張游，靳子言，尹亞龍，吳新貴

缺血性腦卒中作為一種世界范圍內(nèi)的高殘疾率和高死亡率的疾病，嚴重威脅著公眾健康［1］。缺血性腦卒中后腦局灶性血液循環(huán)障礙會導(dǎo)致炎癥、氧自由基的產(chǎn)生、興奮性毒性、自噬、壞死和凋亡等一系列病理改變，從而造成嚴重的神經(jīng)損傷［2］。自噬是受損、變性、衰老和失去功能的細胞質(zhì)內(nèi)容物和細胞器自我降解的過程，在細胞代謝中起關(guān)鍵作用［3］。研究表明，適當(dāng)?shù)淖允杉せ羁梢酝ㄟ^降解受損蛋白質(zhì)，誘導(dǎo)新生蛋白質(zhì)合成，抑制細胞凋亡、壞死，從而改善缺血性腦損傷［4］。近年來，雷帕霉素靶蛋白（mTOR）作為調(diào)節(jié)自噬的關(guān)鍵因子，已成為治療缺血性卒中的新靶點［5］。抑制mTOR的磷酸化可誘導(dǎo)自噬反應(yīng)發(fā)生，從而改善腦缺血損傷，起到神經(jīng)保護作用［6］。電針（electroacupuncture，EA）是通過現(xiàn)代電子技術(shù)與中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的結(jié)合來進行針灸治療，越來越多的證據(jù)表明其對缺血性腦卒中有療效［7］，但具體機制尚不明確。本研究旨在探討EA對缺血性卒中大鼠的神經(jīng)保護作用，并分析EA通過mTOR信號通路改善缺血性腦卒中大鼠神經(jīng)功能障礙的機制。

1 材料與方法

1.1 主要儀器及試劑 鹽酸艾司氯胺酮注射液（江蘇恒瑞公司），鹽酸甲苯噻嗪（Sigma公司），異氟烷（深圳瑞沃德公司）；線栓（廣州佳靈公司，硅膠頭直徑0.36～0.37 mm），針灸針（Φ 0.25 mm×1.3 mm、Φ0.25 mm×2.5 mm，蘇州市華佗醫(yī)療用品有限公司），SDZ-Ⅱ型電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；2，3，5氯化三苯基四氮唑（TTC）粉末、蘇木素伊紅（HE）染色試劑盒（北京solarbio公司），尼式染液（武漢碧云天公司）；兔源抗AKT抗體、抗mTOR抗體、抗磷酸化mTOR（pmTOR）抗體（美國Cell Signaling Technology公司），山羊抗兔二抗（Elabscience公司）；Trizol總RNA提取試劑盒，熒光定量PCR試劑盒，反轉(zhuǎn)錄試劑盒以及LCB3、Beclin-1、B淋巴細胞瘤-2相關(guān)蛋白X（Bax）、β-actin引物（武漢塞維爾生物科技有限公司）；全自動冰凍研磨儀（廣州露卡公司），垂直電泳系統(tǒng)、熒光定量PCR儀（Bio-rad公司），正置顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.2 實驗動物與分組SPF級健康雄性SD大鼠75只，8～9周齡，平均體質(zhì)量（280±50）g，購自廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（桂）2020-0003。SD大鼠由廣西醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心動物房代養(yǎng)，規(guī)律攝水、攝食，環(huán)境溫度（24±4）℃，平均相對濕度55%，明暗交替12 h，實驗方案得到廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物福利與倫理委員會的許可。

將75只大鼠按隨機數(shù)字表法分為假手術(shù)（Sham）組、大腦中動脈阻塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型3 d組、EA干預(yù)3 d組、MCAO模型7 d組、EA干預(yù)7 d組，每組15只。

1.3 造模方法MCAO大鼠模型采用Longa線栓法誘導(dǎo)制備。大鼠手術(shù)前禁食過夜（12～14 h），然后通過腹腔注射氯胺酮（60 mg/kg）+甲苯噻嗪（8 mg/kg）進行麻醉；將大鼠仰臥固定，常規(guī)消毒后沿頸部正中線切開，暴露右側(cè)頸總動脈（CCA）、頸內(nèi)動脈（ICA）、頸外動脈（ECA）。在距ICA分叉5 mm處插入線栓，沿ICA向上平行推進致右側(cè)大腦中動脈（MCA）血流阻斷，結(jié)扎ICA和CCA以固定線栓，止血、消毒后逐層縫合切口。術(shù)中及術(shù)后使用電熱毯維持大鼠肛溫在37℃。Sham組大鼠實施同樣的手術(shù)操作但不插入線栓和結(jié)扎血管。

