陳筱筱，吳雪卿，邵士珺，瞿文超，陳瑋黎，萬(wàn) 華

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院，上海 200120；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，上海 200080）

乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤，根據(jù)世界衛(wèi)生組織國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，2020年乳腺癌發(fā)病人數(shù)首次超過(guò)肺癌，成為全球最常見(jiàn)癌癥。而在乳腺癌治療過(guò)程中，約20%的患者都會(huì)出現(xiàn)淋巴水腫，常見(jiàn)的主觀臨床癥狀是腫脹、麻木、沉重、緊繃、僵硬、協(xié)調(diào)性和活動(dòng)度降低、肢體疲勞或虛弱，影響患者正常肢體運(yùn)動(dòng)，日常功能受損，從而大大降低生活質(zhì)量并且影響患者的身心健康[1-2]。此外，淋巴水腫的程度不一，國(guó)際淋巴學(xué)會(huì)將其分為3個(gè)階段[3]。關(guān)于乳腺癌相關(guān)淋巴水腫（breast cancer-related lymphedema，BCRL）的病因，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外研究者多認(rèn)為與淋巴管堵塞及間質(zhì)蛋白積聚、間質(zhì)功能失調(diào)相關(guān)。目前治療方式主要包括引流、壓迫、功能運(yùn)動(dòng)及手術(shù)治療，但是在選擇最佳的治療方式上仍存在挑戰(zhàn)[4]，綜合減充血療法仍然是目前公認(rèn)的一線治療，但是療效很大程度取決于患者的依從性[5]。

研究[6-8]顯示中藥外治在BCRL中療效佳，單獨(dú)應(yīng)用抑或聯(lián)合中藥外治均能達(dá)到提高療效的作用，但因?yàn)橹嗅t(yī)各家學(xué)術(shù)思想的差異，中藥外治方多樣且復(fù)雜，缺乏相應(yīng)的機(jī)制研究。因此，本研究從乳腺癌相關(guān)淋巴水腫出發(fā)，通過(guò)數(shù)據(jù)挖掘等相關(guān)手段，挖掘文獻(xiàn)中既往報(bào)道有效的中藥外治方，并對(duì)篩選出的核心藥物進(jìn)行可能機(jī)制的分析及分子靶點(diǎn)研究。

1 資料與方法

1.1 檢索方法以“中醫(yī)外治”“中藥外治”“中藥外敷”“中藥敷貼”“中藥貼敷”“乳腺癌淋巴水腫”“乳腺癌上肢水腫”“乳腺惡性腫瘤淋巴水腫”“乳腺惡性腫瘤上肢水腫”為檢索詞，各檢索詞之間自由組合，在中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方及維普數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，檢索時(shí)間為建庫(kù)到2021年11月1日。

1.2 文獻(xiàn)篩選標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) 符合乳腺癌相關(guān)淋巴水腫診斷的臨床研究、案例報(bào)道等；中藥外治療效確切或中藥外治聯(lián)合用藥組優(yōu)于非聯(lián)合用藥組的文獻(xiàn)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 缺乏具體藥物組成或藥物組成未列舉完全的文獻(xiàn)；重復(fù)發(fā)表文獻(xiàn)；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、綜述類(lèi)文獻(xiàn)。

1.3 中藥名稱(chēng)規(guī)范中藥名稱(chēng)的規(guī)范以2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》[9]為準(zhǔn)，并參考《中華本草》[10]、《本草綱目》[11]。如：“元胡”規(guī)范為“延胡索”，“白芥子”規(guī)范為“芥子”。并采用古今醫(yī)案云平臺(tái)中數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)中藥名稱(chēng)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，對(duì)于無(wú)法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的名稱(chēng)進(jìn)行手動(dòng)修改。

