李佳，鄧新宇，田曉彬，黃敏茹，黎攀，杜冰*，賀慶*

（1.江蘇艾蘭得營養(yǎng)品有限公司，江蘇泰州 214500）（2.華南農業(yè)大學食品學院，廣東廣州 510642）

磷蝦油是從南極磷蝦（Euphausia superba）中提取的海洋源性油品，其中富含豐富的Omega-3脂肪酸，主要是二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）等不飽和脂肪酸[1]。此外，還含有蝦青素、維生素、甾醇等其他脂溶性物質[2]。研究表明，磷蝦油中EPA和DHA 的含量為15.86%，具有降血脂、助發(fā)育、益智等功效[3]。其降血脂作用主要表現(xiàn)在磷蝦油可降低血清中的甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的水平，同時升高血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平[4]。

紅曲是我國傳統(tǒng)的藥食同源中藥材之一，又名紅糟、紅曲霉、丹曲、福曲等。其來源為曲霉科真菌紅曲霉的菌絲體寄生在粳米上而成的紅曲米，在我國分布很廣泛，常種植于江西、臺灣、廣東等地。紅曲在我國有著悠久的發(fā)酵歷史，紅曲米經(jīng)過霉菌等多種微生物發(fā)酵后會生產莫納可林K（Monacolin K，或稱洛伐他汀Lovastatin)、輔酶Q10 等產物，其代謝產物能降低血液中TC 和TG 水平以及改善細胞的呼吸作用[5,6]。有實驗研究對紅曲提取物做了毒性和抗突變實驗，結果表明紅曲提取物安全無毒且未有致突變性，因此可以應用到輔助降血脂的保健食品中[7]。

隨著我國經(jīng)濟的日益發(fā)展，國民的日常膳食攝入變得更加廣泛，高血脂癥患病人群在我國逐年增加，國民的健康受到了嚴重威脅。目前降低與控制血脂含量多以服用辛伐他汀和普伐他汀等化學合成藥物，長期攝入此類藥物可能會產生毒副作用，對人體機能產生損傷，因此通過食療控制血脂的方式逐漸受到人們的推崇[8]。在市面上目前已有許多磷蝦油和紅曲相關降血脂的產品，也有紅曲與葡萄籽原花青素[9]、紅曲、黃連素和甘蔗脂肪醇[10]、紅曲與植物甾醇[11]等復配降血脂的相關研究，而有關紅曲和磷蝦油復配能否降血脂或有協(xié)同作用的研究還鮮有報道。為此，本研究以磷蝦油與紅曲提取物為原料，分別用低、中、高三個劑量的磷蝦油與紅曲提取物對高脂血癥模型大鼠進行干預，與陰性對照組、高脂模型組、藥物組相比較，通過測定血脂指標和觀察肝臟與附睪脂肪切片，探究磷蝦油與紅曲提取物復配降血脂功效。本研究為尋找天然降血脂和預防脂肪肝保健食品的開發(fā)提供了理論基礎和新的參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

SPF 級雄性SD 大鼠，120 只，體質量180～220 g，購自廣東省醫(yī)學實驗動物中心，使用許可證號：SYXK（粵）2018-0002。

磷蝦油：美國德克薩斯州休斯頓的Aker 生物海洋制造有限責任公司制造，產品名稱：Superba? 2；批號：12959A；主要成分：總Omega-3 脂肪酸含量為30.60 g/100 g，其中EPA 為12.90 g/100 g，DHA 為8.60 g/100 g；總Omega-6 脂肪酸為2.00 g/100 g；蝦青素含量為347.00 μg/g；總磷脂含量為46.00 g/100 g，磷脂酰膽堿含量為42.00 g/100 g，膽堿含量為6.00 g/100 g。紅曲：由西瑪生物提供，用紅曲霉菌在大米中發(fā)酵培養(yǎng)而成，性狀為紅色粉末，色調純正，光熱穩(wěn)定性好；產品名稱：紅曲；批號：CS- 201015；用QB/T 2847 方法測得總洛伐他汀為1.63 g/100 g。磷蝦油和紅曲混合物：將磷蝦油和紅曲提取物用一定的助懸劑搖勻成混懸液備用，使用時再次搖勻。0.01%辛伐他丁，購自廣東彼迪藥業(yè)有限公司。正常飼料LF10B，主要營養(yǎng)成分（質量分數(shù)）：蛋白19.20%、碳水化合物67.30%、脂肪4.30%；高脂飼料HF45，主要營養(yǎng)成分（質量分數(shù)）：蛋白24.00%、碳水化合物41.00%、脂肪24.00%，購自廣東省醫(yī)學實驗動物中心。血脂四項試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設備

