命科技有限公司，批號(hào)：PM150110）；胎牛血清（BI公司，批號(hào)：C04001050）；胰蛋白酶（Hyclone公司，批號(hào)：J190034）；骨髓間質(zhì)干細(xì)胞成骨、成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基試劑盒（Cyagen公司，批號(hào)：MUBMX-90031、MUBMX-90021）；SA-β-Gal衰老染色試劑盒（碧云天生物技術(shù)公司，批號(hào)：C0602）；細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒（KeyGENBioTECH公司，批號(hào)：KGA512）；細(xì)胞裂解液、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（Thermo Fisher公司，批號(hào)：FNN0011、WP20005）；PE-anti-human CD29、PE-anti-human CD44、PEanti-human CD45（Bioscience公司，批號(hào)：SC3746、SC7297、SC1178）；CDKN2A/p16INK4a、β-actin、HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG（abcam公司，批號(hào)：EPR1473、ab210083、ab97051）；PBS、TBST緩沖液（索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)：P1020、T1081）；酶標(biāo)儀（BIORAD公司）；流式細(xì)胞儀（CytoFLEX公司）。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期K562細(xì)胞和第3~6代BMMSC進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組僅含K562細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)組BMMSC和K562細(xì)胞比例分別為1∶4、1∶2、1∶1及2∶1，培養(yǎng)24、48、72 h，篩選出細(xì)胞最佳比例和作用時(shí)間后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2 骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離與培養(yǎng)頸椎脫臼法處死小鼠，75%乙醇浸泡15 min，于超凈工作臺(tái)中剪斷雙足。剝離皮毛后緊貼脊柱平行剪斷股骨，避免破壞股骨腔完整性。分離出的腿骨暫置于含青-鏈霉素的PBS緩沖液中，漂洗3次，剪開脛、股骨兩端，用1 mL注射器吸取DMEM/F12完全培養(yǎng)基（DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基+10%胎牛血清+1%青-鏈霉素）沖出骨髓腔內(nèi)容物，直至骨體發(fā)白。吹打均勻后收集細(xì)胞懸液，1 000 r/min離心5 min后收集小鼠骨髓細(xì)胞，每只小鼠的骨髓細(xì)胞放入2個(gè)6 cm培養(yǎng)皿，置于37℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48 h后半量換液，以后每3 d換液，并用PBS緩沖液輕柔沖洗培養(yǎng)皿，待細(xì)胞生長(zhǎng)融合至80%~90%時(shí)按1∶1或1∶2的比例進(jìn)行傳代。

2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMMSC的表面標(biāo)志物和K562細(xì)胞周期取第3代BMMSC，PBS緩沖液沖洗3次，胰蛋白酶消化后，用PBS緩沖液將其調(diào)整為1×106個(gè)/mL的細(xì)胞懸液，分別往4支1.5 mL EP管內(nèi)加入100 μL細(xì)胞懸液，依次加入PE-anti-human CD29、PE-anti-human CD44、PE-anti-human CD45、PBS緩沖液各5 μL，室溫避光孵化30 min，1 000 r/min離心5 min，去除上清液，200 μL PBS緩沖液重懸，1 000 r/min離心5 min，上機(jī)檢測(cè)。

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期K562細(xì)胞2×105個(gè)/孔與各實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)48 h后，離心收集細(xì)胞，加入1 mL預(yù)冷的70%乙醇，4℃固定過(guò)夜。染色前細(xì)胞用PBS緩沖液洗滌2次，細(xì)胞重懸于含核糖核酸酶A的PBS緩沖液中，37℃孵育30 min消化RNA。加人PI染液，緩慢并充分重懸細(xì)胞沉淀，37℃避光溫浴30 min。染色完成后用流式細(xì)胞儀在488 nm激發(fā)波長(zhǎng)、507 nm發(fā)射波長(zhǎng)下檢測(cè)紅色熒光，同時(shí)檢測(cè)光散射情況。

2.4 BMMSC的成脂誘導(dǎo)分化消化重懸后將4×104個(gè)第3代BMMSC接種在24孔板中，每孔加入0.5 mL DMEM/F12完全培養(yǎng)基。置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，每隔3 d更換DMEM/F12完全培養(yǎng)基，直到細(xì)胞融合度達(dá)到100%或者過(guò)融合。吸走完全培養(yǎng)基，向24孔板中加入0.5 mL配制好的成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基A液。誘導(dǎo)3 d后吸走A液，加入0.5 mL成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基B液。24 h后吸走B液，換回A液進(jìn)行誘導(dǎo)。A液和B液交替作用3~5次（12~20 d），繼續(xù)用B液維持培養(yǎng)4~7 d直到脂滴變得足夠大、足夠圓。B液維持培養(yǎng)期間，每隔2~3 d需要換用新鮮的B液。成脂誘導(dǎo)分化結(jié)束后，使用油紅O染色，于顯微鏡下觀察成脂染色效果。

