陳帥 袁崇均,* 羅森 張磊 湯依娜 袁明銘 竹敏 王笳

(1 四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，成都 610041；2 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬生殖婦幼醫(yī)院，成都 610041)

川射干為鳶尾科植物鳶尾(Iris tectorumMaxim.)的干燥根莖，具有清熱解毒、祛痰、利咽之功效，用于熱毒痰火郁結(jié)證，如咽喉腫痛、痰濁壅盛、咳嗽氣喘者[1]，其主要藥效成分為異黃酮類物質(zhì)[2-3]，而鳶尾黃素就是其中的主要有效成分。鳶尾黃素又名射干苷元，5,7,4'-三羥基-6-甲氧基異黃酮，現(xiàn)代研究表明鳶尾黃素具有C6-C3-C6母核結(jié)構(gòu)，也有α、β核不飽和吡喃酮以及C7-OH、C4'-OH等活性中心存在，具有清除自由基、抗脂質(zhì)過氧化損傷和降低血糖，防止動(dòng)脈粥樣硬化以及防止血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷作用，亦有對(duì)心肌梗死小鼠心臟有保護(hù)作用，還有抗炎、抗菌、抗腫瘤、抗病毒、雌激素類作用 等[4-7]。由于鳶尾黃素水溶性和脂溶性較差，腸道吸收較少和C-5、C-7位羥基在體內(nèi)易被糖基化的原因，使活性顯著降低，因此對(duì)鳶尾黃素進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，對(duì)于獲得高效、低毒的新型抗病毒候選藥物具有重要意義。

本研究基于鳶尾黃素的抗病毒作用，以鳶尾黃素為先導(dǎo)化合物[8]，采用甲氧基或者乙氧基取代C-7位的羥基，采用磺酸基取代了C-5'的氫，得到3個(gè)鳶尾黃素衍生物，分別為鳶尾黃素-5'-磺酸鈉、4',7-二乙基鳶尾黃素、4',7-二乙基鳶尾黃素-5'-磺酸鈉，顯著的改善了化合物的水溶性或脂溶性。本合成工藝操作簡(jiǎn)單、收率高、適用于工業(yè)化大生產(chǎn)，路線見圖1。并采用細(xì)胞培養(yǎng)法[9]實(shí)驗(yàn)，考察其衍生物的抗流感病毒[10]、腺病毒[11]、呼吸道合胞病毒[12]和柯薩奇病毒[13-14]作用，初步探討其藥理作用，以期開發(fā)新型抗病毒的單體成分藥物。

圖1 化合物的合成路線Fig.1 The synthetic route of the compound

1 試劑與儀器

1.1 試驗(yàn)藥物

鳶尾黃素(陜西綠清生物工程有限公司，含量：98.86%，批號(hào)：20200502)；鳶尾黃素-5'-磺酸鈉、4',7-二乙基鳶尾黃素、4',7-二乙基鳶尾黃素-5'-磺酸鈉，含量均≥98%，本實(shí)驗(yàn)室自制，批號(hào)分別為：20200503、20200702和20200601，試驗(yàn)前用生理鹽水配制成所需濃度的液體備用；利巴韋林注射液(成都平原藥業(yè)有限公司)，規(guī)格為1 mL×10只，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H20043330，生產(chǎn)批號(hào)：190801。

1.2 細(xì)胞與病毒

HeLa細(xì)胞株(衛(wèi)生部藥品與生物制品檢定所)；流感病毒(甲型H3N2病毒毒株)；腺病毒(ADV3病毒毒株)；呼吸道合胞病毒(RSV病毒毒株)；柯薩奇病毒(CVB3病毒毒株)，由四川省人民醫(yī)院病毒室提供。

1.3 試劑

氫氧化鈉、鹽酸、乙醇、硫酸二乙酯、濃硫酸和氯化鈉(成都市科龍化工試劑廠，分析純，批號(hào)分別為2020120401、2020010111、2020010201、2020080912、2020120304、2020020301)；RPMI-1640培養(yǎng)基(GibcoBRL公司，批號(hào)1865063)；噻唑藍(lán)(Sigma公司，批號(hào)C0009)。

