葉江成，趙 進(jìn)，張一帆，龔明秀

1. 中國計(jì)量大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院/食品加工與質(zhì)量控制研究所，浙江 杭州 310018；2 .浙江省生物計(jì)量及檢驗(yàn)檢疫重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州 310018

肥胖是全世界常見的營養(yǎng)性疾病之一，肥胖問題是世界性公共衛(wèi)生問題，中國已成為全球肥胖人口最多的國家之一[1]。紅茶為全發(fā)酵茶，其功能成分具有安全性強(qiáng)、無毒副作用等特點(diǎn)，如茶多酚、茶多糖、茶色素（茶黃素、茶紅素和茶褐素）等具有調(diào)控脂質(zhì)代謝、改善血脂異常、緩解氧化應(yīng)激以及調(diào)節(jié)腸道菌群紊亂等降脂減肥作用[2-9]。紅茶加工經(jīng)鮮葉萎凋、揉捻、發(fā)酵、干燥等工序制作而成，在加工過程中鮮葉富含的茶多酚類物質(zhì)經(jīng)氧化作用變成香氣和發(fā)酵產(chǎn)物等成分，形成紅茶獨(dú)有的色、香、味品質(zhì)特征。隨著人們健康意識的增強(qiáng)，對紅茶品質(zhì)的追求也隨之提升。研究發(fā)現(xiàn)，紅茶的化學(xué)組成[10]、茶樹品種[11]、產(chǎn)地環(huán)境[12]、加工工藝[13]等因素影響紅茶品質(zhì)。李金婷[14]以‘烏牛早’茶樹鮮葉為原料加工紅茶，發(fā)現(xiàn)不同加工工藝對‘烏牛早’紅茶的品質(zhì)影響明顯，在紅茶加工中引入曬青、發(fā)酵（控溫控濕）工藝制成的紅茶品質(zhì)優(yōu)、形質(zhì)佳。包建豐[15]經(jīng)實(shí)踐確定‘烏牛早’、‘迎霜’‘鳩坑’等是制作松陽紅茶品質(zhì)較為理想的茶樹品種。

‘烏牛早’原產(chǎn)浙江省永嘉縣，屬于無性繁育系特早芽茶樹良種，樹勢生長旺盛，品質(zhì)性狀穩(wěn)定，經(jīng)濟(jì)效益高，符合產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求，目前已在全國范圍得到種植推廣。近年來，隨著紅茶熱的興起，各地開發(fā)紅茶的積極性日益高漲。本試驗(yàn)研究采用化學(xué)計(jì)量法、高效液相色譜和熒光定量PCR等多種檢測方式分析‘烏牛早’紅茶中的功能成分在加工過程中的變化規(guī)律，同時探索‘烏牛早’紅茶的水提物對秀麗隱桿線蟲（簡稱線蟲）脂質(zhì)調(diào)控基因的表達(dá)影響效應(yīng)，旨在為充分利用‘烏牛早’優(yōu)質(zhì)茶樹品種優(yōu)勢資源等提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

鮮葉原料：按照“一芽二葉或三葉”的標(biāo)準(zhǔn)，分別于2021年5月1日和7月10日采摘位于浙江省永嘉縣浙江省三農(nóng)茶業(yè)有限公司同一‘烏牛早’茶園基地的‘烏牛早’茶樹品種鮮葉為原料并在該公司茶葉加工車間按紅茶加工工藝制作紅茶樣。

秀麗隱桿線蟲：野生型線蟲株，大腸桿菌E.coil OP 50，購買于福建上源生物科學(xué)技術(shù)有限公司。線蟲試驗(yàn)分為4組，分別為常規(guī)組（對照組）、肥胖組（高膽固醇組）、‘烏牛早’春紅茶水提物處理組（春紅茶組）和‘烏牛早’夏紅茶水提物處理組（夏紅茶組）。