2.5 BMMSC的成骨誘導(dǎo)分化取第3代BMMSC，消化重懸后取2×104個(gè)BMMSC接種在事先包被0.1%明膠的24孔板中，每孔加入0.5 mL DMEM/F12完全培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，直到細(xì)胞融合度達(dá)到60%~70%時(shí)吸走完全培養(yǎng)基，換成0.5 mL配制好的成骨誘導(dǎo)分化完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每隔3 d換液，誘導(dǎo)2~3周后，視細(xì)胞的形態(tài)變化及生長(zhǎng)情況，用茜素紅進(jìn)行染色，于顯微鏡下觀察成骨染色效果。

2.6 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力取第3代BMMSC消化重懸后按與K562細(xì)胞的比例為1∶4、1∶2、1∶1、2∶1分別鋪入4個(gè)24孔板中，待細(xì)胞貼壁后移除DMEM/F12完全培養(yǎng)基，加入500 μL含1×105個(gè)K562細(xì)胞的RPMI-1640培養(yǎng)基，并設(shè)置僅含K562細(xì)胞的對(duì)照組和含RPMI-1640培養(yǎng)基的空白組分別培養(yǎng)24、48、72 h，輕柔吹打收集24孔板中的K562細(xì)胞鋪入96孔板中，每組5個(gè)復(fù)孔，每孔加入10 μL CCK-8溶液，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)4 h，用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm波長(zhǎng)處的吸光度（OD）值，并計(jì)算細(xì)胞增殖率。細(xì)胞增殖率（%）=[（實(shí)驗(yàn)組OD值-空白組OD值）/（對(duì)照組OD值-空白組OD值）]×100%。

2.7 SA-β-Gal染色法檢測(cè)K562細(xì)胞衰老情況取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期K562細(xì)胞1×105個(gè)/孔與BMMSC共培養(yǎng)48 h，PBS緩沖液洗滌2次，固定液常溫固定15 min；再用PBS緩沖液離心洗滌3次，加入配制好的染色液置入37℃、無(wú)CO2的恒溫培養(yǎng)箱中過(guò)夜。12 h后置于顯微鏡下觀察，計(jì)算400個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞率。

2.8 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)衰老調(diào)控分子p16INK4a的表達(dá)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期K562細(xì)胞1×106個(gè)/孔與各實(shí)驗(yàn)組共培養(yǎng)48 h后收集各組K562細(xì)胞，PBS緩沖液洗滌2次，提取各組細(xì)胞總蛋白，按BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒方法測(cè)定總蛋白濃度，取等量總蛋白經(jīng)SDS-PAGE電泳分離后轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂奶粉封閉2 h，加入兔抗鼠CDKN2A/p16INK4a一抗（1∶200），4℃過(guò)夜，TBST緩沖液漂洗2次；加入HRP標(biāo)記的羊抗兔二抗（1∶5 000），室溫反應(yīng)2 h，TBST緩沖液洗膜3次，ECL增強(qiáng)發(fā)光試劑顯色，凝膠成像系統(tǒng)曝光，顯影定影后觀察結(jié)果。

2.9 統(tǒng)計(jì)分析運(yùn)用SPSS 26.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩樣本間均數(shù)比較使用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以（±s）表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 BMMSC的形態(tài)觀察原代BMMSC形態(tài)大小不一，呈圓形。2~3 d后可見部分細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，呈多角形或橢圓形，散在分布。見圖1A。7 d后細(xì)胞變長(zhǎng)呈紡錘形或梭形，呈漩渦狀。見圖1B。傳代后細(xì)胞增殖速度明顯變快，形成多個(gè)相互獨(dú)立的成纖維樣細(xì)胞。見圖1C。

3.2 BMMSC表面標(biāo)志物的鑒定流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，第3代BMMSC表面標(biāo)志物CD29、CD44的陽(yáng)性表達(dá)率分別為89.18%、87.65%；造血干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD45陽(yáng)性表達(dá)率為1.16%。見圖2。

3.3 BMMSC的成脂、成骨分化加入成脂誘導(dǎo)液14 d時(shí)出現(xiàn)大量透光性良好的大小不等的空泡，排列不規(guī)則，油紅O染色可見紅色脂滴。見圖3A。加入成骨誘導(dǎo)細(xì)胞液后BMMSC開始變大，長(zhǎng)紡錘形細(xì)胞數(shù)量減少，多角形細(xì)胞數(shù)量增加，形成大量小結(jié)節(jié)，誘導(dǎo)至第21天，茜素紅染色可見大量橘紅色鈣結(jié)節(jié)。見圖3B。