1.4 儀器

RRLC-6410液質(zhì)聯(lián)用儀(Agilent公司)；AVⅡ核磁共振波譜儀(Bruker公司)；UV-2401PC紫外分光光度儀(Shimadzu公司)；FTIR8300紅外檢測(cè)儀(Shimadzu公司)；WRS-2微機(jī)熔點(diǎn)測(cè)定儀(上海易測(cè)儀器設(shè)備有限公司)；CPA225D電子天平型號(hào)(賽多利斯公司)；超純水系統(tǒng)(Millipore公司)；MCO-15AC CO2培養(yǎng)箱(三洋公司)；細(xì)胞培養(yǎng)瓶和96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Corning公司)；XDS-1B生物倒置顯微鏡(重慶光學(xué)儀器廠)；CKX41倒置顯微鏡(奧林巴斯公司)；酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(Thermo Fisher公司)；微量移液器(GILSON公司)。

2 方法

2.1 化合物的制備

2.1.1 合成路線1

取鳶尾黃素500 g，加2000 mL硫酸，攪拌溶解，反應(yīng)2 h，傾入20 L NaCl飽和溶液中，邊加邊攪拌，析出沉淀，放置過夜，過濾，沉淀用水煮沸溶解，趁熱過濾，放置，析晶，過濾，重結(jié)晶一次，過濾，60℃減壓干燥，得化合物1(600 g，含量＞98%，收率為89.55%)。取化合物1 200 g，加NaOH 40 g，混勻，加95%乙醇600 mL于4 L圓底燒瓶中，于水浴中加熱沸騰5 min，再加400 mL硫酸二乙酯，反應(yīng)30 min，取出，立即用鹽酸調(diào)pH至2～5，加水?dāng)嚢璺爬?。過濾，得淡黃色粉末，用95%乙醇攪拌均勻，過濾，反復(fù)洗滌至濾出液近無色，60℃減壓干燥，得化合物3(176 g，含量＞98%，收率77.24%)。

2.1.2 合成路線2

取鳶尾黃素500 g，加NaOH 100 g，混勻，加95%乙醇1500 mL于10 L圓底燒瓶中，于水浴中加熱沸騰5 min，再加1000 mL硫酸二乙酯，反應(yīng)30 min，取出，立即用鹽酸調(diào)pH至2～5，加水?dāng)嚢璺爬洹＿^濾，得淡黃色粉末，用95%乙醇攪拌均勻，過濾，反復(fù)洗滌至濾出液近無色，60℃減壓干燥，得化合物2(455 g，含量＞98%，收率76.69%)。取化合物2 200 g，加800 mL濃硫酸，攪拌溶解，反應(yīng)2 h，傾入8 L NaCl飽和溶液中，邊加邊攪拌，析出沉淀，放置過夜，過濾，沉淀用水煮沸溶解，趁熱過濾，放置，析晶，過濾，重結(jié)晶一次，過濾，60℃減壓干燥，得化合物3(230 g，含量＞98%，收率89.39%)。

2.2 鳶尾黃素及其衍生物溶解度考察

按照中國(guó)藥典2015版一部凡例21的溶解度實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行了溶解度對(duì)比試驗(yàn)：稱取3個(gè)化合物和鳶尾黃素適量，研成細(xì)粉，置于(25℃±2℃)一定量的溶劑中，每隔5 min強(qiáng)力振搖30 s；觀察30 min內(nèi)的溶解情況，并根據(jù)藥典對(duì)各種溶解性能的定義進(jìn)行判斷。

2.3 化合物抗病毒實(shí)驗(yàn)

2.3.1 組織半數(shù)感染量TCID50效價(jià)測(cè)定

將收集的含病毒的培養(yǎng)液做連續(xù)10倍稀釋，共14個(gè)濃度，分別加入培養(yǎng)有HeLa單層細(xì)胞的96孔板中，每濃度做3復(fù)孔。37℃、5%CO2培養(yǎng)3 d，觀察細(xì)胞病變情況，記錄結(jié)果，并采用Reed-Muench公式計(jì)算TCID50。

