陶景莉

云南省曲靖市第一人民醫(yī)院 檢驗中心，云南 曲靖 655000

0 引言

凝血檢測能夠?qū)颊呤欠癜l(fā)生血栓及凝血藥物用量進(jìn)行有效的評估，凝血酶時間（thrombin time，TT）、活化部分凝血酶時間（activated partial thromboplastin time，APTT）、凝血酶原時間（prothrombin time，PT）、纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）是主要的評估指標(biāo)[1-2]。對于實驗室檢測而言，需要對一系列酶促反應(yīng)終點進(jìn)行監(jiān)測，因而診斷結(jié)果較易受到諸多不良因素的影響，包括標(biāo)本保存時間、離心時間與速度及溶血等，因此為確保獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，則需要加強對上述因素的關(guān)注，并且采取科學(xué)有效的措施進(jìn)行應(yīng)對[3-4]。本文將對在進(jìn)行凝血實驗檢測中標(biāo)本不同保存時間、離心時間與速度及溶血對于檢測結(jié)果的影響情況進(jìn)行如下分析報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年4月-2020年7月到本院門診就診及收治住院的患者共120例，男79例，女41例，平均年齡（35.5±4.9）歲。所有患者均具有正常的凝血功能，需排除存在出血傾向的患者。

1.2 方法

（1）保存時間：將120例樣本平均分成4份，在20℃～25℃的室溫環(huán)境下進(jìn)行存放，存放時間分別為1h、2h、4h，分別在不同的時間點對血液樣本進(jìn)行凝血四項檢測。

（2）離心速度：選取40例采集量正常的凝血標(biāo)本，將所有的血液樣本進(jìn)行平均分成兩份，之后分別將兩份樣本裝入干凈的塑料試管中，均對兩份樣本進(jìn)行離心處理，其中的一份樣本的離心速度設(shè)定為3000r/min，另一份樣本的離心速度設(shè)定為4000r/min，取上層血清，對樣本進(jìn)行凝血四項檢測。

（3）離心時間：選取40例采集量正常的凝血標(biāo)本，將所有的血液樣本進(jìn)行平均分成三份，之后分別將三份樣本裝入干凈的塑料試管中，均對三份樣本進(jìn)行離心處理，將離心速度均設(shè)定為3000r/min，分別進(jìn)行5min、10min、15min的離心處理取上層血清，對樣本進(jìn)行凝血四項檢測。

（4）溶血：采集量正常的標(biāo)本中溶血40例，重新抽取患者2mL的靜脈血，對其進(jìn)行凝血四項檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

①在凝血實驗檢測中不同保存時間對檢測結(jié)果的影響；②在凝血實驗檢測中不同離心時間對檢測結(jié)果的影響；③在凝血實驗檢測中不同離心速度對檢測結(jié)果的影響；④在凝血實驗檢測中溶血對檢測結(jié)果的影響。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)資料收集后采用雙錄入方式錄入Epidata，導(dǎo)入SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）的形式表示，計數(shù)資料以率（%）的形式表示，分別使用t與χ2方式進(jìn)行檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同保存時間對凝血實驗檢測結(jié)果的影響比較

在保存時間方面，即刻及1h、2h、4h標(biāo)本的PT、FIB水平無差異（P＞0.05）；4h標(biāo)本的APTT明顯長于2h，TT明顯長于2h，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 在凝血實驗檢測中不同保存時間對檢測結(jié)果的影響（）

表1 在凝血實驗檢測中不同保存時間對檢測結(jié)果的影響（）

注：相比于2h，#P＜0.05。

2.2 離心速度對凝血實驗檢測結(jié)果的影響比較

在離心速度方面，采取3000r/min與4000r/min的離心處理速度后觀察，兩組標(biāo)本的PT、FIB、APTT、TT比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 在凝血實驗檢測中不同離心速度對檢測結(jié)果的影響（）

表2 在凝血實驗檢測中不同離心速度對檢測結(jié)果的影響（）

2.3 離心時間對凝血實驗檢測結(jié)果的影響比較

相比于離心10min與離心15min血液樣本，離心5min血液樣本的PT、APTT水平均顯著降低；相比于離心10min血液樣本，離心15min血液樣本的PT、APTT水平均顯著降低，差異具有較大顯著性（P＜0.05）；但三種離心時間的FIB、TT水平相比較則并未具有顯著的差異性（P＞0.05），見表3。

表3 在凝血實驗檢測中不同離心時間對檢測結(jié)果的影響（）

表3 在凝血實驗檢測中不同離心時間對檢測結(jié)果的影響（）

2.4 溶血對凝血實驗檢測結(jié)果的影響比較

在溶血方面，正常標(biāo)本的TT明顯短于溶血標(biāo)準(zhǔn)本，APTT與PT明顯長于溶血標(biāo)準(zhǔn)本，差異顯著（P＜0.05）；但兩組標(biāo)本的FIB水平無差異（P＞0.05），見表4。

