劉昭娜，高惠紅,武鴻毅，方 曉△

北京市隆福醫(yī)院:1.口腔科;2.檢驗科，北京 100010

糖尿病屬于自身免疫性代謝性疾病，其中2型糖尿病發(fā)病的始動環(huán)節(jié)為胰島素抵抗，進一步研究顯示，免疫調節(jié)異?？赡茉?型糖尿病及其相關并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[1-2]。牙周疾病與糖尿病存在著密切的聯系，二者間的雙向作用是近些年學者們研究熱點[3]。研究表明，糖尿病患者較非糖尿病患者更容易出現牙周炎[4]。長鏈非編碼RNA MIR155宿主基因(LncRNA MIR155HG)是miR-155的宿主基因，長度為1 500 bp，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切聯系[5]。唐敏等[6]研究顯示，LncRNA MIR155HG在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中高表達，且與其疾病活動度有關，可能誘發(fā)炎癥。為明確LncRNA MIR155HG、miR-155與慢性牙周炎(CP)及2型糖尿病伴慢性牙周炎(DMCP)的關系，本研究擬探討血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平與CP相關臨床指標的相關性，以及二者對DMCP的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2020年1月至2021年10月收治的42例DMCP患者為DMCP組，年齡36～72歲；選取46例單純CP患者作為CP組，年齡33～74歲；選取48例同期健康志愿者作為正常對照(NC)組，年齡34～72歲。(1)納入標準：①2型糖尿病患者均符合《2型糖尿病基層診療指南(實踐版·2019)》的診斷標準[7]，CP患者符合《牙周病學》(第四版)中的診斷標準[8]；②入組前未進行過CP相關治療；③近期體質量穩(wěn)定，且無酗酒、吸煙等不良嗜好。(2)排除標準：①有重要臟器功能障礙及其他內分泌系統(tǒng)疾病或代謝疾??；②侵襲性牙周炎；③有過敏史；④處于哺乳期或妊娠期女性。本研究經本院醫(yī)學倫理委員會審批通過，所有研究對象均自愿參與本研究，并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1資料收集 收集所有研究對象性別、年齡、體質量指數(BMI)、空腹血糖、糖化血紅蛋白(HbA1c)、探診深度、附著喪失、牙齦指數、菌斑指數等資料。

1.2.2標本采集 血清標本采集：研究對象空腹12 h后，抽取次日晨起外周靜脈血，以3 000 r/min離心10 min后收集上層血清，凍存于—80 ℃冰箱中待測。齦溝液標本采集：將濾紙條放入干凈、無菌的離心管內并分別編號，用電子天平將帶有編號的離心管稱重并記錄重量；取樣前囑患者清水漱口，無菌干棉球嚴格隔濕取樣位點，探針掛出牙面菌斑，使用氣槍吹干牙齒表面，將稱重后的濾紙條輕輕插入牙齦下，停留30 s后取出，檢查濾紙條(帶血或被唾液污染者棄去)，浸泡于鹽酸緩沖液中，30 min后3 000 r/min離心10 min，洗脫液為齦溝液標本，凍存于-80 ℃冰箱中待測。

1.2.3血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平檢測 采用Trizol試劑盒(美國Invitrogen公司)提取血清及齦溝液總RNA，測定純度及濃度后，采用反轉錄試劑盒(北京伊塔生物科技有限公司)將其反轉錄為cDNA，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR，CFX384型qRT-PCR儀購自美國Bio-Rad公司)檢測血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平。根據目的基因LncRNA MIR155HG、miR-155設計并合成相應引物(大連寶生物工程有限公司合成)，三磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)、U6作為內參基因，引物序列見表1。qRT-PCR反應條件：95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，40個循環(huán)。所有待測標本均設置3個平行標本，采用2-ΔΔCt法計算血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155相對表達水平。

表1 引物序列

2 結 果

2.13組基線資料及臨床指標比較 DMCP組、CP組和NC組性別、年齡、BMI比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。DMCP組空腹血糖、HbA1c、附著喪失高于CP組、NC組，探診深度、牙齦指數、菌斑指數高于NC組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CP組探診深度、附著喪失、牙齦指數、菌斑指數高于NC組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

2.23組血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平比較 DMCP組血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平明顯高于CP組、NC組，CP組血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平明顯高于NC組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表2 3組基線資料及臨床指標比較[n(%)或