2.3.2 藥物的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)

用RPMI-1640將各化合物配制為10.00 mg/mL，溶解后過濾除菌。同法將鳶尾黃素及利巴韋林注射液配制為10.00 mg/mL，過濾除菌后備用。將配制好的各化合物、鳶尾黃素和利巴韋林注射液做連續(xù)對(duì)倍稀釋，共7個(gè)濃度(10.00、5.00、2.50、1.25、0.63、0.31和0.16 mg/mL)，然后分別加入培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞中，各濃度做3復(fù)孔，37℃、5%CO2培養(yǎng)3 d，觀察細(xì)胞病變情況，記錄結(jié)果，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2.3.3 受試藥物配制

根據(jù)受試藥物細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，將各化合物的實(shí)驗(yàn)起始濃度設(shè)定為4.00 mg/mL，然后再用RPMI-1640做連續(xù)對(duì)倍稀釋，共7個(gè)濃度(4.00、2.00、1.00、0.50、0.25、0.13和0.06 mg/mL)，將配制好的藥液經(jīng)過濾除菌后備用。根據(jù)藥物細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果和便于比較，將鳶尾黃素及利巴韋林注射液的實(shí)驗(yàn)起始濃度也設(shè)定為4.00 mg/mL，然后再用RPMI-1640做連續(xù)對(duì)倍稀釋，共7個(gè)濃度(4.00、2.00、1.00、0.50、0.25、0.13和0.06 mg/mL)，將配制好的藥液經(jīng)過濾除菌后備用。

2.3.4 體外抗病毒實(shí)驗(yàn)

待HeLa細(xì)胞在96孔板中培養(yǎng)生長(zhǎng)成片，加入100×TCID50各病毒液0.1 mL，37℃、5% CO2吸附2 h，吸出未吸附病毒。分別加入稀釋好的各化合物、鳶尾黃素和利巴韋林注射液各濃度藥液，每個(gè)濃度做3復(fù)孔。37℃、5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)立病毒對(duì)照組和細(xì)胞對(duì)照組，觀察細(xì)胞病變情況，記錄結(jié)果，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

3 結(jié)果

3.1 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

鳶尾黃素 淺黃色針晶(EtOH)；mp.214～216℃;UVλmaxnm:266;IR(KBr)νmax3410,1160,1520,1480,1250,1050 cm-1;ESI-MS:m/z299.05 [M-H]-1;1H NMR(DMSO,400 MHz)δ:13.09(1H,s,5-OH),10.77(1H,s,7-OH),9.58(1H,s,4'-OH),8.34(1H,s,H-2),7.37(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,H-6′),6.82(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,H-5′),6.44(1H,s,H-8),3.74(3H,s,6-OCH3);上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[2]報(bào)道一致，確定此商品為鳶尾黃素。

化合物1 淡黃色針晶(H2O)，HCl-Mg反應(yīng)陰性；AlCl3顯色呈淡黃色；mp.166～168℃;UVλmaxnm:264;IR(KBr)νmax3465,1654,1652,1575,1494,1465,1278,1165,1070 cm-1;ESI-MS:m/z379.04 [M-Na]-1;1H NMR(DMSO,400 MHz)δ：12.84(1H,s,5-OH),7.88(1H,s,H-2),7.74(1H,d,J=2.0Hz,H-6′),7.25(1H,dd,J=2.0,8.5Hz,H-2′),6.94(1H,d,J=8.5Hz,H-3′),6.21(1H,s,H-8),3.70(3H,s,6-OCH3);上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，確定此化合物為鳶尾黃素-5'-磺酸鈉。

化合物2 淡黃色結(jié)晶性粉末(EtOH)，HCl-Mg反應(yīng)陰性；AlCl3顯色呈淡黃色；mp.163℃～166℃;UVλmaxnm:268;IR(KBr)νmax3465,1654,1608,1577,1490,1465,1290,1180,1074 cm-1;ESI-MS:m/z357.20 [M+H]+;1H NMR(DMSO,400 MHz)δ:12.80(1H,s,5-OH),7.86(1H,s,H-2),7.43(2H,d,J=8.5Hz,H-2′,H-6′),6.95(2H,d,J=8.5Hz,H-3′,H-5′),6.43(1H,s,H-8),4.15(2H,q,4′-OCH2-),4.06(2H,q,7-OCH2-),3.90(3H,s,6-OCH3),1.51(3H,t,4′-CH3),1.43(3H,t,7-CH3);上述理化性質(zhì)和光譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致，確定此化合物為4',7-二乙基鳶尾黃素。