1.2 試驗(yàn)方法

‘烏牛早’紅茶樣制作：按傳統(tǒng)紅茶工藝加工制成。

主要功能成分測定：水浸出物含量參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8305—2013方法測定；咖啡堿含量參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8312—2013方法測定；茶多酚含量參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8312—2018方法測定；游離氨基酸含量參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8314—2013方法測定；可溶性糖含量采用硫酸苯酚法[16]；總黃酮含量參照分光光度法測定[17]；兒茶素和茶黃素含量測定分別采用國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 8313—2018和GB/T 30483—2013方法測定；茶葉水提物的制備參照Li M[18]的方法并完善步驟為：用95℃熱水按料液比1∶20浸提‘烏牛早’紅茶5 min，趁熱抽濾水提取物并收集濾液，然后在-55℃冷凍干燥24 h得到茶水提取物凍干粉，調(diào)配水提物最佳干預(yù)濃度為100 mg/L；實(shí)時熒光定量PCR參考潘聯(lián)云[19]與王瑤[20]方法。

1.3 Real-Time PCR檢測

購買上海生物工程有限公司試劑盒，按照說明書進(jìn)行提取RNA、檢測濃度和純度。依照M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶的說明進(jìn)行cDNA的合成（Promega）。采用Primer Premier 6.0和Beacon designer 7.8軟件進(jìn)行熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)，送生工生物工程（上海）股份有限公司負(fù)責(zé)合成（引物序列見表1）。

表1 秀麗線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）實(shí)時定量PCR所用引物Table 1 Primers used for two lipid regulation genes from C. elegans for rqRT-PCR

Real-Time PCR。反應(yīng)體系（20 μL）：SDW 8.0 μL，Power SYBR? Green Master Mix 10.0 μL，F(xiàn)orward Primer （10 μM） 0.5 μL，Reverse Primer（10 μM）0.5 μL，cDNA 1.0 μL；反應(yīng)條件：95℃，1 min，40個循環(huán)（95℃，15 sec，63℃，25 sec，收集熒光），55℃ ～ 95℃熔點(diǎn)曲線分析；每個樣品重復(fù)三次，3個基因相對表達(dá)水平以2（Ct內(nèi)參基因-Ct目的基因）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

采用IBM SPSS Statistics 20.0數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行相關(guān)性與差異顯著性分析，水平間的比較用LSD法和Ducan法，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差顯示檢測指標(biāo)最終數(shù)據(jù)；P＜0.01為差異極顯著，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 ‘烏牛早’紅茶不同工序在制品生化成分含量比較

2.1.1 茶多酚

由圖1可知，配對樣本T檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，春夏季‘烏牛早’鮮葉含量值分別為32.68%和16.92%，在紅茶的整個加工工藝中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間多酚含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD 重比較顯著性分析結(jié)果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間多酚含量具有顯著性差異（P＜0.05）；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間除發(fā)酵與干燥工序樣品組之間多酚差異不顯著外，其他之間具有顯著性差異（P＜0.05）。

圖1 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程茶多酚含量變化Figure 1 Study on the change of total polyphenol content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.2 咖啡堿

由圖2可知，配對樣本T檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中含量值分別為5.0%和2.86%，在整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間咖啡堿含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結(jié)果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間咖啡堿含量具有顯著性差異（P＜0.05）；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間咖啡堿含量具有顯著性差異（P＜0.05），其中鮮葉與揉捻工序樣品組之間和發(fā)酵與干燥工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖2 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程咖啡堿含量變化Figure 2 Study on the change of caffeine content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.3 游離氨基酸

由圖3可知，配對樣本T檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中含量值分別為7.60%和3.53%，在紅茶的整個加工工藝中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間游離氨基酸含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結(jié)果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間游離氨基酸含量具有顯著性差異（P＜0.05）；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間游離氨基酸含量具有顯著性差異（P＜0.05），其中發(fā)酵與干燥工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖3 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程游離氨基酸含量變化Figure 3 Study on free Amino acid content of spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.4 可溶性蛋白

由圖4可知，配對樣本T檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中可溶性蛋白含量分別為7.58%和6.02%，在紅茶的整個加工工藝中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間可溶性蛋白含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結(jié)果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間可溶性蛋白含量具有顯著性差異（P＜0.05），其中鮮葉與萎凋工序樣品組之間、揉捻與發(fā)酵工序樣品組之間差異不顯著除外；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間可溶性蛋白含量具有顯著性差異（P＜0.01），其中揉捻與發(fā)酵工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖4 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程可溶性蛋白含量變化Figure 4 Study on the changes of soluble protein content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.5 可溶性糖