UV-1100 型紫外分光光度計，上海美譜達儀器有限公司；ME204E 電子天平，梅特勒-托利多公司；Thermo病理工作站，賽默飛世爾科技（中國）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 高血脂癥模型的建立

飼養(yǎng)大鼠適應環(huán)境1 周后，隨機分組，每組10只，共12 組，每籠飼養(yǎng)5 只大鼠。其中將大鼠分為正常組（陰性對照組）大鼠（10 只）和模型組（110 只）。陰性對照組給予正常飼料喂養(yǎng)，模型組給予高脂飼料飼養(yǎng)2 周后，陰性對照組和模型組大鼠不禁食采血（眼內眥），采血后盡快分離血清，測定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平，比較陰性對照組與模型組的血脂差異。

1.3.2 試樣干預

所有組飼料維持不變，將模型對照組分為以下11組[12,13]：3 個磷蝦油劑量組（分別為5、10、30 倍人用量）、3 個紅曲提取物劑量組（分別為5、10、30 倍人用量）、3 個磷蝦油和紅曲提取物的混合物劑量組，同時設陰性組和藥物組。所有受試物以灌胃方式給予，連續(xù)灌胃4 周，劑量見表1。試驗期間，每周稱量大鼠體質量，于實驗結束時不禁食采血，采血后盡快分離血清測定血脂四項。處死大鼠后取肝臟與脂肪組織，測定肝功指標并進行肝臟與脂肪的病理學檢查。

表1 磷蝦油和紅曲提取物灌胃劑量Table 1 Intragastric dose of prawn oil and Monascus extract

1.3.3 標本采集

（1）血液樣本：通過眼眶靜脈叢，靜置30 min后，2 000 r/min 離心10 min，吸取上層血清；-80 ℃保存，備用[14]。

（2）肝臟組織：處死SD 大鼠后，取肝臟稱重，肝臟組織分成左右肝葉兩份，左肝用于病理組織切片，右肝用滅菌錫箔紙包疊后，于液氮速凍后，-80 ℃保存。

（3）脂肪樣本：剔除其他組織后，分別取附睪脂肪和皮下脂肪，稱重，并用于切片分析。

1.3.4 檢測指標

（1）體質量：每只SD 大鼠定期稱量體質量。

（2）血液樣本：采用試劑盒測定血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、門冬氨酸氨基轉移酶（AST）。

（3）臟器指數(shù)：依據(jù)肝臟、附睪脂肪和皮下脂肪組織的質量，分別計算三者的臟器指數(shù)。

（4）組織切片：肝臟、附睪脂肪和皮下脂肪進行組織切片分析。

1.3.5 統(tǒng)計分析

實驗數(shù)據(jù)以均值±標準差表示，采用SPSS 17.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。滿足正態(tài)性和方差齊性的資料采用單因素方差分析，實驗組與對照組的比較采用LSD 法。不滿足參數(shù)檢驗的資料采用非參數(shù)檢驗。

2 結果與分析

2.1 干預前血脂檢測結果

由表2 可知高脂高膽固醇飼料喂養(yǎng)大鼠（模型）2周后，與攝食正常飼料大鼠（陰性對照）組相比，大鼠血清中的TC、TG 和LDL-C 含量顯著升高，表示建模成功完成。

表2 建模后各組大鼠的血脂濃度（mmol/L）Table 2 Blood lipid level of rats in each group after modeling

2.2 大鼠體質量和肝臟指數(shù)的變化

2.2.1 大鼠體質量變化

各組大鼠體質量均隨飼養(yǎng)時間增加而上升，且各組上升幅度相似，差別較小，大鼠體質量均明顯升高。說明磷蝦油樣品、紅曲提取物樣品以及兩者混合物樣品對大鼠體質量無明顯影響。