化合物3 淡黃色針晶(H2O)，HCl-Mg反應(yīng)陰性；AlCl3顯色呈淡黃色；mp.166～168℃;UVλmaxnm:264;IR(KBr)νmax3475,1658,1602,1579,1498,1467,1265,1174,1052 cm-1;ESI-MS:m/z481.1 [M+Na]+;1H NMR(DMSO,400 MHz)δ：12.82(1H，s，5-OH),7.83(1H，s，H-2),7.74(1H,d,J=2.0Hz,H-6′),7.25(1H,dd,J=2.0,8.5 Hz,H-2′),6.95(1H,d,J=8.5Hz,H-3′),6.17(1H,s,H-8),4.08(2H,q,4′-OCH2-),3.72(2H,q,7-OCH2-),3.57(3H,s,6-OCH3),1.31(3H,t,4′-CH3),1.14(3H,t,7-CH3);13C-NMR(DMSO,100 MHz)δ:180.7(C-4),154.5(C-7),154.2(C-4′),153.4(C-2),152.7(C-9),152.4(C-5),133.5(C-2′),132.1(C-6),130.4(C-5′),125.6(C-1′),123.4(C-3),120.5(C-6′),115.3(C-3′),106.3(C-10),90.9(C-8),64.8(7-OCH2-),64.3(4′-OCH2-),60.7(6-OCH3),14.8(7-CH3),14.6(4′-CH3),確定此化合物為4',7-二乙基鳶尾黃素-5'-磺酸鈉。

3.2 溶解度試驗(yàn)結(jié)果

按2.2項(xiàng)下規(guī)定，進(jìn)行溶解度試驗(yàn)，結(jié)果見表1。

表1 溶解度試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Solubility test results

結(jié)果顯示，相比鳶尾黃素，化合物1和化合物3在甲醇中的溶解度均有所增加；化合物2在氯仿中溶解度顯著提高，達(dá)到易溶；化合物1和化合物3在水中溶解度大幅提高，達(dá)到溶解，有利于提高化合物在體內(nèi)吸收和生物利用度。

3.3 TCID50效價(jià)結(jié)果

HeLa細(xì)胞感染病毒后，細(xì)胞出現(xiàn)腫漲變圓、脫落，細(xì)胞間隙變大，部分細(xì)胞貼壁能力下降并脫落、破碎。根據(jù)細(xì)胞病變效應(yīng)結(jié)果，計(jì)算組織半數(shù)感染量(TCID50)，結(jié)果見表2。

表2 各病毒對(duì)HeLa細(xì)胞的TCID50(n=3)Tab.2 TCID50 of virus on HeLa cells(n=3)

3.4 藥物的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

將不同濃度的藥物分別加入培養(yǎng)的HeLa細(xì)胞后，有藥物組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，出現(xiàn)細(xì)胞破碎、脫落，細(xì)胞內(nèi)遮光性顆粒多，細(xì)胞稀疏，表示該藥物組均出現(xiàn)細(xì)胞毒性。根據(jù)病變效應(yīng)結(jié)果，采用MTT法在570 nm波長(zhǎng)下測(cè)定A值，根據(jù)A值計(jì)算細(xì)胞存活率和病變率，運(yùn)用SPSS 19.0 Probit回歸分析法計(jì)算得出各化合物、鳶尾黃素和利巴韋林注射液對(duì)HeLa細(xì)胞的半數(shù)毒性濃度(TC50)，結(jié)果見表3。

表3 藥物對(duì)HeLa細(xì)胞的TC50(n=3,±s)Tab.3 TC50 of drugs on HeLa cells(n=3,±s)

