葉江成，趙 進，張一帆，龔明秀

1. 中國計量大學 生命科學學院/食品加工與質量控制研究所，浙江 杭州 310018；2 .浙江省生物計量及檢驗檢疫重點實驗室，浙江 杭州 310018

肥胖是全世界常見的營養(yǎng)性疾病之一，肥胖問題是世界性公共衛(wèi)生問題，中國已成為全球肥胖人口最多的國家之一[1]。紅茶為全發(fā)酵茶，其功能成分具有安全性強、無毒副作用等特點，如茶多酚、茶多糖、茶色素（茶黃素、茶紅素和茶褐素）等具有調控脂質代謝、改善血脂異常、緩解氧化應激以及調節(jié)腸道菌群紊亂等降脂減肥作用[2-9]。紅茶加工經鮮葉萎凋、揉捻、發(fā)酵、干燥等工序制作而成，在加工過程中鮮葉富含的茶多酚類物質經氧化作用變成香氣和發(fā)酵產物等成分，形成紅茶獨有的色、香、味品質特征。隨著人們健康意識的增強，對紅茶品質的追求也隨之提升。研究發(fā)現(xiàn)，紅茶的化學組成[10]、茶樹品種[11]、產地環(huán)境[12]、加工工藝[13]等因素影響紅茶品質。李金婷[14]以‘烏牛早’茶樹鮮葉為原料加工紅茶，發(fā)現(xiàn)不同加工工藝對‘烏牛早’紅茶的品質影響明顯，在紅茶加工中引入曬青、發(fā)酵（控溫控濕）工藝制成的紅茶品質優(yōu)、形質佳。包建豐[15]經實踐確定‘烏牛早’、‘迎霜’‘鳩坑’等是制作松陽紅茶品質較為理想的茶樹品種。

‘烏牛早’原產浙江省永嘉縣，屬于無性繁育系特早芽茶樹良種，樹勢生長旺盛，品質性狀穩(wěn)定，經濟效益高，符合產業(yè)發(fā)展的需求，目前已在全國范圍得到種植推廣。近年來，隨著紅茶熱的興起，各地開發(fā)紅茶的積極性日益高漲。本試驗研究采用化學計量法、高效液相色譜和熒光定量PCR等多種檢測方式分析‘烏牛早’紅茶中的功能成分在加工過程中的變化規(guī)律，同時探索‘烏牛早’紅茶的水提物對秀麗隱桿線蟲（簡稱線蟲）脂質調控基因的表達影響效應，旨在為充分利用‘烏牛早’優(yōu)質茶樹品種優(yōu)勢資源等提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

鮮葉原料：按照“一芽二葉或三葉”的標準，分別于2021年5月1日和7月10日采摘位于浙江省永嘉縣浙江省三農茶業(yè)有限公司同一‘烏牛早’茶園基地的‘烏牛早’茶樹品種鮮葉為原料并在該公司茶葉加工車間按紅茶加工工藝制作紅茶樣。

秀麗隱桿線蟲：野生型線蟲株，大腸桿菌E.coil OP 50，購買于福建上源生物科學技術有限公司。線蟲試驗分為4組，分別為常規(guī)組（對照組）、肥胖組（高膽固醇組）、‘烏牛早’春紅茶水提物處理組（春紅茶組）和‘烏牛早’夏紅茶水提物處理組（夏紅茶組）。

1.2 試驗方法

‘烏牛早’紅茶樣制作：按傳統(tǒng)紅茶工藝加工制成。

主要功能成分測定：水浸出物含量參照國家標準GB/T 8305—2013方法測定；咖啡堿含量參照國家標準GB/T 8312—2013方法測定；茶多酚含量參照國家標準GB/T 8312—2018方法測定；游離氨基酸含量參照國家標準GB/T 8314—2013方法測定；可溶性糖含量采用硫酸苯酚法[16]；總黃酮含量參照分光光度法測定[17]；兒茶素和茶黃素含量測定分別采用國家標準GB/T 8313—2018和GB/T 30483—2013方法測定；茶葉水提物的制備參照Li M[18]的方法并完善步驟為：用95℃熱水按料液比1∶20浸提‘烏牛早’紅茶5 min，趁熱抽濾水提取物并收集濾液，然后在-55℃冷凍干燥24 h得到茶水提取物凍干粉，調配水提物最佳干預濃度為100 mg/L；實時熒光定量PCR參考潘聯(lián)云[19]與王瑤[20]方法。