表3 3組血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平比較

2.3DMCP患者血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平與臨床指標的相關性 Pearson相關分析結果顯示，DMCP患者血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平與空腹血糖、HbA1c、探診深度、附著喪失、牙齦指數、菌斑指數均呈正相關(P<0.05)。見表4、5。

2.4血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平影響DMCP的Logistic回歸分析 以是否發(fā)生DMCP作為因變量，以血清LncRNA MIR155HG、miR-155及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155為自變量進行Logistic回歸分析，結果顯示，齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平升高是DMCP的獨立危險因素(P<0.05)。見表6。

表4 DMCP患者血清LncRNA MIR155HG、miR-155 水平與臨床指標的相關性

表5 DMCP患者齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155 水平與臨床指標的相關性分析

表6 血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平影響DMCP的Logistic回歸分析

3 討 論

牙周炎是一種慢性炎癥性破壞性疾病，主要發(fā)生于牙周支持組織，是成年人牙齒脫落的重要原因[9]。作為機體固有免疫的重要組成部分，炎癥反應及相關細胞因子在DMCP的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了重要作用[10]。如糖尿病患者血糖控制不佳，會加重牙周局部炎癥反應，產生大量炎癥介質，致使免疫細胞功能受損，進一步加重牙周組織破壞，削弱牙周損傷組織的修復能力，進而形成惡性循環(huán)[11]。

LncRNA是一類存在于細胞質內或細胞核內的長度大于200 nt的功能性非編碼RNA分子，在真核細胞內發(fā)生普遍轉錄[12]。近年來，許多學者對LncRNA的功能模式開展了大量研究，其與復雜疾病間的關系也受到廣泛關注[13]。LncRNA MIR155HG是人染色體9p21上的一個LncRNA，位于INK4基因座，因其為miR-155的宿主基因而得名[14-15]。miR-155可參與巨噬細胞、單核細胞及中性粒細胞的活化，在B細胞和T細胞介導的免疫應答中扮演著重要角色[16]。WU等[17]研究顯示，miR-155在牙周炎患者唾液中高表達，且與牙周炎嚴重程度呈正相關。RADOVIC等[18]研究表明，CP患者及DMCP患者miR-155表達水平上調，miR-155被認為是非糖尿病和2型糖尿病患者牙周炎的新生物標志物。

目前，對LncRNA MIR155HG、miR-155與DMCP患者臨床指標及病理發(fā)展的關系也不明確。本研究結果顯示，DMCP患者血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平高于單純CP患者，而單純CP患者血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平高于健康志愿者，其中miR-155表達趨勢與趙華等[19]研究結果一致。推測2型糖尿病患者體內血糖異常及體內免疫應答異常，造成感染的牙周組織周圍炎癥因子聚集，同時產生許多炎癥介質釋放入循環(huán)系統(tǒng)，此時LncRNA MIR155HG表達水平升高，LncRNA MIR155HG作為宿主基因可能通過促進miR-155表達上調，從而在病原體侵犯、破壞機體牙周組織時做出快速反應，然而其作用機制及功能仍需進一步研究及驗證。此外，本研究結果顯示，血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155表達水平與空腹血糖、HbA1c、探診深度、附著喪失、牙齦指數、菌斑指數均呈正相關，與WU等[17]研究結果部分一致。進一步提示LncRNA MIR155HG、miR-155在2型糖尿病患者CP的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要促進作用。Logistic回歸分析結果顯示，齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平升高是DMCP的獨立危險因素。RADOVIC等[18]的研究顯示，miR-155水平升高與牙周炎發(fā)生關系密切。齦溝液而非血清LncRNA MIR155HG、miR-155升高是DMCP獨立危險因素的可能原因為牙周組織發(fā)生炎癥時，齦溝液從微小血管滲出，其分泌量立即增加。

綜上所述，DMCP患者血清及齦溝液LncRNA MIR155HG、miR-155水平高于單純CP患者，且二者水平與DMCP患者臨床指標有關。提示LncRNA MIR155HG、miR-155水平與2型糖尿病患者牙周疾病的發(fā)展有關，臨床中在治療2型糖尿病患者的過程中，要注意控制牙周疾病的發(fā)展。