表3 藥物對(duì)HeLa細(xì)胞的TC50(n=3,±s)Tab.3 TC50 of drugs on HeLa cells(n=3,±s)

藥物TC50(mg/mL)化合物1 4.939±0.632化合物2 4.835±0.556化合物3 5.512±0.508利巴韋林9.743±0.645鳶尾黃素4.186±0.352

結(jié)果表明，化合物1、2、3對(duì)HeLa細(xì)胞毒性作用與利巴韋林比較無顯著性差異(P＞0.05)，與射干苷元比較無顯著性差異(P＞0.05)，TC50結(jié)果也顯示化合物1、2、3細(xì)胞毒性弱于射干苷元，證實(shí)其具有更小的細(xì)胞毒性，較高的濃度也不會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞病變。

3.5 體外抗病毒實(shí)驗(yàn)結(jié)果

在感染100 TCID50各病毒情況下，各藥物組和病毒對(duì)照組均出現(xiàn)了細(xì)胞形態(tài)改變、融合、壞死、脫落等，但是各藥物組細(xì)胞病變程度均低于病毒對(duì)照組，隨著各藥物組濃度的增加，對(duì)病毒抑制率增加，細(xì)胞病變率降低，細(xì)胞對(duì)照組無細(xì)胞病變。根據(jù)細(xì)胞病變效應(yīng)結(jié)果，采用MTT法在570 nm波長(zhǎng)下測(cè)定A值，根據(jù)A值計(jì)算細(xì)胞存活率和病變率，運(yùn)用SPSS 19.0 Probit回歸分析法計(jì)算各化合物、鳶尾黃素和利巴韋林注射液的半數(shù)抑制濃度(IC50)和抗病毒指數(shù)(TI=TC50/IC50)，結(jié)果見表4。

表4 化合物對(duì)病毒的IC50和TI(n=3,±s)Tab.4 IC50 and TI of compounds to virus(n=3,±s)

表4 化合物對(duì)病毒的IC50和TI(n=3,±s)Tab.4 IC50 and TI of compounds to virus(n=3,±s)

與利巴韋林組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與鳶尾黃素組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

藥物病毒IC50(mg/mL)TI化合物1 H3N20.167±0.034*△△29.57 ADV30.787±0.065**△6.28 RSV0.174±0.025*△△28.39 CVB30.637±0.041*△△7.75化合物2 H3N20.648±0.036△7.46 ADV30.744±0.052*△6.50 RSV0.719±0.043*△6.72 CVB30.153±0.014**△△31.60化合物3 H3N20.155±0.032*△△35.56 ADV30.682±0.029*△△8.08 RSV0.161±0.011**△△34.24 CVB30.605±0.038*△△9.11利巴韋林H3N20.614±0.04015.87 ADV30.319±0.02230.54 RSV0.357±0.03627.29 CVB30.336±0.03929.00鳶尾黃素H3N20.923±0.0474.54 ADV30.894±0.0424.68 RSV0.875±0.0384.78 CVB30.969±0.0434.32

結(jié)果表明，各化合物組在不同劑量時(shí)對(duì)H3N2、ADV3、RSV、CVB3病毒均有不同程度的抑制作用，和鳶尾黃素比較差異有顯著性或十分顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，P＜0.01)，IC50遠(yuǎn)小于同等劑量的鳶尾黃素組，說明較小藥物濃度就能更好地抑制病毒，證實(shí)了結(jié)構(gòu)改造的可行性和必要性。

化合物1對(duì)RSV病毒有明顯的抑制作用，與利巴韋林比較有十分顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，抗RSV病毒指數(shù)略強(qiáng)于利巴韋林；對(duì)H3N2病毒有明顯的抑制作用，與利巴韋林比較有顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，抗H3N2病毒指數(shù)強(qiáng)于利巴韋林；化合物2對(duì)CVB3有明顯的抑制作用，與利巴韋林比較有十分顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，抗CVB3病毒指數(shù)略強(qiáng)于利巴韋林；化合物3對(duì)RSV病毒有明顯的抑制作用，與利巴韋林比較有十分顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，抗RSV病毒指數(shù)略強(qiáng)于利巴韋林；對(duì)H3N2病毒有明顯的抑制作用，與利巴韋林比較有十分顯著性的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，抗H3N2病毒指數(shù)(35.56)遠(yuǎn)強(qiáng)于利巴韋林(15.87)，證明其具有很高的安全性和有效性。