1.4 研究方法

1.4.1 核心藥物篩選及用藥規(guī)律分析 應(yīng)用古今醫(yī)案云平臺(tái)V2.3.5的數(shù)據(jù)挖掘模塊進(jìn)行中藥頻數(shù)、中藥屬性（包括四氣五味及歸經(jīng)）分析、關(guān)聯(lián)分析、聚類(lèi)分析。并采用Cytospace 3.8.0軟件進(jìn)行藥物共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)可視化分析，篩選核心藥物，對(duì)文獻(xiàn)中中藥外治治療乳腺癌相關(guān)淋巴水腫的用藥規(guī)律進(jìn)行分析。

1.4.2 中藥成分靶點(diǎn)及疾病靶點(diǎn)篩選 首先通過(guò)（Traditional Chinese Medicine Database and Analysis Platform，TCMSP）平臺(tái)篩選核心藥物的化學(xué)成分和相應(yīng)靶點(diǎn)，篩選條件為口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%和藥物相似性（drug likeness，DL）≥0.18，并通過(guò)Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行靶點(diǎn)的轉(zhuǎn)換。在GeneCards基因數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索關(guān)鍵詞為“Breast cancer-related lymphedema”相關(guān)的靶基因，通過(guò)在線維恩圖工具（https://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/）篩選兩者交集基因。

1.4.3 藥物成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及可視化 選擇藥物及疾病的交集靶點(diǎn)，并篩選出藥物之間相同的成分用相應(yīng)字母標(biāo)識(shí)，將生成的Excel表格導(dǎo)入Cytospace 3.8.0軟件構(gòu)建藥物成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)并進(jìn)行可視化分析，展示藥物成分和靶點(diǎn)間的關(guān)系。

1.4.4 基于Bisogenet的PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和篩選 借助Cytospace中的Bisogenet插件分別構(gòu)建乳腺癌相關(guān)淋巴水腫靶點(diǎn)和核心藥物靶點(diǎn)的蛋白質(zhì)互作網(wǎng)絡(luò)（protein-protein interaction,PPI），并通過(guò)Merge功能合并兩者的網(wǎng)絡(luò)，應(yīng)用CytoNCA插件計(jì)算合并網(wǎng)絡(luò)的相關(guān)參數(shù)并進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)篩選，篩選條件為：2倍的degree、Betweenness以及Closeness中位數(shù)。

1.4.5 GO富集分析和KEGG通路分析 將交集基因上傳至Metascape平臺(tái)（https://metascape.org/gp/index.html#/main/step1）進(jìn)行GO富集分析和KEGG富集分析，并通過(guò)微生信在線繪制氣泡圖和GO富集分析圖。

1.4.6 分子對(duì)接 結(jié)合Degree值和通路富集分析篩選出核心靶點(diǎn)ESR1和TP53，并選取主要有效成分。檢索RCSB PDB和Pub Chem數(shù)據(jù)庫(kù)，得到靶點(diǎn)與成分的化學(xué)及三維結(jié)構(gòu)，并通過(guò)Pymol軟件和AutoDockTools進(jìn)行對(duì)接。

2 結(jié) 果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)，最后納入文獻(xiàn)48篇，合計(jì)48首中藥外治方，共143味中藥。具體文獻(xiàn)篩選情況見(jiàn)圖1。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

2.2 中藥頻數(shù)、功效統(tǒng)計(jì)對(duì)48首方劑的中藥頻數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，總計(jì)143味中藥。排名前5的中藥分別為紅花、桂枝、黃芪、雞血藤、當(dāng)歸，頻數(shù)均大于10。其中紅花的頻數(shù)最高，使用頻率占所有處方的41.67%（20/48）。排名前20的中藥頻數(shù)情況見(jiàn)表1。然后進(jìn)一步對(duì)中藥的功效進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，納入的中藥外治方頻數(shù)前3的功效分別是利水消腫、調(diào)經(jīng)止痛及散瘀止痛，排名前10的中藥功效情況見(jiàn)圖2。

表1 中藥頻數(shù)表（前20位）

圖2 中藥功效分布情況餅圖（前10位）

2.3 中藥四氣五味及歸經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析對(duì)143味中藥的四氣五味進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示中藥以溫性頻數(shù)最高，其次則為平性和寒性。中藥五味包括辛、苦、甘、咸、微苦、淡、酸、微甘、澀，其中辛味頻數(shù)最高。對(duì)中藥歸經(jīng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)主要以肝經(jīng)、脾經(jīng)、肺經(jīng)為主。（見(jiàn)圖3～5）