由圖5可知，夏季樣品中可溶性糖含量普遍高于春季樣品。配對樣本T檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中可溶性糖含量值分別為0.58%和1.79%，在紅茶的整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間可溶性糖含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結(jié)果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間可溶性糖含量具有顯著性差異（P＜0.05），其中鮮葉與揉捻工序樣品組之間差異不顯著除外；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間可溶性糖含量具有顯著性差異（P＜0.01），其中揉捻與發(fā)酵工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖5 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程可溶性糖含量變化Figure 5 Study on the changes of soluble polysaccharide content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.6 總黃酮

由圖6可知，配對樣本T檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中總黃酮含量值分別為1.25%和0.99%，在紅茶的整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間總黃酮含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結(jié)果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間總黃酮含量具有顯著性差異（P＜0.01）；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間總黃酮含量具有顯著性差異（P＜0.01），其中揉捻與發(fā)酵工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖6 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程總黃酮含量變化Figure 6 Study on the change of total flavonoid content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.7 水浸出物

由圖7可知，配對樣本T檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中水浸出物含量值分別為42.87%和55.51%，在紅茶整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間水浸出物含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結(jié)果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間水浸出物含量差異不顯著，其中發(fā)酵工序與其它工序組樣品之間都呈現(xiàn)差異極顯著（P＜0.01）；夏季‘烏牛早’紅茶加工過程中鮮葉工序與萎凋工序（P＜0.05）、發(fā)酵工序（P＜0.01）和干燥工序（P＜0.01）樣品組之間分別呈現(xiàn)顯著性差異，其中干燥工序與其它工序樣品組之間都呈現(xiàn)差異極顯著（P＜0.01）。

圖7 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程水浸出物含量變化Figure 7 Study on the change of water extract content during the processing of spring and summer Wuniuzao black tea

2.2 ‘烏牛早’紅茶中茶黃素和兒茶素單體組分及含量

兒茶素（EC、EGC、ECG、EGCG等）是一類酚類活性物質(zhì)，其中成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）具有抗氧化[21]、抗腫瘤[22]、抗心血管[23]和抗糖尿病[24]等功效。茶黃素具有調(diào)節(jié)血糖、血脂、抵抗腫瘤生長、延緩衰老等多種生物學(xué)活性，其作用機(jī)制包括NF-κB、PI3K-Akt、AP-1等多種信號通路[21-33]。茶鮮葉中兒茶素酚羥基在酶介導(dǎo)下氧化成鄰醌，鄰醌氧化聚合、縮合形成茶黃素類等物質(zhì)[34]。

由表2可知，通過9個標(biāo)準(zhǔn)品以及6個‘烏牛早’春夏紅茶干茶樣品的高效液相檢測，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示春、夏季‘烏牛早’成品茶中茶黃素含量值分別為0.467%和0.318%，在紅茶整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間茶黃素總量具有差異極顯著性（P＜0.01）；此外，春、夏季‘烏牛早’紅茶茶黃素各組分單體含量兩兩之間含量差異顯著（P＜0.05），其中TFDG組分在春、夏紅茶樣品之間不呈現(xiàn)差異顯著性。

表2 ‘烏牛早’紅茶成品兒茶素和茶黃素單體組分及含量 （%）Table 2 Contents of catechins, theaflavins and their monomer components in black tea products of Wuniuzao（%）

春、夏季‘烏牛早’紅茶成品中兒茶素總量分別為1.805%和0.589%，在紅茶整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間兒茶素總量具有差異極顯著性（P＜0.01），春、夏季‘烏牛早’紅茶兒茶素總量各組分單體含量兩兩之間含量差異顯著（P＜0.05）。此外，春季‘烏牛早’紅茶中兒茶素、茶黃素及其組分含量整體上顯著高于夏季紅茶。這與梁爽等[30]研究的結(jié)論一致，‘烏牛早’可優(yōu)先作為夏茶工夫紅茶開發(fā)的品種。

2.3 ‘烏牛早’紅茶水提物不同處理組線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因Real-Time PCR結(jié)果