3.4 BMMSC對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響與對(duì)照組相比，培養(yǎng)24、48、72 h后各實(shí)驗(yàn)組K562細(xì)胞增殖率逐漸降低，在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，細(xì)胞比例為2∶1的組別K562細(xì)胞增殖率均最低。當(dāng)細(xì)胞比例為2∶1時(shí)，共培養(yǎng)48、72 h的K562細(xì)胞增殖率均低于24 h時(shí)K562細(xì)胞的增殖率，48 h時(shí)K562細(xì)胞增殖率最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。共培養(yǎng)48 h與72 h時(shí)K562細(xì)胞增殖率無(wú)明顯差異。見表1。故選擇BMMSC和K562細(xì)胞比例2∶1的實(shí)驗(yàn)組，共培養(yǎng)時(shí)間為48 h進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

表1 BMMSC對(duì)K562細(xì)胞增殖率的影響（±s，n=3）

表1 BMMSC對(duì)K562細(xì)胞增殖率的影響（±s，n=3）

注：與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與培養(yǎng)24 h比較＃＃P＜0.01。

增殖率/%24 h 48 h 72 h對(duì)照組 — 100.000 100.000 100.000組別 細(xì)胞比例實(shí)驗(yàn)組■■■■■■■■■■■■■1∶4 94.427±3.070 93.669±4.235 90.046±3.588*1∶2 92.651±2.112* 88.084±4.161* 90.898±1.749*1∶1 80.930±4.945* 78.944±8.156* 69.433±5.692**2∶1 75.134±3.550* 57.362±3.811**＃＃ 59.351±7.481**＃＃

3.5 BMMSC對(duì)K562細(xì)胞衰老的影響與BMMSC共培養(yǎng)48 h后，SA-β-Gal染色衰老陽(yáng)性細(xì)胞呈藍(lán)色。見圖4。對(duì)照組K562細(xì)胞陽(yáng)性率為（14.500±2.858）%，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞陽(yáng)性率為（41.750±5.683）%，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞陽(yáng)性率明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

3.6 BMMSC對(duì)K562細(xì)胞周期的影響與BMMSC共培養(yǎng)48 h后K562細(xì)胞周期改變。見圖5、表2。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組K562細(xì)胞阻滯在G0/G1期增多，進(jìn)入S期和G2/M期的細(xì)胞減少。

表2 BMMSC對(duì)K562細(xì)胞周期的影響（±s，n=3）

表2 BMMSC對(duì)K562細(xì)胞周期的影響（±s，n=3）

注：與對(duì)照組比較**P＜0.01。

組別 G0/G1期/% S期/% G2/M期/%對(duì)照組 59.113±1.141 36.587±1.490 4.300±0.528實(shí)驗(yàn)組 72.950±2.247** 23.247±1.811** 3.803±0.504

3.7 BMMSC對(duì)K562細(xì)胞p16INK4a蛋白表達(dá)量的影響與BMMSC共培養(yǎng)48 h后K562細(xì)胞的p16INK4a蛋白表達(dá)量為（42.703±1.520）kD，對(duì)照組p16INK4a蛋白表達(dá)量為（17.196±2.196）kD；與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組p16INK4a蛋白表達(dá)量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見圖6。

4 討論

骨髓微環(huán)境的動(dòng)態(tài)演化參與了白血病細(xì)胞的增殖和浸潤(rùn)。對(duì)急性髓性白血病的研究表明，骨髓微環(huán)境的正?；蓽p緩疾病進(jìn)展，證實(shí)微環(huán)境是白血病患者的新治療靶點(diǎn)〔12〕。在骨髓微環(huán)境中輸注間充質(zhì)干細(xì)胞減少了腫瘤負(fù)荷并延長(zhǎng)了白血病小鼠的生存期〔13〕。這些證據(jù)都表明了BMMSC是白血病治療的一個(gè)可靠切入點(diǎn)。間充質(zhì)干細(xì)胞是造血干細(xì)胞微環(huán)境中異于造血干細(xì)胞的一類具有自我更新、修復(fù)損傷，具有多向分化潛能的干細(xì)胞，能維持造血干細(xì)胞的自我更新、增殖分化、歸巢遷移等功能〔14〕。小鼠和人間充質(zhì)干細(xì)胞上的細(xì)胞表面分子表達(dá)譜相似，來(lái)源于小鼠的BMMSC能夠在體外支持人類造血干細(xì)胞的增殖和遷移能力〔15〕，遂使用全骨髓貼法分離小鼠BMMSC與慢性粒細(xì)胞白血病K562細(xì)胞共培養(yǎng)，體外模擬白血病干細(xì)胞龕。

