陳 輝

（巴東縣公共檢驗檢測中心，湖北巴東 444300）

1 微生物檢測實驗室進行質(zhì)量控制的必要性

我國國家現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測》（GB/T 27405—2008）[1]中明確食品微生物檢測是指按照一定的檢驗程序和質(zhì)量控制措施，確定單位樣品中某種或某類微生物的數(shù)量或存在狀況。另外《檢測和校準(zhǔn)實驗室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》（CNAS—CL01—A001：2018）[2]中也明確指出為確保結(jié)果的有效性，實驗室應(yīng)制訂質(zhì)量控制計劃，依照計劃開展實驗室的質(zhì)量控制活動。各類食品產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中對微生物方面參數(shù)都有明確的質(zhì)量要求，無論是致病菌還是有害指示菌出現(xiàn)或者含量超標(biāo)都對人體會產(chǎn)生即時或者長遠(yuǎn)的傷害。微生物引起的食源性疾病在食源性疾病中占比較高，良好的實驗室質(zhì)量控制才能保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，檢驗檢測機構(gòu)要加強對微生物檢測實驗室質(zhì)量控制的重視程度，保障結(jié)果準(zhǔn)確可信，為監(jiān)管保駕護航。

2 食品微生物檢測實驗室質(zhì)量控制的內(nèi)容

國家標(biāo)準(zhǔn)《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品微生物檢測》（GB/T 27405—2008）中明確食品微生物實驗室的質(zhì)量控制包括人員，設(shè)施和環(huán)境條件，設(shè)備，試劑和培養(yǎng)基，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物5個方面，且應(yīng)分別從內(nèi)部質(zhì)量控制和外部質(zhì)量評估兩個方面進行實驗室質(zhì)量控制。內(nèi)部質(zhì)量控制形式主要有使用添加已知水平的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的樣品；使用包括但不僅限于能力驗證樣品的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，檢測結(jié)果的平行評估和平行實驗。外部質(zhì)量評估實驗室應(yīng)該定期參加與從事檢測項目相關(guān)的能力驗證、實驗室比對、盲樣考核等外部質(zhì)量評估計劃。外部質(zhì)量控制計劃對實驗室的質(zhì)量控制效果更好，其不僅可以在技術(shù)層面考核實驗室檢測結(jié)果的偏差，對檢測技術(shù)人員的技術(shù)提升有很大幫助，還可以綜合考核整個單位質(zhì)量控制體系的有效性。

《檢測和校準(zhǔn)實驗室能力認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物檢測領(lǐng)域的應(yīng)用說明》（CNAS—CL01—A001：2018）中指出對于定量檢測項目，應(yīng)定期使用質(zhì)控樣品或者有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)/標(biāo)準(zhǔn)樣品進行內(nèi)部質(zhì)控；對于定性檢測的項目，或用標(biāo)準(zhǔn)菌種污染樣品開展質(zhì)量控制；正常樣品采用留樣復(fù)測的方式開展內(nèi)部質(zhì)量控制，質(zhì)量控制活動不限于人員比對、設(shè)備比對和方法比對等形式。質(zhì)量控制的頻率要滿足CMA對微生物項目每兩年一次的要求[3-4]。

在日常實際工作中實驗室要針對檢驗任務(wù)的具體情況，制定適合自己實驗室的內(nèi)部質(zhì)控計劃，并結(jié)合檢驗任務(wù)和實驗室考核實際有效地開展實驗室質(zhì)量控制活動。相關(guān)檢測機構(gòu)可以報名參加能力驗證計劃（中國檢驗檢疫科學(xué)研究院等有能力驗證組織能力和資質(zhì)的機構(gòu)），注意范圍要涵蓋自己單位的資質(zhì)項目，也可以組織或者和參加實驗室間比對；對于內(nèi)部質(zhì)量控制計劃一定要與實驗室實際結(jié)合，統(tǒng)籌考慮檢驗任務(wù)量，在實際檢驗過程中引入質(zhì)控，可以是每10批次或者20批次加入一個人員比對、方法比對。但最好不要做標(biāo)準(zhǔn)菌株污染菌的加標(biāo)回收，存在污染正常樣品的可能性。此外，對于人員比對的結(jié)果評價不能生硬照搬化學(xué)領(lǐng)域的原則，要結(jié)合微生物檢測的特殊性，結(jié)合實驗室不確定度合理設(shè)置可接受區(qū)間，應(yīng)根據(jù)實際檢驗任務(wù)增加或者減少。相應(yīng)的質(zhì)控項目涉及陽性菌的指控項目最好單獨開展，以免影響實驗環(huán)境。