秀麗隱桿線蟲是一種具有成本低、周期短和脂質(zhì)代謝通路研究全面等優(yōu)點(diǎn)的模式生物。daf 2編碼一種胰島素受體，參與線蟲體內(nèi)的胰島素信號通路，是線蟲體內(nèi)代謝調(diào)節(jié)的高度保守的通路[20]。daf 7可以通過神經(jīng)元調(diào)節(jié)線蟲體內(nèi)的脂肪水平，使線蟲代謝在不同環(huán)境下處于平衡狀態(tài)，daf 16的突變能抑制daf 2突變的全部表型，如長壽、生育力降低等[29]。通過甘油三酯快速檢測試劑盒檢測結(jié)果顯示在高脂組線蟲與對照組甘油三酯含量具有差異顯著性（P＜0.05），表明本試驗(yàn)已經(jīng)成功建立高膽固醇線蟲高脂（肥胖）模型。

2.3.1 ‘烏牛早’春紅茶水提物干預(yù)線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA表達(dá)分析

‘烏牛早’春紅茶成品水提物干預(yù)秀麗線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達(dá)含量分別如圖8所示。應(yīng)用熒光定量PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf16）mRNA相對表達(dá)量在三種組別線蟲樣品中高低順序?yàn)椋骸疄跖Ｔ纭杭t茶干預(yù)組＞常規(guī)組＞肥胖組，組間各個基因的mRNA相對表達(dá)量均呈極顯著性差異水平（P＜0.01）。‘烏牛早’春紅茶水提物干預(yù)組中daf 2、daf 7和daf 16的基因mRNA表達(dá)量均顯著高于高脂組水平，進(jìn)一步證明‘烏牛早’春紅茶水提物能夠有效地激發(fā)daf 2、daf 7和daf 16的基因mRNA表達(dá)量升高，從而有效地抑制線蟲體內(nèi)脂肪細(xì)胞的沉積和體積增大，同時加快脂肪細(xì)胞代謝的分解過程，進(jìn)而對線蟲具有降脂減肥的功效。

圖8 不同組別線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA含量差異性分析Figure 8 Difference analysis of mRNA content of lipid regulation genes（daf2、daf7 and daf16）in different groups of C. elegans

2.3.2 ‘烏牛早’夏紅茶水提物干預(yù)線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA表達(dá)分析

‘烏牛早’夏紅茶成品水提物干預(yù)秀麗線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達(dá)含量分別如圖9所示。應(yīng)用熒光定量PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，脂質(zhì)調(diào)控基因daf 2的mRNA相對表達(dá)量在三種組別線蟲樣品中高低順序?yàn)椋骸疄跖Ｔ纭募t茶干預(yù)組＞高脂組＞常規(guī)組，組間各個基因的mRNA相對表達(dá)量均呈極顯著性差異水平（P＜0.01），顯示‘烏牛早’夏紅茶水提物能夠有效激發(fā)daf 2和daf 16基因mRNA表達(dá)量升高，對高脂組線蟲具有明顯的降脂功效；此外，‘烏牛早’夏紅茶水提物干預(yù)組中daf 7基因mRNA表達(dá)量顯著低于高脂組和正常組水平，表明‘烏牛早’夏紅茶水提物能夠顯著抑制daf 7基因mRNA表達(dá)量升高，有效地抑制線蟲體內(nèi)脂肪細(xì)胞增大，同時減緩脂肪細(xì)胞代謝的合成過程，從而佐證‘烏牛早’夏紅茶的功能成分對線蟲具有降脂減肥功效。

圖9 不同組別線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA含量差異性分析Figure 9 Difference analysis of mRNA content of lipid regulation genes（daf2、daf7 and daf16）in different groups of C. elegans

2.4 ‘烏牛早’紅茶功能成分與秀麗線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對含量的關(guān)聯(lián)性

2.4.1 秀麗線脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達(dá)量與春紅茶主要功能成分的相關(guān)性

試驗(yàn)分析結(jié)果表明，正常組線蟲daf 2基因mRNA相對表達(dá)量與游離氨基酸、可溶性糖、可溶性蛋白和水浸出物分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.90，r = 0.97，r = 0.92，r =-0.98）， 與茶黃素和兒茶素相應(yīng)組分如TF、TF-3-G、茶黃素總量、C、EGCG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.99，r = 0.92，r = 0.98，r =0.79，r = -0.98, r =-0.90），與ECG含量具有顯著性負(fù)相關(guān)（r =-0.997，P＜0.05）；高脂組線蟲daf 2基因mRNA相對表達(dá)量與總多酚、咖啡堿和游離氨基酸的含量分別具有高度相關(guān)性（r = 0.90，r = 0.87，r = 0.62），與TFDG、TF-3’-G、C和EC含量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.98，r = 0.76，r =-0.76，r =-0.84）， 與總黃酮含量具有極顯著負(fù)相關(guān)性（r =-1.00，P＜0.01）；‘烏牛早’春紅茶水提物組線蟲daf 2基因mRNA相對表達(dá)量與游離氨基酸、可溶性糖、可溶性蛋白和水浸出物含量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.89，r = 0.97，r = 0.93，r =-0.98），與 TF、TF-3-G、茶黃素總量、C、EGCG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.99，r = 0.92，r = 0.98，r = 0.79，r = -0.98，r =-0.90），與ECG含量具有顯著性負(fù)相關(guān)（r=-0.998，P＜0.05）。