1.3 Real-Time PCR檢測

購買上海生物工程有限公司試劑盒，按照說明書進行提取RNA、檢測濃度和純度。依照M-MLV反轉錄酶的說明進行cDNA的合成（Promega）。采用Primer Premier 6.0和Beacon designer 7.8軟件進行熒光定量PCR引物設計，送生工生物工程（上海）股份有限公司負責合成（引物序列見表1）。

表1 秀麗線蟲脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）實時定量PCR所用引物Table 1 Primers used for two lipid regulation genes from C. elegans for rqRT-PCR

Real-Time PCR。反應體系（20 μL）：SDW 8.0 μL，Power SYBR? Green Master Mix 10.0 μL，F(xiàn)orward Primer （10 μM） 0.5 μL，Reverse Primer（10 μM）0.5 μL，cDNA 1.0 μL；反應條件：95℃，1 min，40個循環(huán)（95℃，15 sec，63℃，25 sec，收集熒光），55℃ ～ 95℃熔點曲線分析；每個樣品重復三次，3個基因相對表達水平以2（Ct內參基因-Ct目的基因）進行統(tǒng)計分析。

1.4 數據統(tǒng)計分析

采用IBM SPSS Statistics 20.0數據處理軟件進行相關性與差異顯著性分析，水平間的比較用LSD法和Ducan法，以平均值±標準差顯示檢測指標最終數據；P＜0.01為差異極顯著，P＜0.05為差異顯著。

2 結果與分析

2.1 ‘烏牛早’紅茶不同工序在制品生化成分含量比較

2.1.1 茶多酚

由圖1可知，配對樣本T檢驗分析結果顯示，春夏季‘烏牛早’鮮葉含量值分別為32.68%和16.92%，在紅茶的整個加工工藝中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間多酚含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD 重比較顯著性分析結果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間多酚含量具有顯著性差異（P＜0.05）；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間除發(fā)酵與干燥工序樣品組之間多酚差異不顯著外，其他之間具有顯著性差異（P＜0.05）。

圖1 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程茶多酚含量變化Figure 1 Study on the change of total polyphenol content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.2 咖啡堿

由圖2可知，配對樣本T檢驗分析結果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中含量值分別為5.0%和2.86%，在整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間咖啡堿含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間咖啡堿含量具有顯著性差異（P＜0.05）；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間咖啡堿含量具有顯著性差異（P＜0.05），其中鮮葉與揉捻工序樣品組之間和發(fā)酵與干燥工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖2 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程咖啡堿含量變化Figure 2 Study on the change of caffeine content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.3 游離氨基酸

由圖3可知，配對樣本T檢驗分析結果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中含量值分別為7.60%和3.53%，在紅茶的整個加工工藝中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間游離氨基酸含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間游離氨基酸含量具有顯著性差異（P＜0.05）；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間游離氨基酸含量具有顯著性差異（P＜0.05），其中發(fā)酵與干燥工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖3 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程游離氨基酸含量變化Figure 3 Study on free Amino acid content of spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.4 可溶性蛋白

由圖4可知，配對樣本T檢驗分析結果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中可溶性蛋白含量分別為7.58%和6.02%，在紅茶的整個加工工藝中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間可溶性蛋白含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間可溶性蛋白含量具有顯著性差異（P＜0.05），其中鮮葉與萎凋工序樣品組之間、揉捻與發(fā)酵工序樣品組之間差異不顯著除外；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間可溶性蛋白含量具有顯著性差異（P＜0.01），其中揉捻與發(fā)酵工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖4 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程可溶性蛋白含量變化Figure 4 Study on the changes of soluble protein content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.5 可溶性糖