1.4 模型成功標準MCAO大鼠模型評估參考Bederson 4分5級法［8］：0分，無神經(jīng)功能缺損癥狀；1分，左側(cè)肢體疼痛刺激后收縮現(xiàn)象消失，輕度神經(jīng)功能缺損；2分，向左傾倒或轉(zhuǎn)圈，中度神經(jīng)功能缺損；3分，向病灶對側(cè)跌倒，提尾時左上肢屈曲抱胸，不能向前伸直，重度神經(jīng)功能缺損；4分，不能自行行走，意識水平下降。大鼠手術(shù)蘇醒后24 h內(nèi)選擇Bederson評分為1～3分的大鼠入組，剔除評分為0分、4分的SD大鼠。

1.5 干預(yù)方法 造模術(shù)后，EA干預(yù)組通過電子針療儀對雙側(cè)肢體的足三里（ST36）和內(nèi)關(guān)（PC6）穴進行刺激。大鼠在EA治療前接受異氟烷氣體麻醉，隨后使用大鼠固定架固定，在雙側(cè)內(nèi)關(guān)和足三里穴位處插入直徑為0.25 mm的針灸針，深度分別為1 mm和2 mm。EA刺激參數(shù)為2 Hz的疏密波頻率和1 mA的強度，每日治療20 min。Sham組、MCAO模型組大鼠僅麻醉后固定，不進行EA治療。

1.6 樣本采集MCAO術(shù)后3 d后對MCAO模型3 d組和EA干預(yù)3 d組取材，MCAO術(shù)后7 d后對Sham組、MCAO模型7 d組和EA干預(yù)7 d組取材。以10%水合氯醛（0.35 g/kg）腹腔注射麻醉處死大鼠，按隨機數(shù)字表法抽取大鼠：5只大鼠直接取出全腦，置于-20℃冰箱凍存，用于TTC染色；5只大鼠用生理鹽水和4%多聚甲醛行心臟灌注，見流出液體清亮后取梗死側(cè)大腦皮層，浸泡于4%多聚甲醛中過夜，常規(guī)石蠟包埋，并制成厚度為5μm的切片，用于HE染色和尼式染色；5只大鼠僅用生理鹽水行心臟灌注，見流出液體清亮后迅速取梗死側(cè)大腦皮層，置于-80℃冰箱保存，用于Western blot檢測和實時熒光定量PCR檢測。

1.7 觀察指標及檢測方法

1.7.1 Bederson評分 采用Bederson 4分5級法評價大鼠MCAO術(shù)后1、3、7 d神經(jīng)功能缺損程度，并記錄評分。

1.7.2 TTC染色測定腦梗死面積 取-20℃冰箱中凍存的全腦，將大腦從冠狀面均勻切成6個層面，切片厚度約2 mm，將切片放入2%TTC溶液中，37℃恒溫避光孵育30 min，置于4%多聚甲醛緩沖液過夜固定，然后拍照記錄。正常腦區(qū)為暗紅色，梗死區(qū)為白色，使用Image J軟件測量梗死面積百分比。

1.7.3 HE染色評估大腦皮層病理形態(tài)學(xué)情況 取1.6制好的切片，60℃烤片過夜，再通過二甲苯和乙醇溶液脫蠟和脫水，依次行蘇木精染色5 min、伊紅染色3 min，封片后拍照分析。

1.7.4 尼式染色評估大腦皮層神經(jīng)元損傷情況 取1.6制好的切片，烤片后放入二甲苯中浸泡3次，每次10 min，再通過梯度乙醇脫水（50%、70%、80%、90%和95%各5 min），浸入尼式染液30 min，用水快速沖洗后，乙醇遞增式脫水，二甲苯中浸泡3次，每次2 min，最后封片并顯微鏡拍照，隨機讀取3個視野，用Image J軟件分析完整神經(jīng)元陽性細胞數(shù)量。