圖3 中藥四氣雷達(dá)圖

圖4 中藥五味雷達(dá)圖

圖5 中藥歸經(jīng)雷達(dá)圖

2.4 中藥配伍分析設(shè)置置信度≥0.8，支持度≥0.1，對(duì)48首外治中藥方進(jìn)行配伍關(guān)聯(lián)分析，最后得到關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)24條。（見(jiàn)表2）

表2 中藥配伍表

2.5 聚類(lèi)分析對(duì)48首方劑頻數(shù)排名前20的藥物進(jìn)行聚類(lèi)分析，設(shè)置距離類(lèi)型為歐氏距離，聚類(lèi)方法為最長(zhǎng)距離法。根據(jù)距離≥3.5，可將藥物分為3組。第一組：黃芪、桑枝、紅花、桂枝、雞血藤；第二組：芒硝、細(xì)辛、乳香、芥子、吳茱萸、紫蘇子、萊菔子；第三組：澤瀉、川芎、甘草、當(dāng)歸、冰片、威靈仙、艾葉和伸筋草。（見(jiàn)圖6）

圖6 治療BCRL的高頻藥物系統(tǒng)聚類(lèi)圖

2.6 核心藥物共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析運(yùn)用Cytospace 3.8.0軟件對(duì)所有中藥進(jìn)行共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析，并篩選出核心藥物28個(gè)。圓圈大小表示Degree值大小，圓圈越大代表與該藥物有作用關(guān)系的藥物越多，連線的粗細(xì)表示藥物之間連接的強(qiáng)弱程度。最終得出28味核心藥物，其中紅花、桂枝、黃芪、雞血藤為核心藥物。（見(jiàn)圖7）

圖7 治療BCRL核心藥物的共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)圖

2.7 核心藥物有效成分、靶點(diǎn)及疾病靶點(diǎn)借助TCMSP平臺(tái)根據(jù)篩選條件，最后分別得出核心藥物的有效成分，其中雞血藤15個(gè)、黃芪12個(gè)、紅花13個(gè)、桂枝6個(gè)，并通過(guò)有效成分找出對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)，經(jīng)過(guò)Uniprot轉(zhuǎn)換、去重后得到核心藥物的靶點(diǎn)251個(gè)。在GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)中共檢索到BCRL靶基因509個(gè)，與核心藥物靶基因取交集，最后得到交集靶點(diǎn)60個(gè)。

2.8 藥物成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及分析應(yīng)用Cytospace 3.8.0構(gòu)建核心藥物成分-靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)，其中“GZ”代表桂枝，“HQ”代表黃芪，“JJT”代表雞血藤，“HH”代表紅花，“GZ1”代表桂枝的有效成分，以此類(lèi)推。4個(gè)藥物之間的共有成分則用大寫(xiě)字母表示，“A1”“A2”分別表示雞血藤和黃芪的共有成分，“B1”表示雞血藤和桂枝的共有成分，“C1”是雞血藤、紅花、桂枝的共有成分，“D1”是雞血藤和紅花的共有成分，“E1”“E2”則分別是紅花和黃芪的共有成分，各成分詳見(jiàn)表3，成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)見(jiàn)圖8。

表3 圖8各成分描述

圖8 紅花-雞血藤-黃芪-桂枝的成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

2.9 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及篩選通過(guò)GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)共獲得BCRL靶基因509個(gè)，分別將核心藥物251個(gè)靶基因和疾病靶基因?qū)隒ytospace 3.8.0構(gòu)建藥物和疾病的PPI網(wǎng)絡(luò)，通過(guò)Merge功能得到一個(gè)由4 251個(gè)節(jié)點(diǎn)和106 108條邊構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)，并通過(guò)Degree、Betweenness及Closeness 3個(gè)參數(shù)的2倍中位數(shù)進(jìn)一步篩選，最后得到由64個(gè)節(jié)點(diǎn)和1 060條邊組成的核心網(wǎng)絡(luò)，并根據(jù)Degree值顯示形狀的大小。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Degree值排名前5的蛋白所對(duì)應(yīng)的基因名分別為NTRK1、TP53、ESR1、CUL3、MCM2，為后續(xù)分子對(duì)接蛋白篩選提供借鑒。（見(jiàn)圖9）