3 微生物檢驗實驗室質(zhì)量控制的要求及開展

除了在檢驗實驗過程中具體的實施質(zhì)量控制外，整體微生物實驗室及實驗室環(huán)境設(shè)備試劑等方面的質(zhì)量控制也非常重要。

3.1 人員方面的要求及具體開展形式

生物實驗室檢驗及管理人員需要有專業(yè)的微生物背景，有無菌操作、生物防護以及生物安全等方面的專業(yè)知識和技能，因生化鑒定涉及辨色實驗，無色盲色弱也是基本要求。

微生物檢驗實驗室的管理者需要具備生物學(xué)專業(yè)背景，擁有微生物檢驗技術(shù)和實驗室管理能力的高素質(zhì)人員，還需要配備一名質(zhì)量監(jiān)督員，監(jiān)督員要了解微生物的檢驗特點，熟悉微生物檢驗流程。一般檢驗人員需要對標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法非常熟悉，要能夠敏銳識別檢驗中的風(fēng)險點。微生物實驗室相關(guān)人員必須經(jīng)過一定的考核并確認(rèn)能力后才能獲取相關(guān)資質(zhì)；微生物實驗室相關(guān)人員要定期體檢，以防自身身體或者疾病狀況對檢驗結(jié)果造成影響；實驗室人員需要定期參加檢驗技術(shù)、生物安全、標(biāo)準(zhǔn)解讀等方面的培訓(xùn)以提高其理論知識儲備量和檢驗?zāi)芰?，并且每年每個檢驗人員都要以參加內(nèi)外部質(zhì)量控制的形式來考核其相關(guān)能力是否得到提升。實驗室人員因個人原因或者崗位變動不從事相關(guān)工作6個月后，要重新考核確認(rèn)能力后才能繼續(xù)返回工作。

3.2 培養(yǎng)基試劑耗材方面的要求及具體質(zhì)量控制

微生物檢驗實驗室試劑主要是檢測用培養(yǎng)基，培養(yǎng)基及相關(guān)試劑被送到實驗室后要做驗收。①初級驗收，即察看培養(yǎng)基是否過期、包裝是否破損、外部色澤狀態(tài)是否正常以及是否結(jié)塊等，并向供應(yīng)商索要生產(chǎn)商的質(zhì)控報告，如果是有毒有害試劑要索要相關(guān)危害數(shù)據(jù)文件。②在初級驗收的基礎(chǔ)上要進行培養(yǎng)基的技術(shù)性驗收，技術(shù)性驗收的對象是對檢測結(jié)果有影響的培養(yǎng)基試劑耗材。目前國家標(biāo)準(zhǔn)方法檢測用培養(yǎng)基的作用原理主要是根據(jù)某種菌的特異性生化反應(yīng)來進行檢測，所以培養(yǎng)基的關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)就是選擇性和生長率，不同性質(zhì)不同種類的培養(yǎng)基具體的驗收方法也不相同，具體實驗不在此處做詳細(xì)敘述，可以參考ISO/TS 11133或SN/T 1538.2—2016培養(yǎng)基制備指南，也可以依照《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗 培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》 （GB 4789.28—2013）[5]中的具體方法開展驗收。目前，隨著不斷地創(chuàng)新，許多知名廠家研發(fā)生產(chǎn)了一些便捷的快速檢測培養(yǎng)基和試劑，筆者認(rèn)為對這類試劑不能持排斥態(tài)度，應(yīng)本著驗收測試有效性的原則做一部分應(yīng)用研究，并在此基礎(chǔ)上研究技術(shù)性驗收方法，制定相關(guān)試劑驗收程序。在能力允許的情況下，和現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)方法同步開展相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用研究工作，為加快微生物領(lǐng)域檢測技術(shù)的進步起到積極推動 作用。