同時分析結(jié)果顯示，正常組線蟲daf 7基因mRNA相對表達(dá)量與與游離氨基酸、可溶性糖、可溶性蛋白和水浸出物分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r= 0.85，r =-0.95，r =-0.96，r = 0.99），與 TF、TF-3-G、茶黃素總量、EGC、C、EGCG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.97，r =-0.88，r =-0.96，r = 0.72，r =-0.73，r = 1.00，r = 0.86），與ECG含量具有極顯著正相關(guān)性（r = 1.00，P＜0.01）；高脂組中daf 7基因mRNA相對表達(dá)量與總黃酮含量具有高度相關(guān)性（r = 0.87），與TFDG、TF-3’-G、EGC分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r=-0.94，r =-0.98，r = 0.92），與EC具有顯著正相關(guān)性（r = 0.999，P＜0.05）；‘烏牛早’春紅茶水提物組中daf 7基因mRNA相對表達(dá)量與總黃酮和可溶性蛋白分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.81，r = 0.73），與TFDG、EGC和EC分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.90，r = 1.00，r = -0.96），與EC具有顯著負(fù)相關(guān)性（r =-0.998，P＜0.05）。

同理，正常組線蟲daf 16基因mRNA相對表達(dá)量與總黃酮、可溶性蛋白分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.75，r = 0.79），與TFDG、EGC、EC分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.86，r = 0.98，r =-0.99），與TF-3’-G具有顯著正相關(guān)性（r = 1.0，P＜0.01）；高脂組線蟲daf 16基因mRNA相對表達(dá)量與水浸出物含量具有顯著性相關(guān)（r =1.00，P＜0.05），與游離氨基酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.79，r =-0.91，r =-0.98），與TF、TF-3-G、茶黃素總量、EGC、ECG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.93 ，r =-0.82，r =-0.92，r = 0.79，r = 0.99，r = 0.80），與EGCG含量具有極顯著正相關(guān)性（r = 1.00，P＜0.01）；‘烏牛早’春紅茶水提物組線蟲daf 16基因mRNA相對表達(dá)量與總黃酮含量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.95），與 TFDG、TF-3-G、TF-3’-G、EGC、EC分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.99，r = 0.93，r=-0.84，r = -0.97）。

2.4.2 秀麗線脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達(dá)量與夏紅茶主要功能成分的相關(guān)性

分析結(jié)果表明，正常組線蟲daf 2基因mRNA相對表達(dá)量與總多酚、咖啡堿、總黃酮分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.87，r = 0.86，r =-0.87），與水浸出物和水分含量具有極顯著相關(guān)性（r = 1.00，r =-1.00，P＜0.01），與茶黃素和兒茶素相應(yīng)組分如TFDG、茶黃素總量、EGCG、ECG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.93，r =-0.99，r =-0.87，r =-0.74，r =-0.99）；高脂組線蟲daf 2基因mRNA相對表達(dá)量與總多酚、咖啡堿、總黃酮、水浸出物和水分的含量分別具有高度相關(guān)性（r =-0.76，r = 0.95，r =-0.76，r = 0.98，r =-0.98）， 與TFDG、TF-3’-G、EGC、茶黃素總量、EGCG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.98，r=-0.73，r =-0.79，r =-0.94，r =-0.95，r =-0.95）；‘烏牛早’夏紅茶水提物組線蟲daf 2基因mRNA相對表達(dá)量與總多酚、咖啡堿、總黃酮分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.87，r =-0.87，r = 0.87），與水浸出物和水分含量分別具有極顯著相關(guān)性（r =-1.00，r = 1.00，P＜0.01），與TFDG、茶黃素總量、EGCG、ECG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.93，r = 0.99，r = 0.87，r = 0.74，r = 0.99）。