表3 大鼠體質量趨勢（g）Table 3 Weight trend of rats

2.2.2 大鼠肝臟指數(shù)與脂肪對比

表4 顯示，在四周干預后，除磷蝦油低劑量組與陰性對照組的體質量有顯著性差異外，其余組均無顯著性差異，但中、高劑量磷蝦油，低、中劑量紅曲以及中、高劑量混合物較模型對照組的體質量都有降低。在對肝臟質量和肝體比影響方面，與陰性對照組相比，各組的肝臟質量和肝體比均顯著性升高；與模型對照組相比，干預組肝臟質量和肝體比均無顯著性變化，但中、高劑量磷蝦油，低、高劑量紅曲以及中、高劑量混合物與模型對照組相比都有降低；辛伐他汀藥物組肝臟質量無顯著性差異，肝體比存在顯著性差異。在腹部和睪丸脂肪以及腹部和睪丸脂體比方面，干預組和藥物組與陰性對照組相比無顯著性差異；干預組、藥物組與模型對照組相比也無顯著性差異。

表4 大鼠肝臟質量及其肝臟指數(shù)Table 4 Liver weight and liver index of rats

上述結果表明，高脂膳食可致使肝臟肥大，中、高劑量混合物相比其他對照組而言能較高降低其肝臟質量，但并不能顯著遏制這一結果的發(fā)生；辛伐他丁藥物、高劑量紅曲提取物物和中、高劑量混合物組能減少腹部和睪丸脂肪的質量，但下降程度與模型組和陰性對照組相比未達到顯著性。

2.3 大鼠血脂變化

由圖1 所示，與陰性對照組相比，模型組血液TC、TG 和LDL-C 水平均顯著升高；與模型組對比，經(jīng)過紅曲提取物（中、高劑量）和混合提取物（中、高劑量）干預后，血液TC 顯著降低，且呈現(xiàn)劑量依賴，分別由4.14 mmol/L 下降到3.51、3.40、3.37 和3.37 mmol/L；經(jīng)過磷蝦油（中、高劑量）、紅曲提取物（高劑量）和混合物（低、中、高劑量）干預后，血液TG 呈顯著性降低，分別由2.77 mmol/L 下降到1.71、1.77、1.82、1.79、1.74、1.51 mmol/L；經(jīng)過磷蝦油（中、高劑量）和紅曲提取物（中、高劑量）以及混合提取物（低、中、高劑量）干預，血液LDL-C 呈顯著性降低，并呈現(xiàn)劑量依賴，分別由0.37 mmol/L下降到0.24、0.23、0.27、0.26、0.25、0.25、0.24 mmol/L，說明磷蝦油、紅曲提取物以及混合提取物有輔助降血脂功能。

圖1 干預后各組大鼠的血脂變化Fig.1 Changes of blood lipid in rats after intervention

另外，中、高劑量混合提取物和中、高劑量紅曲提取物干預后血液TC、LDL-C 水平顯著高于磷蝦油干預組；中、高劑量混合物中血液TG 水平顯著高于紅曲提取物和磷蝦油提取物干預組，提示紅曲提取物、磷蝦油降血脂作用與高純度、高劑量的混合物提取物對比相比較差。

2.4 干預后各組大鼠的ALT 和AST 變化

由圖2 所示，與陰性對照組比較，模型組小鼠血清中ALT 和AST 顯著性升高，表明造模成功。與模型組比較，磷蝦油（低、高劑量）、紅曲提取物（低、中、高劑量）、混合物（低、中、高劑量）和藥物組干預后小鼠血清ALT 降低，呈顯著性差異；磷蝦油（低劑量）、紅曲提取物（高劑量）、混合物（高劑量）和藥物組干預后AST 呈顯著性減低，另外高劑量紅曲提取物和高劑量混合物提取物在降低AST和ALT方面都呈現(xiàn)顯著性，AST 由240.00 mmol/L 下降到141.57 mmol/L 和140.34 mmol/L，ALT 由248.87 mmol/L 下降到104.50 mmol/L 和102.46 mmol/L，且效果優(yōu)于其他對照組。因此低劑量磷蝦油、高劑量紅曲提取物和高劑量混合物組以及藥物組可以緩解肝損傷，且高劑量紅曲提取物和高劑量混合物效果最佳。