表4 溶血對凝血實驗檢測結(jié)果的影響比較（）

表4 溶血對凝血實驗檢測結(jié)果的影響比較（）

3 討論

研究表明，凝血標(biāo)本的收集與前處理過程將會對實驗室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性造成較大的影響，并且也是凝血四項檢測結(jié)果準(zhǔn)確性與可靠性的質(zhì)量控制關(guān)鍵[5]。就一般情況而言，檢驗科對臨床實驗室檢查的質(zhì)量控制進(jìn)行把控；然而通過臨床實踐證明，檢驗過程將會受到諸多不良因素的影響，并且經(jīng)觀察顯示，約60%的檢驗誤差發(fā)生于檢驗前，因此為確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性，則需要加強對標(biāo)本采集與運送的質(zhì)量控制[6-7]。PT能夠?qū)ι眢w凝血指標(biāo)情況進(jìn)行良好的反映，而其中所包含的INR可用于監(jiān)測服用抗凝劑的情況[8]。PT時間變長的主要原因在于缺少先天性凝血因子Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及纖維蛋白，若人體內(nèi)缺少維生素K，則會缺少凝血因子，從而會延長PT[9]，例如服用抗凝劑、體內(nèi)纖溶過分亢進(jìn)、嚴(yán)重的肝臟病變。而當(dāng)人體內(nèi)出現(xiàn)血栓、血液處于高凝情況時，則會使得PT縮短。APTT能夠?qū)θ梭w內(nèi)源性凝血功能的情況進(jìn)行真實的反饋，可用于監(jiān)測使用肝素量情況，當(dāng)人體內(nèi)缺少血漿因子Ⅷ、Ⅸ及XI的時，則會使得APTT在較大程度上延長[10-11]。例如對于患有XI因子缺乏癥及血友病的患者，其APTT明顯較長。當(dāng)人體處于高凝情況時，APTT則會顯著縮短，例如人體內(nèi)凝血因子的活性增強以及血液中有促凝物質(zhì)等，均會導(dǎo)致APTT縮短。TT表示纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白人體處于血中纖維蛋白及纖維蛋白原降解產(chǎn)物（FDPs）的增多、異常血紅蛋白血癥、DIC纖溶亢進(jìn)期及低纖維蛋白原血癥均可以導(dǎo)致體內(nèi)TT的升高，人體內(nèi)TT的降低并沒有顯著的臨床意義[12]。PT能夠?qū)θ梭w內(nèi)纖維蛋白的水平進(jìn)行真實反饋，對于患有急性心肌梗死的患者，其PT會顯著延長，而原發(fā)性纖溶癥、肝硬化、DIC等疾病均可會縮短PT[13]。

相關(guān)學(xué)者的研究結(jié)果顯示，當(dāng)血液離開機體后，其本質(zhì)便會開始發(fā)生變化，并且伴隨著存放時間的不斷延長，凝血因子將會逐漸消耗，最后甚至消失，進(jìn)而會對檢測結(jié)果造成較大的不良影響[14]。本研究的結(jié)果顯示，在20℃～25℃的室溫環(huán)境下，相比于即刻檢測結(jié)果，存放1h后所得的檢測結(jié)果并未表現(xiàn)出明顯的差異性；但相比較于存放于2h所檢測的結(jié)果，存放4h后檢測APTT則表現(xiàn)出明顯延長的情況，TT則表現(xiàn)出顯著短的情況；存放4h與2h的PT與FIB檢測結(jié)果并未表現(xiàn)出明顯的差異性，分析原因在于長時間保存在室溫條件下，易變凝血因子Ⅷ及Ⅴ因子對熱表現(xiàn)出不穩(wěn)定現(xiàn)象，導(dǎo)致凝血因子的活性不斷喪失，從而對凝固時間產(chǎn)生影響，由此可知，在室溫條件下伴隨著存放時間的不斷延長，雖然對凝血因子的APTT與TT會產(chǎn)生一定的影響，但并未對整體產(chǎn)生較大的不良影響。

在臨床檢驗中標(biāo)本發(fā)生溶血是一種較為常見的情況，通過研究表明，導(dǎo)致溶血發(fā)生的因素包括采血方式不當(dāng)或離心操作不當(dāng)，并且當(dāng)發(fā)生溶血后，血液標(biāo)本中的紅細(xì)胞會發(fā)生破裂，血紅蛋白會溢出；當(dāng)成熟紅細(xì)胞發(fā)生破裂后，將導(dǎo)致血小板第Ⅲ因子相似凝血活性的磷脂的含量在較大程度上提升，從而將會在較大程度上對凝血四項的檢測結(jié)果造成較大的不良影響[15-16]，正如本研究的結(jié)果顯示，正常標(biāo)本的TT明顯短于溶血標(biāo)準(zhǔn)本，APTT與PT明顯長于溶血標(biāo)準(zhǔn)本，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；但兩組標(biāo)本的FIB水平無差異，由此提示當(dāng)標(biāo)本發(fā)生溶血后將會導(dǎo)致APTT與PT縮短，使得TT延長，從而影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