圖9 雞血藤-紅花-黃芪-桂枝和BCRL疾病靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)篩選圖

2.10 GO富集分析和KEGG通路分析在Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)中導(dǎo)入交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO富集分析及KEGG通路分析，其中分子功能共84條，生物過(guò)程共1 446條，細(xì)胞組分共33條，共得到KEGG通路245個(gè)。排名前10的生物過(guò)程主要包括對(duì)無(wú)機(jī)物、脂多糖、細(xì)菌來(lái)源分子、上皮細(xì)胞增殖等反應(yīng)，細(xì)胞組分包括膜筏、膜微區(qū)、線粒體外膜、Bcl-2家族蛋白復(fù)合物等，分子功能主要涉及細(xì)胞因子受體結(jié)合、蛋白域特異性結(jié)合、磷酸酶結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、核受體活性等。根據(jù)P值篩選排名前10的信號(hào)通路，包括癌癥的途徑、糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、乙型肝炎、麻疹、丙型肝炎、癌癥中的蛋白多糖、流體剪切應(yīng)力和動(dòng)脈粥樣硬化、PI3K-Akt信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、Jak-STAT信號(hào)通路。（見(jiàn)圖10～11）

圖10 雞血藤-紅花-黃芪-桂枝治療BCRL靶點(diǎn)GO分析圖（排名前10）

圖11 雞血藤-紅花-黃芪-桂枝治療BCRL的KEGG通路分析氣泡圖（排名前10）

2.11 藥物核心成分和疾病關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接根據(jù)PPI網(wǎng)絡(luò)中得出的Degree值結(jié)合通路篩選出關(guān)鍵靶點(diǎn)TP53和ESR1，并分別與核心藥物的關(guān)鍵成分山奈酚、槲皮素、β-谷甾醇進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果顯示6對(duì)分子的結(jié)合能均＜-6.0kcal/mol，表示配體分子和受體蛋白結(jié)合活性較好。β-谷甾醇與活性位點(diǎn)附近的ASN-439氨基酸形成氫鍵結(jié)合到ESR1，與活性位點(diǎn)附近的SER-166氨基酸形成氫鍵結(jié)合到TP53；山奈酚、槲皮素與活性位點(diǎn)附近的SER-456、GLU-385、ARG-515、LEU-511、THR-483、LEU-479這6個(gè)氨基酸形成氫鍵結(jié)合到ESR1；山奈酚與活性位點(diǎn)附近的PRO-222、HIS-233、GLU-198這3個(gè)氨基酸形成氫鍵結(jié)合到TP53；槲皮素與活性位點(diǎn)附近的GLU-224、PRO-222、HIS-233、GLU-198這4個(gè)氨基酸形成氫鍵結(jié)合到TP53。（見(jiàn)圖12）

圖12 分子對(duì)接模式圖

3 討 論

BCRL在中醫(yī)學(xué)中屬于“水腫”范疇?！端貑?wèn)·至真要大論篇》中記載“諸濕腫滿，皆屬于脾”，故后世醫(yī)家多從健脾利水著手治療。張微微等[12]則自擬溫陽(yáng)利水方進(jìn)行治療。《景岳全書(shū)·腫脹》就曾記載“凡水腫等癥，乃肺脾腎三臟相干之病。蓋水為至陰，故其本在腎”，強(qiáng)調(diào)治腫以腎陽(yáng)為根本。另外活血化瘀、益氣養(yǎng)陰亦為本病的治法。中醫(yī)外治日漸應(yīng)用于BCRL的治療中，研究[13-17]顯示中藥敷貼、熏蒸、熱敷等中藥外治法治療本病療效顯著。然而各家用藥多樣，對(duì)于藥物的選擇缺乏統(tǒng)一的認(rèn)識(shí)。