1.7.5 Western blot檢測AKT/mTOR通路蛋白表達 取凍存于-80℃冰箱中的梗死側(cè)大腦皮層組織，隨后置于蛋白裂解液中破碎勻漿，4℃、12 000×g離心30 min，收集上清液并在-80℃下凍存，通過BCA蛋白檢測試劑盒檢測各組的蛋白濃度。將等量的蛋白質(zhì)（70μg）上樣至10%SDS-PAGE凝膠中進行電泳，然后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，放置于5%牛血清白蛋白溶液中37℃封閉1 h，4℃冰柜搖床孵育一抗過夜（12～14 h），使用的一抗為AKT（1∶1 000），mTOR（1∶1 000），p-mTOR（1∶1 000），β-actin（1∶1 000），第2天用TBST漂洗3次后，加入相對應(yīng)的山羊抗兔（1∶2 000）二抗，室溫孵育1 h，使用化學(xué)發(fā)光法（ECL）檢測條帶，照片通過Image J軟件分析蛋白條帶灰度值，以β-actin為內(nèi)參，得出蛋白相對表達量。

1.7.6 實時熒光定量PCR檢測 取-80℃冰箱中的梗死側(cè)大腦皮層組織，隨后使用總RNA提取試劑盒提取總RNA，使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將其反轉(zhuǎn)錄為cDNA，隨后進行PCR擴增。熱循環(huán)條件為：95℃預(yù)變性30 s；95℃15 s，60℃30 s，循環(huán)40次。測得Ct值后，以2-ΔΔCt法計算每組樣品中mRNA相對表達量。引物序列見表1。

Tab.1 Primer sequences表1引物序列

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 23.0軟件進行處理，計量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（±s）表示。符合方差齊性檢驗，多組間比較采用單因素方差分析（ANOVA），組間多重比較采用LSD-t法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較 與Sham組相比，MCAO模型組和EA干預(yù)組各時間點神經(jīng)功能缺損評分均升高（P＜0.05），MCAO模型制備成功；MCAO模型組和EA干預(yù)組在術(shù)后1 d和3 d的神經(jīng)功能缺損評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但術(shù)后7 d，EA干預(yù)組神經(jīng)功能缺損評分較MCAO模型組降低（P＜0.05），見表2。

Tab.2 Comparison of neurological deficit scores at different time points after ischemic brain injury between the three groups of rats表2各組大鼠腦缺血性損傷后不同時間點神經(jīng)功能缺損評分比較 （n=15，分，±s）

Tab.2 Comparison of neurological deficit scores at different time points after ischemic brain injury between the three groups of rats表2各組大鼠腦缺血性損傷后不同時間點神經(jīng)功能缺損評分比較 （n=15，分，±s）

＊＊P＜0.01；a與Sham組比較，b與MCAO模型組比較，P＜0.05。

組別Sham組MCAO模型組EA干預(yù)組F術(shù)后1 d 0.00±0.00 2.70±0.48a 2.80±0.42a 184.135＊＊術(shù)后3 d 0.00±0.00 2.50±0.52a 2.60±0.51a 119.571＊＊術(shù)后7 d 0.00±0.00 2.30±0.48a 1.60±0.51b 83.400＊＊

2.2 各組大鼠腦梗死體積的比較Sham組無明顯缺血改變，未見白色缺血梗死灶；MCAO模型組和EA組在術(shù)后3 d和7 d時出現(xiàn)了明顯的缺血梗死灶。EA干預(yù)3 d組和7 d組的腦梗死面積百分比均較相應(yīng)MCAO模型組明顯縮?。ň鵓＜0.05），見表3、圖1。

Tab.3 Comparison of percentage of cerebral infarction area and number of intact neurons between the five groups of rats表3各組大鼠腦梗死面積百分比及完整神經(jīng)元數(shù)量的比較（n=5，±s）

Tab.3 Comparison of percentage of cerebral infarction area and number of intact neurons between the five groups of rats表3各組大鼠腦梗死面積百分比及完整神經(jīng)元數(shù)量的比較（n=5，±s）