由圖5可知，夏季樣品中可溶性糖含量普遍高于春季樣品。配對樣本T檢驗分析結果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中可溶性糖含量值分別為0.58%和1.79%，在紅茶的整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間可溶性糖含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間可溶性糖含量具有顯著性差異（P＜0.05），其中鮮葉與揉捻工序樣品組之間差異不顯著除外；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間可溶性糖含量具有顯著性差異（P＜0.01），其中揉捻與發(fā)酵工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖5 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程可溶性糖含量變化Figure 5 Study on the changes of soluble polysaccharide content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.6 總黃酮

由圖6可知，配對樣本T檢驗分析結果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中總黃酮含量值分別為1.25%和0.99%，在紅茶的整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間總黃酮含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間總黃酮含量具有顯著性差異（P＜0.01）；夏季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間總黃酮含量具有顯著性差異（P＜0.01），其中揉捻與發(fā)酵工序樣品組之間差異不顯著除外。

圖6 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程總黃酮含量變化Figure 6 Study on the change of total flavonoid content in spring and summer Wuniuzao black tea during processing

2.1.7 水浸出物

由圖7可知，配對樣本T檢驗分析結果顯示，春、夏季‘烏牛早’鮮葉中水浸出物含量值分別為42.87%和55.51%，在紅茶整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間水浸出物含量具有差異極顯著性（P＜0.01）；通過LSD多重比較顯著性分析結果表明：春季‘烏牛早’紅茶加工各工序樣品組兩兩之間水浸出物含量差異不顯著，其中發(fā)酵工序與其它工序組樣品之間都呈現(xiàn)差異極顯著（P＜0.01）；夏季‘烏牛早’紅茶加工過程中鮮葉工序與萎凋工序（P＜0.05）、發(fā)酵工序（P＜0.01）和干燥工序（P＜0.01）樣品組之間分別呈現(xiàn)顯著性差異，其中干燥工序與其它工序樣品組之間都呈現(xiàn)差異極顯著（P＜0.01）。

圖7 春夏季‘烏牛早’紅茶制品加工過程水浸出物含量變化Figure 7 Study on the change of water extract content during the processing of spring and summer Wuniuzao black tea

2.2 ‘烏牛早’紅茶中茶黃素和兒茶素單體組分及含量

兒茶素（EC、EGC、ECG、EGCG等）是一類酚類活性物質，其中成分表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）具有抗氧化[21]、抗腫瘤[22]、抗心血管[23]和抗糖尿病[24]等功效。茶黃素具有調節(jié)血糖、血脂、抵抗腫瘤生長、延緩衰老等多種生物學活性，其作用機制包括NF-κB、PI3K-Akt、AP-1等多種信號通路[21-33]。茶鮮葉中兒茶素酚羥基在酶介導下氧化成鄰醌，鄰醌氧化聚合、縮合形成茶黃素類等物質[34]。

由表2可知，通過9個標準品以及6個‘烏牛早’春夏紅茶干茶樣品的高效液相檢測，統(tǒng)計分析結果顯示春、夏季‘烏牛早’成品茶中茶黃素含量值分別為0.467%和0.318%，在紅茶整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間茶黃素總量具有差異極顯著性（P＜0.01）；此外，春、夏季‘烏牛早’紅茶茶黃素各組分單體含量兩兩之間含量差異顯著（P＜0.05），其中TFDG組分在春、夏紅茶樣品之間不呈現(xiàn)差異顯著性。

表2 ‘烏牛早’紅茶成品兒茶素和茶黃素單體組分及含量 （%）Table 2 Contents of catechins, theaflavins and their monomer components in black tea products of Wuniuzao（%）

春、夏季‘烏牛早’紅茶成品中兒茶素總量分別為1.805%和0.589%，在紅茶整個加工過程中春季和夏季‘烏牛早’2組樣品之間兒茶素總量具有差異極顯著性（P＜0.01），春、夏季‘烏牛早’紅茶兒茶素總量各組分單體含量兩兩之間含量差異顯著（P＜0.05）。此外，春季‘烏牛早’紅茶中兒茶素、茶黃素及其組分含量整體上顯著高于夏季紅茶。這與梁爽等[30]研究的結論一致，‘烏牛早’可優(yōu)先作為夏茶工夫紅茶開發(fā)的品種。