分析結(jié)果還顯示，正常組線蟲daf 7基因mRNA相對表達(dá)量與咖啡堿、可溶性蛋白分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.81，r = 0.82），與TF、TFDG、TF-3-G、TF-3’-G、EGC、C 和 EGCG總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.99 ，r =-0.70，r =-0.98，r =-0.99，r =-0.96，r =-0.81，r =-0.81），與可溶性糖含量具有極顯著正相關(guān)性（r = 1.00，P＜0.01）；高脂組中daf 7基因mRNA相對表達(dá)量與游離氨基酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量具有高度相關(guān)性（r = 0.78，r =-0.97，r =-0.94）， 與 TF、TF-3-G、TF-3’-G、EGC和C分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.98，r = 0.89，r = 0.99，r = 0.85，r = 0.94）；‘烏牛早’夏紅茶水提物組中daf 7基因mRNA相對表達(dá)量與總多酚、游離氨基酸、總黃酮、可溶性蛋白、水浸出物和水分含量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.98，r = 0.95，r =-0.98，r =-0.79，r =0.77，r =-0.76），與EC、茶黃素總量、兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.99，r =-0.85，r=-0.83），與ECG具有極顯著負(fù)相關(guān)性（r =-1.00，P＜0.01）。

同理，正常組線蟲daf 16基因mRNA相對表達(dá)量與總多酚、游離氨基酸、總黃酮、可溶性蛋白、水浸出物和水分含量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.97 ，r = 0.96，r =-0.97，r =-0.81，r= 0.74，r =-0.73），與C、EC、茶黃素總量和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.83，r = 0.99，r =-0.82，r =-0.81），與ECG具有極顯著負(fù)相關(guān)性（r =-1.00，P＜0.01）；高脂組線蟲daf 16基因mRNA相對表達(dá)量與總多酚、游離氨基酸、總黃酮、水浸出物和水分含量分別具有高度相關(guān)性（r =-0.98，r = 0.74，r = -0.98，r = 0.96，r=-0.95），與TFDG、EC、茶黃素總量、ECG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.78，r =0.86，r =-0.99，r =-0.91，r =-0.99）；‘烏牛早’夏紅茶水提物組線蟲daf 16基因mRNA相對表達(dá)量與可溶性糖、水浸出物和水分含量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r = 0.83，r = 0.86，r =-0.87），與咖啡堿含量具有極顯著正相關(guān)性（r = 1.00，P＜ 0.01）， 與 TF、TFDG、TF-3-G、TF-3’-G、EGC、茶黃素總量和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關(guān)性（r =-0.76，r =-0.99，r =-0.91，r =-0.72，r =-0.95，r =-0.78，r =-0.80），與 EGCG 含量具有極顯著負(fù)相關(guān)性（r =-1.00，P＜0.01）。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)研究通過采用化學(xué)計(jì)量法、高效液相色譜和熒光定量PCR等多種檢測方式分析‘烏牛早’紅茶中的功能成分在加工過程中的變化規(guī)律，同時探索‘烏牛早’紅茶的水提物對秀麗隱桿線蟲脂質(zhì)調(diào)控基因的表達(dá)影響效應(yīng)。結(jié)果顯示，‘烏牛早’春紅茶和夏紅茶在加工過程中的功能成分如茶多酚、咖啡堿、游離氨基酸、可溶性蛋白質(zhì)、可溶性糖、總黃酮、水浸出物和兒茶素總量等之間具有差異極顯著性（P＜0.01），兒茶素各組分單體含量具有差異顯著性（P＜0.05）；應(yīng)用熒光定量PCR檢測結(jié)果表明，脂質(zhì)調(diào)控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達(dá)量在三種組別線蟲樣品中高低順序?yàn)椋骸疄跖Ｔ纭海ㄏ模┘t茶干預(yù)組＞常規(guī)組＞肥胖組，組間各個基因的mRNA相對表達(dá)量均呈極顯著性差異水平（P＜0.01），表明‘烏牛早’紅茶水提物能夠有效地抑制線蟲體內(nèi)脂肪細(xì)胞的沉積和體積增大，對高脂線蟲具有明顯的降脂功效。