＊＊P＜0.01；a與Sham組比較，b與MCAO模型3 d組比較，c與MCAO模型7 d組比較，P＜0.05；表4、5同。

組別Sham組MCAO模型3 d組EA干預(yù)3 d組MCAO模型7 d組EA干預(yù)7 d組F腦梗死面積百分比（%）—68.32±5.78 52.91±0.47b 60.25±2.86 36.15±1.66c 84.053＊＊神經(jīng)元數(shù)量（個/視野）542.00±43.13 245.27±48.84a 356.13±82.28b 406.27±39.40a 500.87±36.23c 75.273＊＊

Fig.1 TTC staining of cerebral infarction area in each group圖1 TTC染色檢測各組腦梗死面積

2.3 各組大鼠大腦梗死區(qū)病理形態(tài)學(xué)變化Sham組大腦皮層局部結(jié)構(gòu)疏松，可見較多血管擴張，周圍間隙變大，較多神經(jīng)元胞質(zhì)疏松，排列規(guī)則。MCAO模型3 d組和7 d組可見皮層大范圍結(jié)構(gòu)疏松，大片壞死；腦膜出現(xiàn)水腫，伴有少量淋巴細胞、中性粒細胞浸潤；較多神經(jīng)元壞死，胞核碎裂或溶解，胞質(zhì)嗜酸性增強，伴有較多膠質(zhì)細胞浸潤；少量血管擴張，少量神經(jīng)元胞質(zhì)疏松，形狀不規(guī)則，排列紊亂。EA干預(yù)3 d組和7 d組可見壞死灶顯著減小，炎性浸潤改善；腦膜出現(xiàn)水腫，伴有少量淋巴細胞浸潤；少量血管擴張，周圍間隙變大，較多神經(jīng)元胞質(zhì)疏松，排列不規(guī)則，見圖2。

2.4 各組大鼠腦梗死區(qū)完整神經(jīng)元數(shù)量比較 與Sham組相比，MCAO模型組神經(jīng)元染色較淺，細胞排列較疏松，神經(jīng)元較少，MCAO模型3 d組和7 d組的完整神經(jīng)元數(shù)量較Sham組顯著減少（P＜0.05）；與MCAO模型組相比，EA干預(yù)組變性神經(jīng)元數(shù)量顯著減少，EA干預(yù)3、7 d組的完整神經(jīng)元數(shù)量顯著高于對應(yīng)MCAO模型組（均P＜0.05），見表3、圖3。

2.5 各組大鼠大腦皮層AKT和mTOR蛋白磷酸化水平比較 與Sham組相比，MCAO模型3 d組的mTOR磷酸化水平（p-mTOR/t-mTOR）顯著降低，但MCAO模 型7 d組p-mTOR/t-mTOR較MCAO模 型3 d組顯著增加（均P＜0.05）；與MCAO模型7 d組相比，EA干預(yù)7 d組p-mTOR/t-mTOR顯著降低（P＜0.05）；各組AKT、t-mTOR表達水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，見表4、圖4。

Fig.2 Comparison of pathomorphological changes of cortical areas on the infarct side of rats between the five groups(HE staining,×200)圖2各組大鼠梗死側(cè)大腦皮層區(qū)病理形態(tài)學(xué)比較（HE染色，×200）

Fig.3 Comparison of neuronal morphology in the cortical area of the infarct side of rats between the five groups(Nissl staining,×200)圖3各組大鼠梗死側(cè)大腦皮層區(qū)神經(jīng)元形態(tài)學(xué)比較（尼式染色，×200）

2.6 各組大鼠大腦皮層LC3B、Beclin-1和Bax mRNA表達情況 與Sham組相比，MCAO模型3 d組和7 d組的LC3B和Beclin-1表達水平均顯著降低（P＜0.05），EA干預(yù)7 d組的LC3B和Beclin-1表達水平顯著高于MCAO模型7 d組（P＜0.05）；MCAO模型7 d組的Bax表達水平顯著高于Sham組（P＜0.05），而與MCAO模型7 d組相比，EA干預(yù)7 d組Bax的表達水平顯著降低（P＜0.05），見表5。

Tab.4 Comparison of relative expression levels of AKT,p-mTOR and t-mTOR proteins in rat brain tissues between the five groups表4各組大鼠腦組織AKT、p-mTOR和t-mTOR蛋白相對表達水平比較 （n=5，±s）