在實驗室檢測中檢驗人員將血漿作為檢測標(biāo)本，因此在進(jìn)行檢驗前需要對血漿進(jìn)行離心處理，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)可知，臨床中主要使用3000r/min離心15min的“低速離心”模式[17]。對于本研究而言，檢驗人員對比4000r/min離心5min模式，通過結(jié)果可知，3000r/min離心15min與4000r/min離心5min后兩組標(biāo)本的PT、FIB、APTT、TT均無差異，由此提示加快離心速度，縮短離心處理時間，將不會對檢測結(jié)果造成較大的不良影響，可在一定程度上取代3000r/min離心15min的“低速離心”模式。

基于上述論述，為確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，在采集患者的血液樣本后，需要將其存放于密閉環(huán)境中，并且需要及時將其送至檢驗科進(jìn)行相應(yīng)的檢測；同時樣本采取人員需要掌握正確的采集方式，并且在采集血液樣本后需要進(jìn)行正確的存放，從而能夠避免血液樣本發(fā)生變質(zhì)；除此之外，在檢驗過程中，檢驗人員還需要嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方式進(jìn)行檢測與記錄，確保檢測的準(zhǔn)確性。

除上述措施外，為了確保凝血檢驗中的各項目數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，還需要確保檢測工作的細(xì)致性與全面性，尤其是細(xì)節(jié)方面，主要包括如下內(nèi)容：第一，確保采血流程的規(guī)范性。在進(jìn)行凝血檢驗工作前，檢測人員需按照規(guī)范的流程進(jìn)行采集血液工作。采血的過程需要由專人執(zhí)行操作，以便能夠確保樣本數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。不論是血液的采集還是運輸、保存，相關(guān)人員均需要嚴(yán)格依據(jù)要求與標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格執(zhí)行，及時將采集的標(biāo)本送至檢驗科，以防止紅細(xì)胞受到破壞，從而確保檢驗數(shù)值的準(zhǔn)確性[18]。第二，提高標(biāo)本的處理技術(shù)性。對標(biāo)本的處理對凝血檢驗項目存在較大的影響，尤其是離心處理的工作有嚴(yán)重的影響，本研究的結(jié)果對其進(jìn)行了證實。為了減少標(biāo)本處理對檢驗的不良影響，在檢測前需要對檢測設(shè)備進(jìn)行徹底消毒清潔，盡量避免標(biāo)本過度振蕩或受到不良刺激；謹(jǐn)慎使用抗凝劑，特別是需要加強對使用量的關(guān)注；離心處理的時候需要加強對血漿的含量的關(guān)注；離心處理后避免標(biāo)本日曬或受到其他污染。第三，嚴(yán)防溶血標(biāo)本?；颊叩撵o脈血本身在檢驗前就需要進(jìn)行檢查，要防止因為離心或其他的原因而導(dǎo)致標(biāo)本溶血，若標(biāo)本已出現(xiàn)溶血情況，則需要重新抽取靜脈血行凝血檢驗，以此確保凝血檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性[19]。第四，應(yīng)當(dāng)避免人為因素的影響。檢驗工作應(yīng)該由擁有豐富經(jīng)驗、技術(shù)優(yōu)良并且責(zé)任心強的專業(yè)人員來執(zhí)行操作。第五，使用規(guī)范的抗凝劑。在血液樣本采集后，為避免其發(fā)生凝固情況，則規(guī)范的抗凝劑使用必不可少，在血液采集前8h需要告知患者禁食禁飲，樣本保持空腹?fàn)顟B(tài)，避免對血液標(biāo)本產(chǎn)生不良影響。在血液標(biāo)本采集工作完成后及時進(jìn)行密封，并在第一時間將其送至檢驗科，檢驗人員需要嚴(yán)格按照規(guī)范步驟與要求進(jìn)行檢驗，以確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性[20]。第六，避免儀器因素影響或人為導(dǎo)致誤差。凝血檢測離不開儀器應(yīng)用和人的操作，對此檢驗實踐中需要加強對上述因素的重視，儀器準(zhǔn)確性與精密度影響檢驗結(jié)果，因此在進(jìn)行凝血檢查前，需對儀器設(shè)備行常規(guī)檢查；同時檢驗人員需要具有專業(yè)技能，因此檢驗工作需任用經(jīng)驗豐富、技術(shù)優(yōu)良、責(zé)任心強的人員執(zhí)行操作。除此之外，針對目前尚不明確的影響凝血檢驗項目的因素，臨床應(yīng)加大力度，使凝血檢驗流程進(jìn)一步透明化，為檢驗準(zhǔn)確性奠定堅實基礎(chǔ)。

綜上所述，本研究認(rèn)為室溫保存時間過長與標(biāo)本溶血均將對凝血實驗檢測造成不良影響，需要及時進(jìn)行送檢，并且需要采取正確的采集方式，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。