2.3 ‘烏牛早’紅茶水提物不同處理組線蟲脂質調控基因Real-Time PCR結果

秀麗隱桿線蟲是一種具有成本低、周期短和脂質代謝通路研究全面等優(yōu)點的模式生物。daf 2編碼一種胰島素受體，參與線蟲體內的胰島素信號通路，是線蟲體內代謝調節(jié)的高度保守的通路[20]。daf 7可以通過神經元調節(jié)線蟲體內的脂肪水平，使線蟲代謝在不同環(huán)境下處于平衡狀態(tài)，daf 16的突變能抑制daf 2突變的全部表型，如長壽、生育力降低等[29]。通過甘油三酯快速檢測試劑盒檢測結果顯示在高脂組線蟲與對照組甘油三酯含量具有差異顯著性（P＜0.05），表明本試驗已經成功建立高膽固醇線蟲高脂（肥胖）模型。

2.3.1 ‘烏牛早’春紅茶水提物干預線蟲脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA表達分析

‘烏牛早’春紅茶成品水提物干預秀麗線蟲脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達含量分別如圖8所示。應用熒光定量PCR檢測結果發(fā)現(xiàn)，脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf16）mRNA相對表達量在三種組別線蟲樣品中高低順序為：‘烏牛早’春紅茶干預組＞常規(guī)組＞肥胖組，組間各個基因的mRNA相對表達量均呈極顯著性差異水平（P＜0.01）?！疄跖Ｔ纭杭t茶水提物干預組中daf 2、daf 7和daf 16的基因mRNA表達量均顯著高于高脂組水平，進一步證明‘烏牛早’春紅茶水提物能夠有效地激發(fā)daf 2、daf 7和daf 16的基因mRNA表達量升高，從而有效地抑制線蟲體內脂肪細胞的沉積和體積增大，同時加快脂肪細胞代謝的分解過程，進而對線蟲具有降脂減肥的功效。

圖8 不同組別線蟲脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA含量差異性分析Figure 8 Difference analysis of mRNA content of lipid regulation genes（daf2、daf7 and daf16）in different groups of C. elegans

2.3.2 ‘烏牛早’夏紅茶水提物干預線蟲脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA表達分析

‘烏牛早’夏紅茶成品水提物干預秀麗線蟲脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達含量分別如圖9所示。應用熒光定量PCR檢測結果發(fā)現(xiàn)，脂質調控基因daf 2的mRNA相對表達量在三種組別線蟲樣品中高低順序為：‘烏牛早’夏紅茶干預組＞高脂組＞常規(guī)組，組間各個基因的mRNA相對表達量均呈極顯著性差異水平（P＜0.01），顯示‘烏牛早’夏紅茶水提物能夠有效激發(fā)daf 2和daf 16基因mRNA表達量升高，對高脂組線蟲具有明顯的降脂功效；此外，‘烏牛早’夏紅茶水提物干預組中daf 7基因mRNA表達量顯著低于高脂組和正常組水平，表明‘烏牛早’夏紅茶水提物能夠顯著抑制daf 7基因mRNA表達量升高，有效地抑制線蟲體內脂肪細胞增大，同時減緩脂肪細胞代謝的合成過程，從而佐證‘烏牛早’夏紅茶的功能成分對線蟲具有降脂減肥功效。

圖9 不同組別線蟲脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA含量差異性分析Figure 9 Difference analysis of mRNA content of lipid regulation genes（daf2、daf7 and daf16）in different groups of C. elegans

2.4 ‘烏牛早’紅茶功能成分與秀麗線蟲脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對含量的關聯(lián)性