淋巴系統(tǒng)由與心血管系統(tǒng)互補(bǔ)的復(fù)雜血管和器官網(wǎng)絡(luò)組成，它在幾個(gè)生物學(xué)事件中起著至關(guān)重要的作用，包括免疫反應(yīng)和間質(zhì)液體、細(xì)胞、分子和組織碎片的動(dòng)態(tài)平衡[18]。盡管有很多研究從基因和分子水平探討了BCRL的形成機(jī)制，但在分子機(jī)制方面的研究仍存在挑戰(zhàn)。本研究從分子通路水平探討核心外治中藥治療乳腺癌相關(guān)淋巴水腫的療效機(jī)制。

3.1 從中藥頻數(shù)分析用藥規(guī)律143味中藥中高頻藥物包括紅花、桂枝、黃芪、雞血藤、當(dāng)歸、芒硝、紫蘇子、細(xì)辛、吳茱萸、川芎、桑枝、萊菔子、威靈仙。紅花、雞血藤、當(dāng)歸、川芎活血通經(jīng)，桂枝、黃芪溫陽(yáng)益氣，芒硝、紫蘇子、萊菔子利水消腫，細(xì)辛、吳茱萸溫陽(yáng)止痛，桑枝通經(jīng)止痛?！爸嗡匆灾窝窝匆灾嗡??！惫驶钛梢岳a(bǔ)血可以利水。故中藥處方中以活血通經(jīng)的紅花頻數(shù)最高。乳腺癌患者經(jīng)過(guò)手術(shù)或化療治療后氣血虧虛，氣虛無(wú)法推動(dòng)血行，則導(dǎo)致氣滯血瘀，水濕停聚，故出現(xiàn)肢體腫脹，沉重。將活血和利水貫穿于治療始末，方能事半功倍。頻數(shù)僅次于紅花的藥物是桂枝，桂枝具有溫通經(jīng)脈、助陽(yáng)化氣之功，少佐桂枝可達(dá)到溫化水濕之效。“氣行則血行”，黃芪通過(guò)益氣達(dá)到活血通經(jīng)的作用，行氣利水，通利水濕，使腫脹自去。

3.2 從四氣五味及歸經(jīng)分析用藥規(guī)律中藥外治方中溫、平、寒性藥物居多，而其中溫性藥物占比最高。溫性藥具有溫通經(jīng)脈、通經(jīng)散寒之功。藥味則以辛、苦、甘為主。辛味能散能行，具有行氣活血的作用；苦味能泄能燥，具有燥濕軟堅(jiān)的作用。而藥物歸經(jīng)則以肝經(jīng)頻數(shù)最高。肝主疏泄，可調(diào)暢三焦的氣機(jī)，從而促進(jìn)水液代謝。

3.3 從中藥配伍分析用藥規(guī)律分析中藥的配伍對(duì)于指導(dǎo)臨床選用藥物具有一定意義。本研究分析了中藥外治方的配伍情況，常用的配伍包括雞血藤-紅花、雞血藤-桂枝、吳茱萸-紫蘇子、紫蘇子-萊菔子等。雞血藤是補(bǔ)血活血要藥，《飲片新參》記載其能“去瘀血，生新血，流利經(jīng)脈。”現(xiàn)代藥理學(xué)表明[19]，雞血藤可以促進(jìn)紅細(xì)胞的生成，提高血紅蛋白的含量。而紅花的活血能力較強(qiáng)，主要取其活血化瘀之效，因此紅花和雞血藤相須為用，共奏補(bǔ)血活血之功，補(bǔ)而不滯。桂枝外用可溫陽(yáng)通脈、化氣行水[20]，桂枝和雞血藤聯(lián)用可加強(qiáng)通利血脈之功。其他幾組配伍，取散寒止痛的吳茱萸和降氣化痰的紫蘇子。萊菔子和紫蘇子則來(lái)自三子養(yǎng)親湯，行氣化飲。