Tab.4 Comparison of relative expression levels of AKT,p-mTOR and t-mTOR proteins in rat brain tissues between the five groups表4各組大鼠腦組織AKT、p-mTOR和t-mTOR蛋白相對表達水平比較 （n=5，±s）

組別Sham組MCAO模型3 d組EA干預(yù)3 d組MCAO模型7 d組EA干預(yù)7 d組F AKT 2.07±1.14 2.89±0.70 2.33±0.73 2.74±0.59 2.11±0.90 0.972 p-mTOR/t-mTOR 1.15±0.40 0.65±0.22a 0.69±0.30 1.49±0.40b 0.63±0.21c 7.015＊＊t-mTOR 0.87±0.32 1.40±0.26 1.10±0.33 1.02±0.93 0.97±0.32 2.470

Fig.4 Western blot analysis showed the expressions of AKT,p-mTOR and t-mTOR in the five groups圖4蛋白印跡分析顯示各組AKT、p-mTOR和t-mTOR蛋白的表達

Tab.5 Comparison of LC3B,Beclin-1 and Bax mRNA expressions in rat brain tissue at different time points between the five groups表5各組大鼠腦組織不同時間點LC3B、Beclin-1和Bax mRNA表達量比較 （n=5，±s）

Tab.5 Comparison of LC3B,Beclin-1 and Bax mRNA expressions in rat brain tissue at different time points between the five groups表5各組大鼠腦組織不同時間點LC3B、Beclin-1和Bax mRNA表達量比較 （n=5，±s）

組別Sham組MCAO模型3 d組EA干預(yù)3 d組MCAO模型7 d組EA干預(yù)7 d組F LC3B 1.00±0.00 0.21±0.00a 0.19±0.02 0.62±0.23a 1.68±0.09c 142.452＊＊Beclin-1 1.00±0.00 0.21±0.01a 0.16±0.00 0.17±0.01a 0.76±0.03c 2 229.827＊＊Bax 1.00±0.00 0.57±0.08a 0.53±0.06 1.58±0.21a 1.30±0.10c 78.799＊＊

3 討論

缺血性腦卒中是由缺血缺氧引起的局限性腦組織缺血性壞死或軟化的腦部血液循環(huán)障礙［1］。雖然溶栓和血管內(nèi)治療在臨床上的療效顯著，但其使用條件受限，必須在發(fā)病后數(shù)小時內(nèi)使用，恢復(fù)期不可使用，后期應(yīng)用組織型纖溶酶原激活劑（t-PA）可能導(dǎo)致顱內(nèi)出血［9］。目前臨床上對缺血性腦損傷后的腦部恢復(fù)多采用物理療法，以促進缺血性腦損傷后神經(jīng)再生、血管生成及功能恢復(fù)［10］。

EA作為中醫(yī)現(xiàn)代化的產(chǎn)物，已廣泛應(yīng)用于缺血性腦卒中的輔助治療，并被證明在腦梗死治療中具有抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)自噬和凋亡、促神經(jīng)營養(yǎng)因子釋放、促進神經(jīng)和血管再生等作用［11］，可以有效地改善腦梗死患者的神經(jīng)功能缺損情況及預(yù)后。EA療法治療疾病的核心理念之一就是刺激身體特定部位可調(diào)節(jié)生理功能，并認為其通過傳統(tǒng)經(jīng)絡(luò)發(fā)揮作用［12］，其中足三里［13］、內(nèi)關(guān)穴［14］為治療缺血性卒中常用的組合穴位。本研究首先探討EA干預(yù)對MCAO大鼠神經(jīng)功能障礙的影響，發(fā)現(xiàn)EA干預(yù)7 d后Bederson評分顯著低于MCAO組；此外，EA治療后腦梗死面積明顯減少，梗死側(cè)大腦皮層神經(jīng)元損傷明顯減輕，EA治療對缺血性卒中具有神經(jīng)保護作用，與之前的研究結(jié)果一致［15］。Tian等［16］還發(fā)現(xiàn)，EA療法能起到鎮(zhèn)痛作用，還可抑制神經(jīng)元凋亡及異常星形細胞活化。針灸在臨床康復(fù)中的作用已得到廣泛認可，但其作用機制尚不明確。