另外培養(yǎng)基的使用、檢驗用水的相關(guān)指標(biāo)檢測、培養(yǎng)基的銷毀、相應(yīng)的一次性檢測用培養(yǎng)皿以及無菌拭子也需要做無菌測試實驗進行驗收。

3.3 實驗室設(shè)備方面的具體要求及質(zhì)量控制

微生物檢驗實驗室需要配備開展檢驗及相關(guān)活動所需要的全部儀器設(shè)備，主要依照檢驗標(biāo)準(zhǔn)來配置，包括生化培養(yǎng)箱、烘箱、pH計、冰箱、天平、滅菌鍋、超凈工作臺和紫外燈等。對直接影響檢驗結(jié)果的設(shè)備如生化培養(yǎng)箱需要定期進行檢定，滅菌鍋屬于特殊壓力容器也需要定期檢定校準(zhǔn)，并且操作人員需要根據(jù)滅菌鍋的容量獲取壓力容器操作資格證。實驗室需要制定設(shè)備操作規(guī)程以確保規(guī)范化使用，使用時要填寫使用記錄和檢驗的樣品信息以保證檢測結(jié)果的可溯源性。相關(guān)設(shè)備需要根據(jù)使用頻次開展維護，若發(fā)生故障應(yīng)及時維修，維護維修時要張貼暫停使用標(biāo)簽，此外還需要定期對設(shè)備的性能進行有效評估，避免影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。長時間不用的設(shè)備重新啟用時需要重新校準(zhǔn)或者做性能測試。

3.4 微生物檢測實驗室內(nèi)的環(huán)境要求及具體質(zhì)量控制

微生物實驗室根據(jù)實際情況及實驗要求安排培養(yǎng)基配置區(qū)域、潔凈操作區(qū)、培養(yǎng)區(qū)以及廢棄物處理區(qū)等，每個房間需要有紫外燈，各區(qū)域最好有硬隔離，并且各個工作區(qū)域的設(shè)置要符合單行工作流程的要求。另外微生物實驗室的潔凈度、照度、壓力等方面都有具體要求，可以通過定期打掃衛(wèi)生，測試實驗室的懸浮粒子數(shù)，測試實驗室的浮游菌沉降菌，定期測試白光照度，紫外光照度，測試室內(nèi)壓力的方式開展實驗室的質(zhì)量控制。

除以上方面的質(zhì)量控制外，微生物檢測實驗室還需要做好樣品的處理、廢棄物的處理、實驗室的管理等方面，才能全面保障微生物檢測結(jié)果的有效性。

4 微生物檢測實驗室質(zhì)量控制的問題及建議

目前食品微生物檢測實驗室的質(zhì)量控制主要存在以下幾方面問題：①在具體做哪些方面的質(zhì)量控制方面還沒有相關(guān)政策、文件或者標(biāo)準(zhǔn)可供參考，各級各類微生物檢測實驗室沒有統(tǒng)一的參考標(biāo)準(zhǔn)；②目前很多機構(gòu)的檢驗人員依照化學(xué)領(lǐng)域的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)要求微生物領(lǐng)域，但沒有規(guī)范的評價標(biāo)準(zhǔn)，檢驗效果差強人意；③大多實驗室是重檢驗任務(wù)量，輕質(zhì)量控制，沒有或者流于形式的質(zhì)量控制無法保障結(jié)果的準(zhǔn)確性與科學(xué)性；④現(xiàn)有國家標(biāo)準(zhǔn)基本是基于微生物的生化反應(yīng)進行定性定量，由于生物活性物質(zhì)的特點，微生物實驗不需要復(fù)檢，這也使得很多檢測實驗室鉆空子，相關(guān)部門需要加大對微生物檢測技術(shù)的研究開發(fā)力度，使微生物實驗室的質(zhì)控可以有章可循。

5 結(jié)語

微生物項目檢測是食品質(zhì)量安全檢測不容忽視的重要組成，本文從食品微生物檢測實驗室的實際工作出發(fā)提出了具體可行的質(zhì)量控制方法，以保障食品微生物檢測工作的順利開展。食品微生物檢驗除了做好質(zhì)量控制外，還應(yīng)有科學(xué)精細(xì)的管理模式，才能多方面、全流程保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。