細(xì)胞增殖能力降低和SA-β-Gal活性增高是衰老的表現(xiàn)。本研究結(jié)果顯示，將BMMSC與K562細(xì)胞共培養(yǎng)后，能夠抑制K562細(xì)胞增殖。SA-β-Gal活性一直是使用最廣泛的衰老生物標(biāo)志物，pH=6時(shí)，在經(jīng)歷復(fù)制性或誘導(dǎo)性衰老的細(xì)胞中檢測(cè)到，但在增殖細(xì)胞中不存在〔16〕，被認(rèn)為是衰老檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。本研究BMMSC作用于K562細(xì)胞后，SAβ-Gal染色細(xì)胞陽(yáng)性率增高，提示BMMSC可誘導(dǎo)K562細(xì)胞衰老。

哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的癌基因激活導(dǎo)致限制腫瘤生長(zhǎng)的增殖應(yīng)激和衰老誘導(dǎo)。因此，衰老是一種生理性的腫瘤抑制機(jī)制，可抑制良性腫瘤病變向惡性腫瘤發(fā)展。細(xì)胞衰老是指先前具有增殖能力細(xì)胞的一種特定形式的高度持久的細(xì)胞周期停滯，該細(xì)胞對(duì)有絲分裂刺激具有抗性，并伴有持續(xù)的DNA損傷反應(yīng)〔17〕。細(xì)胞周期的進(jìn)展取決于細(xì)胞通過(guò)4個(gè)細(xì)胞周期檢查點(diǎn)，即G1到S過(guò)渡、S期檢查點(diǎn)、G2到M過(guò)渡和有絲分裂紡錘體檢查點(diǎn)〔18〕。G1是一個(gè)許多信號(hào)介入影響細(xì)胞分裂和細(xì)胞發(fā)育程序部署的時(shí)期，進(jìn)一步?jīng)Q定是否自我更新、分化或死亡〔19〕；細(xì)胞阻滯在G0/G1期后，失去分裂能力，對(duì)腫瘤的增長(zhǎng)失去作用。p16INK4a屬于INK4基因家族，是常見的衰老相關(guān)基因，據(jù)報(bào)道〔20〕，從BubR1小鼠中去除表達(dá)p16INK4a基因的細(xì)胞，延緩了小鼠年齡相關(guān)疾病的進(jìn)展。不僅如此，p16INK4a基因在細(xì)胞周期中還可以負(fù)向調(diào)節(jié)pRb-E2F通路。p16INK4a基因與CDK4/6結(jié)合抑制其激酶活性，從而阻止Rb磷酸化，將其維持在低磷酸化狀態(tài)，促進(jìn)Rb與E2F1的結(jié)合并導(dǎo)致G1細(xì)胞周期停滯。因此p16INK4a不僅可以抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶，導(dǎo)致G1期停滯，還可以通過(guò)長(zhǎng)期的高表達(dá)推動(dòng)細(xì)胞進(jìn)入衰老〔21〕。將INK4a基因轉(zhuǎn)染到具有INK4a基因缺陷的K562細(xì)胞中，p16INK4a基因誘導(dǎo)K562細(xì)胞周期停滯在G0/G1期，并促進(jìn)活K562細(xì)胞的紅系分化，還能誘導(dǎo)分化不完全的K562細(xì)胞凋亡，提示p16INK4a基因能夠抑制K562細(xì)胞的功能，可以對(duì)K562細(xì)胞產(chǎn)生調(diào)控作用〔22〕。本研究中BMMSC使K562細(xì)胞的p16INK4a蛋白表達(dá)明顯升高，K562細(xì)胞在G0/G1期增多，進(jìn)入S期和G2/M期的細(xì)胞減少。說(shuō)明BMMSC可以通過(guò)上調(diào)p16INK4a蛋白的表達(dá)抑制K562細(xì)胞周期的進(jìn)展，誘導(dǎo)K562細(xì)胞衰老，減少K562細(xì)胞的惡性增殖。K562細(xì)胞衰老是一個(gè)受多因素調(diào)節(jié)的過(guò)程，BMMSC誘導(dǎo)K562細(xì)胞衰老是否還有其他調(diào)控機(jī)制發(fā)揮作用有待進(jìn)一步探討。該研究為后續(xù)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)提供了理論基礎(chǔ)，為臨床白血病診療提供了新的靶點(diǎn)和思路。