圖2 干預后各組大鼠的AST 和ALT 變化Fig.2 Changes of AST and ALT in rats after intervention

2.5 肝臟及脂肪組織切片分析

肝臟及脂肪組織切片如圖3 和圖4 所示，相關記錄及觀察如下，說明高脂飲食后會導致SD 大鼠肝細胞脂肪變性，引起脂肪堆積；而經(jīng)過中、高劑量混合物和高劑量紅曲提取物干預后，觀察到的含脂滴的肝細胞減少，觀察到的肝組織另見多灶性泡沫細胞聚集例數(shù)減少，說明磷蝦油和混合物對高脂飲食導致的肝細胞脂肪變性、脂肪堆積有一定改善作用。

圖3 各組大鼠肝臟的病理學檢查Fig.3 Pathological examination of liver in each group

圖4 混合物組肝臟和脂肪Fig.4 Liver and fat of mixture group

2.6 討論

高血脂癥是體內血脂過高的一種病癥，一般沒有明顯的臨床癥狀，潛移默化地影響人們的健康狀況，成為當今科研人員熱門研究方向[15]。通過高脂飼料誘發(fā)來實現(xiàn)高脂血癥動物模型是目前常用的方法，它能真實的反應樣品調節(jié)血脂的過程[16]。有相關實驗用脂肪乳劑灌胃的方法確定了高脂血癥模型小鼠的生化指標[17]，本研究實驗研究表明四周的高脂飼料喂養(yǎng)可使大鼠血清中的TC、TG 和LDL-C 濃度顯著升高、肝臟肥大、肝細胞脂肪變性，引起腹部脂肪和睪丸脂肪堆積且質量顯著上升，與上述實驗結果報道的變化指標一致，證明造模成功。

磷蝦油中含量最豐富的是EPA、DHA，兩者都屬于Omega-3 脂肪酸，是人體不能直接合成，需要從外界獲取的脂肪酸。兩者具有降低血液中的TC、TG、LDL-C，升高HDL-C 等功效[18]。日本學者首次從紅曲中分離出降血脂的有效成分是莫納可林K[19]，莫納可林K 可以降低膽固醇的吸收和脂質的合成，從而增加高密度脂蛋白膽固醇并促進脂質排泄[20]。磷蝦油與紅曲降血脂兩者在降血脂方面都已有研究，王嵐[21]在紅曲對高脂大鼠降脂作用的實驗研究中發(fā)現(xiàn)連續(xù)給藥31 d 紅曲（90 mg/kg）的血清TC、TG 顯著降低，TC和TG 顯著降低24.37%和26.05%。AffusoF 等[11]利用植物甾醇和紅曲復配對心血管病人進行降血脂實驗，結果表明病人服用該藥物連續(xù)8 周后，14 位服用者的TC、LDL-C 恢復至正常水平，并且TC、LDL-C、TC/HDL-C 顯著降低13.8%、17.4%、14.3%。孫昌華[22]在南極磷蝦蝦油輔助降血脂的實驗中發(fā)現(xiàn)連續(xù)灌胃12 d 磷蝦油受試物1.5 g/kg 的劑量下，用磷蝦油預防可使大鼠血清TC、LDL-C 降低，TC 和LDL-C顯著降低24.37%和29.03%。但兩者復配是否有效果或增益效果還暫未有人進行過報道，本實驗中高劑量磷蝦油和紅曲混合物166.67+200 mg/kg 干預高脂大鼠后TC、TG、LDL-C 顯著降低17.02%、32.12%、33.02%，相較以往研究，磷蝦油和紅曲提取復合物降血脂效果更佳。

3 結論

磷蝦油、紅曲提取物以及兩者混合物均具有輔助降血脂功能，高劑量兩者混合提取物166.67+200 mg/kg最佳，高劑量紅曲提取物200.00 mg/kg 次之。混合物中、高劑量對高脂飲食導致的肝細胞脂肪變性、腹部脂肪和睪丸脂肪堆積有一定改善作用。高純度、高劑量的混合提取物降血脂作用優(yōu)于磷蝦油和紅曲提取物。因此，培養(yǎng)和開發(fā)磷蝦油與紅曲提取物的輔助降血脂食品具有很大的前景。