2.4.1 秀麗線脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達量與春紅茶主要功能成分的相關性

試驗分析結果表明，正常組線蟲daf 2基因mRNA相對表達量與游離氨基酸、可溶性糖、可溶性蛋白和水浸出物分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.90，r = 0.97，r = 0.92，r =-0.98）， 與茶黃素和兒茶素相應組分如TF、TF-3-G、茶黃素總量、C、EGCG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.99，r = 0.92，r = 0.98，r =0.79，r = -0.98, r =-0.90），與ECG含量具有顯著性負相關（r =-0.997，P＜0.05）；高脂組線蟲daf 2基因mRNA相對表達量與總多酚、咖啡堿和游離氨基酸的含量分別具有高度相關性（r = 0.90，r = 0.87，r = 0.62），與TFDG、TF-3’-G、C和EC含量分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.98，r = 0.76，r =-0.76，r =-0.84）， 與總黃酮含量具有極顯著負相關性（r =-1.00，P＜0.01）；‘烏牛早’春紅茶水提物組線蟲daf 2基因mRNA相對表達量與游離氨基酸、可溶性糖、可溶性蛋白和水浸出物含量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.89，r = 0.97，r = 0.93，r =-0.98），與 TF、TF-3-G、茶黃素總量、C、EGCG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.99，r = 0.92，r = 0.98，r = 0.79，r = -0.98，r =-0.90），與ECG含量具有顯著性負相關（r=-0.998，P＜0.05）。

同時分析結果顯示，正常組線蟲daf 7基因mRNA相對表達量與與游離氨基酸、可溶性糖、可溶性蛋白和水浸出物分別呈現(xiàn)高度相關性（r= 0.85，r =-0.95，r =-0.96，r = 0.99），與 TF、TF-3-G、茶黃素總量、EGC、C、EGCG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.97，r =-0.88，r =-0.96，r = 0.72，r =-0.73，r = 1.00，r = 0.86），與ECG含量具有極顯著正相關性（r = 1.00，P＜0.01）；高脂組中daf 7基因mRNA相對表達量與總黃酮含量具有高度相關性（r = 0.87），與TFDG、TF-3’-G、EGC分別呈現(xiàn)高度相關性（r=-0.94，r =-0.98，r = 0.92），與EC具有顯著正相關性（r = 0.999，P＜0.05）；‘烏牛早’春紅茶水提物組中daf 7基因mRNA相對表達量與總黃酮和可溶性蛋白分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.81，r = 0.73），與TFDG、EGC和EC分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.90，r = 1.00，r = -0.96），與EC具有顯著負相關性（r =-0.998，P＜0.05）。

同理，正常組線蟲daf 16基因mRNA相對表達量與總黃酮、可溶性蛋白分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.75，r = 0.79），與TFDG、EGC、EC分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.86，r = 0.98，r =-0.99），與TF-3’-G具有顯著正相關性（r = 1.0，P＜0.01）；高脂組線蟲daf 16基因mRNA相對表達量與水浸出物含量具有顯著性相關（r =1.00，P＜0.05），與游離氨基酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.79，r =-0.91，r =-0.98），與TF、TF-3-G、茶黃素總量、EGC、ECG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.93 ，r =-0.82，r =-0.92，r = 0.79，r = 0.99，r = 0.80），與EGCG含量具有極顯著正相關性（r = 1.00，P＜0.01）；‘烏牛早’春紅茶水提物組線蟲daf 16基因mRNA相對表達量與總黃酮含量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.95），與 TFDG、TF-3-G、TF-3’-G、EGC、EC分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.99，r = 0.93，r=-0.84，r = -0.97）。

2.4.2 秀麗線脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達量與夏紅茶主要功能成分的相關性

分析結果表明，正常組線蟲daf 2基因mRNA相對表達量與總多酚、咖啡堿、總黃酮分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.87，r = 0.86，r =-0.87），與水浸出物和水分含量具有極顯著相關性（r = 1.00，r =-1.00，P＜0.01），與茶黃素和兒茶素相應組分如TFDG、茶黃素總量、EGCG、ECG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.93，r =-0.99，r =-0.87，r =-0.74，r =-0.99）；高脂組線蟲daf 2基因mRNA相對表達量與總多酚、咖啡堿、總黃酮、水浸出物和水分的含量分別具有高度相關性（r =-0.76，r = 0.95，r =-0.76，r = 0.98，r =-0.98）， 與TFDG、TF-3’-G、EGC、茶黃素總量、EGCG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.98，r=-0.73，r =-0.79，r =-0.94，r =-0.95，r =-0.95）；‘烏牛早’夏紅茶水提物組線蟲daf 2基因mRNA相對表達量與總多酚、咖啡堿、總黃酮分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.87，r =-0.87，r = 0.87），與水浸出物和水分含量分別具有極顯著相關性（r =-1.00，r = 1.00，P＜0.01），與TFDG、茶黃素總量、EGCG、ECG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.93，r = 0.99，r = 0.87，r = 0.74，r = 0.99）。