自噬是機體內(nèi)普遍存在的一種細胞調(diào)控機制，機體可以通過自噬降解受損、變性、衰老和失去功能的細胞、細胞器和變性蛋白質(zhì)與核酸等生物大分子［17］。自噬在生長和發(fā)育過程中比較活躍，對神經(jīng)元尤其重要。由于神經(jīng)元結(jié)構(gòu)復(fù)雜，代謝需求較大，因此，自噬系統(tǒng)在神經(jīng)元合成代謝和分解代謝中扮演了重要角色［18］。有研究表明mTOR在多種中樞神經(jīng)損傷模型中起重要作用［19］。進一步研究發(fā)現(xiàn)，mTOR在調(diào)節(jié)自噬過程中起著關(guān)鍵作用，通過抑制mTOR的表達而誘導(dǎo)細胞自噬［20］。

mTOR為絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，其催化亞單位為mTORC1和mTORC2。mTORC1通過正向調(diào)節(jié)細胞內(nèi)合成代謝過程和負向調(diào)節(jié)細胞內(nèi)分解代謝過程而促進細胞生長；mTORC2通過調(diào)節(jié)其他下游的蛋白激酶和細胞骨架元素，影響細胞的生存、代謝和結(jié)構(gòu)［18］。其中，mTORC1在誘導(dǎo)自噬過程中起著核心作用［21］，通過調(diào)節(jié)神經(jīng)元自噬來改善腦缺血損傷［22］。正常情況下，mTORC1作為自噬抑制劑存在于機體中，一旦細胞出現(xiàn)缺血、缺氧癥狀，mTORC1就會失去活性，從而促進自噬［23］。Beclin-1是mTOR下游分子，可促進LC3-Ⅰ酯化形成LC3-Ⅱ，并在自噬溶酶體的形成中起重要作用［24］。在缺血性腦卒中患者的腦組織中，抑制mTOR磷酸化可以促進自噬，降低興奮性毒性所致的損傷［25］，并顯著提高自噬相關(guān)因子Beclin-1和LC3B的表達［4］。注射組胺H3受體的拮抗劑可抑制大腦梗死區(qū)mTOR磷酸化并誘導(dǎo)自噬發(fā)生，在腦缺血損傷后起到保護作用［6］。在本研究中，與Sham組相比，MCAO模型7 d組的自噬相關(guān)因子Beclin-1、LC3B表達顯著降低，EA干預(yù)可逆轉(zhuǎn)MCAO模型組的變化，EA干預(yù)7 d組的mTOR磷酸化水平顯著降低，Beclin-1、LC3B表達顯著增加，提示EA治療可能通過抑制mTOR激活自噬改善缺血性腦損傷。

缺血性腦卒中后，腦梗死核心區(qū)神經(jīng)元迅速壞死、凋亡，造成不可逆轉(zhuǎn)的損傷［26］，而適度的自噬可通過抑制凋亡反應(yīng)緩解腦損傷［27］。其中，凋亡途徑主要由Bax的鈣依賴性激活啟動，并通過激活下游的caspase-3介導(dǎo)細胞凋亡［28］。研究表明，在腦缺血再灌注模型大鼠中，沙芬酰胺能顯著促進自噬相關(guān)蛋白Beclin-1、LC3B的表達，抑制凋亡相關(guān)因子Bcl-2、Bax、caspase-3表達，沙芬酰胺可能通過抗凋亡、誘導(dǎo)自噬等途徑發(fā)揮神經(jīng)保護作用［29］。本研究結(jié)果顯示，MCAO模型7 d組的促凋亡因子Bax表達水平顯著高于Sham組，EA干預(yù)7 d組的Bax表達水平顯著低于MCAO模型7 d組，且趨勢與上述研究結(jié)果一致，提示EA治療可能通過抑制凋亡因子誘導(dǎo)自噬反應(yīng)。

綜上所述，EA刺激內(nèi)關(guān)、足三里可明顯改善缺血性卒中大鼠運動功能，改善繼發(fā)性腦損傷及神經(jīng)元壞死，其作用機制可能是通過抑制mTOR信號通路誘導(dǎo)自噬，抑制細胞凋亡，發(fā)揮神經(jīng)保護作用。