4 討論

結(jié)構(gòu)改造是現(xiàn)代藥學(xué)重要組成部分，從中藥或天然植物來源的化合物，由于療效不理想、有毒副作用或水溶性差等問題，很少直接應(yīng)用于臨床，需要對(duì)某些官能團(tuán)進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾、改造，以達(dá)到改變療效、降低毒副作用及增加生物利用度的目的。鳶尾黃素由于近似平面結(jié)構(gòu)，脂溶性、水溶性均較差，影響其生物活性，可以通過結(jié)構(gòu)改造來達(dá)到增效的目的。袁崇均[17]通過對(duì)鳶尾黃素開環(huán)形成查爾酮衍生物，證實(shí)其對(duì)HCT116、MCF-7、A549、SGC7901和SK-ov-3細(xì)胞株顯示出較強(qiáng)的抗腫瘤活性；通過對(duì)鳶尾黃素脫甲基形成為6-OH染料木素，證實(shí)其對(duì)H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷有顯著的保護(hù)作用[18]；陳帥通過鳶尾黃素8位活潑H形成Mannich堿，證實(shí)其對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠有很強(qiáng)的抗腫瘤作用[19]；郭常亮提供一種梭菌AUH-JLC39及其在鳶尾黃素轉(zhuǎn)化中的應(yīng)用，解決了二氫鳶尾黃素的微生物生物合成問題及其資源匱乏問題[20-21]。

在藥物研發(fā)中，抗病毒藥物的研究起步較晚，臨床上能有效地治療病毒性疾病的藥物十分有限，主要是因?yàn)榭共《舅幬镌诎l(fā)揮藥效殺死體內(nèi)病毒的同時(shí)，會(huì)損傷自身細(xì)胞，往往具有較高的毒副作用，其臨床應(yīng)用多具有一定限制。利巴韋林具有廣譜的抗病毒作用[10-14]，廣泛用于治療病毒感染，但臨床研究表明，長(zhǎng)期服用利巴韋林會(huì)使白細(xì)胞水平降低，產(chǎn)生骨髓抑制等不良反應(yīng)[22]。因此從天然植物中尋找抗病毒藥物，篩選高效低毒的抗病毒藥物是當(dāng)今抗病毒研究熱點(diǎn)之一。

TI通常稱為治療指數(shù)(therapeutic index)，表示藥物的安全性結(jié)果，用在抗病毒方面稱為抗病毒指數(shù)，由藥物的半數(shù)毒性濃度(TC50)/半數(shù)抑制濃度(IC50)得到，通常半數(shù)毒性濃度越大，半數(shù)抑制濃度越小，藥物就越安全有效。H3N2流感是一種由甲型H3N2流感病毒引起的呼吸系統(tǒng)疾病，可以通過呼吸道傳播，患者多表現(xiàn)出普通流行性感冒的癥狀，目前對(duì)甲流病毒尚缺乏特效藥物，常洋通過研究證實(shí)牛黃清感膠囊對(duì)甲型H3N2流感病毒具有顯著抑制作用，TI為27[10]；李爽等[23]證實(shí)空心蓮子草有效部位提取物對(duì)流感病毒有明顯抗病毒生物合成作用，其TI為2.43。本研究所合成的化合物3，TC50與利巴韋林相當(dāng)(P＞0.05)，對(duì)H3N2病毒的IC50為0.155±0.032 mg/mL，TI為35.56，具有廣譜高效、安全低毒的抗病毒活性，具有較高的開發(fā)利用價(jià)值，下一步將研究化合物3構(gòu)效關(guān)系，尋找其抗H3N2病毒的靶點(diǎn)，從分子機(jī)制方向探討其抗病毒原理。

致謝：NMR光譜、MS由四川大學(xué)分析測(cè)試中心完成，部分活性試驗(yàn)由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心完成。