分析結果還顯示，正常組線蟲daf 7基因mRNA相對表達量與咖啡堿、可溶性蛋白分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.81，r = 0.82），與TF、TFDG、TF-3-G、TF-3’-G、EGC、C 和 EGCG總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.99 ，r =-0.70，r =-0.98，r =-0.99，r =-0.96，r =-0.81，r =-0.81），與可溶性糖含量具有極顯著正相關性（r = 1.00，P＜0.01）；高脂組中daf 7基因mRNA相對表達量與游離氨基酸、可溶性糖和可溶性蛋白含量具有高度相關性（r = 0.78，r =-0.97，r =-0.94）， 與 TF、TF-3-G、TF-3’-G、EGC和C分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.98，r = 0.89，r = 0.99，r = 0.85，r = 0.94）；‘烏牛早’夏紅茶水提物組中daf 7基因mRNA相對表達量與總多酚、游離氨基酸、總黃酮、可溶性蛋白、水浸出物和水分含量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.98，r = 0.95，r =-0.98，r =-0.79，r =0.77，r =-0.76），與EC、茶黃素總量、兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.99，r =-0.85，r=-0.83），與ECG具有極顯著負相關性（r =-1.00，P＜0.01）。

同理，正常組線蟲daf 16基因mRNA相對表達量與總多酚、游離氨基酸、總黃酮、可溶性蛋白、水浸出物和水分含量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.97 ，r = 0.96，r =-0.97，r =-0.81，r= 0.74，r =-0.73），與C、EC、茶黃素總量和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.83，r = 0.99，r =-0.82，r =-0.81），與ECG具有極顯著負相關性（r =-1.00，P＜0.01）；高脂組線蟲daf 16基因mRNA相對表達量與總多酚、游離氨基酸、總黃酮、水浸出物和水分含量分別具有高度相關性（r =-0.98，r = 0.74，r = -0.98，r = 0.96，r=-0.95），與TFDG、EC、茶黃素總量、ECG和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.78，r =0.86，r =-0.99，r =-0.91，r =-0.99）；‘烏牛早’夏紅茶水提物組線蟲daf 16基因mRNA相對表達量與可溶性糖、水浸出物和水分含量分別呈現(xiàn)高度相關性（r = 0.83，r = 0.86，r =-0.87），與咖啡堿含量具有極顯著正相關性（r = 1.00，P＜ 0.01）， 與 TF、TFDG、TF-3-G、TF-3’-G、EGC、茶黃素總量和兒茶素總量分別呈現(xiàn)高度相關性（r =-0.76，r =-0.99，r =-0.91，r =-0.72，r =-0.95，r =-0.78，r =-0.80），與 EGCG 含量具有極顯著負相關性（r =-1.00，P＜0.01）。

3 結論

本試驗研究通過采用化學計量法、高效液相色譜和熒光定量PCR等多種檢測方式分析‘烏牛早’紅茶中的功能成分在加工過程中的變化規(guī)律，同時探索‘烏牛早’紅茶的水提物對秀麗隱桿線蟲脂質調控基因的表達影響效應。結果顯示，‘烏牛早’春紅茶和夏紅茶在加工過程中的功能成分如茶多酚、咖啡堿、游離氨基酸、可溶性蛋白質、可溶性糖、總黃酮、水浸出物和兒茶素總量等之間具有差異極顯著性（P＜0.01），兒茶素各組分單體含量具有差異顯著性（P＜0.05）；應用熒光定量PCR檢測結果表明，脂質調控基因（daf 2、daf 7和daf 16）mRNA相對表達量在三種組別線蟲樣品中高低順序為：‘烏牛早’春（夏）紅茶干預組＞常規(guī)組＞肥胖組，組間各個基因的mRNA相對表達量均呈極顯著性差異水平（P＜0.01），表明‘烏牛早’紅茶水提物能夠有效地抑制線蟲體內脂肪細胞的沉積和體積增大，對高脂線蟲具有明顯的降脂功效。