3.4 從聚類(lèi)分析分析用藥規(guī)律通過(guò)對(duì)頻數(shù)前20的中藥進(jìn)行聚類(lèi)分析，以組為單位找到文獻(xiàn)中外用藥的配伍情況，可為用藥提供參考。第一組：黃芪、桑枝、紅花、桂枝、雞血藤。紅花、雞血藤活血補(bǔ)血，桂枝溫通經(jīng)脈，桑枝通經(jīng)絡(luò)行水氣，從而達(dá)到消腫之用，佐以黃芪補(bǔ)氣利水。第二組：細(xì)辛、乳香、芥子、吳茱萸、紫蘇子、萊菔子。該組方主要為三子養(yǎng)親湯加減用藥，三子養(yǎng)親湯主要用于痰濁壅盛，加上吳茱萸散寒止痛，細(xì)辛化飲止痛，乳香消腫通經(jīng)，共同起到消腫通經(jīng)的作用。第三組：澤瀉、川芎、甘草、當(dāng)歸、冰片、威靈仙、艾葉、伸筋草。當(dāng)歸補(bǔ)血活血，川芎行氣活血，威靈仙和伸筋草共奏舒筋活絡(luò)之效，艾葉、冰片止痛，甘草緩急止痛。

3.5 共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析用藥規(guī)律為了更加直觀分析藥物之間的相關(guān)性，通過(guò)構(gòu)建共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析尋找核心藥物并分析其相互作用。本研究應(yīng)用Cytospace軟件進(jìn)行共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，通過(guò)顏色的深淺及節(jié)點(diǎn)的大小，發(fā)現(xiàn)篩選出的28個(gè)核心藥物中，紅花、雞血藤、黃芪、桂枝的連接緊密，可作為后續(xù)選用外敷藥的參考。

BCRL與氣滯血瘀關(guān)系密切，臨床上用藥也多選用活血化瘀、行氣活血、利水消腫的藥物[21-23]，且中藥外治通過(guò)皮膚直達(dá)患處，使水腫更易于吸收消散，且臨床療效顯著。共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)分析最終篩選出的4味中藥不僅具有活血行血之效，還具有通利經(jīng)脈、行氣利水之功。與臨床用藥指導(dǎo)思想一致，具有較好的實(shí)際應(yīng)用性。

3.6 靶點(diǎn)和通路分析BCRL的發(fā)病機(jī)制尚未明確[24]，其影響因素包括手術(shù)切口、清掃淋巴結(jié)數(shù)量、肥胖、激素、基因、高血壓和糖尿病等[25-28]。本研究通過(guò)分析核心藥物的作用靶點(diǎn)和相關(guān)通路，旨在探究治療乳腺癌相關(guān)淋巴水腫的可能作用機(jī)制。通過(guò)PPI網(wǎng)絡(luò)的篩選結(jié)合KEGG通路富集分析，最后得出兩個(gè)關(guān)鍵靶基因：ESR1和TP53。在既往研究中，與乳腺癌相關(guān)淋巴水腫易感性有關(guān)的基因主要包括LCP2、VCAM1等[29-30]。本研究則發(fā)現(xiàn)中藥外治的治療靶基因是ESR1和TP53，對(duì)之前研究結(jié)果進(jìn)行了補(bǔ)充。ESR1即雌激素受體1，與雌激素受體抵抗和乳腺癌密切相關(guān)。已有研究[31]表明女性激素（如黃體酮和雌激素）是調(diào)節(jié)淋巴生理的關(guān)鍵因素，在淋巴水腫的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。除此之外，淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞（LEC）可表達(dá)孕激素和雌激素受體。上述研究都證實(shí)雌激素受體可能是治療BCRL的靶點(diǎn)之一。雞血藤、桂枝、黃芪、紅花組成的核心藥物可能通過(guò)調(diào)節(jié)ESR1從而影響淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞。而TP53基因主要與誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯、凋亡、衰老、DNA修復(fù)或代謝變化相關(guān)[32]。篩選排名前10的信號(hào)通路，發(fā)現(xiàn)AGE-RAGE相關(guān)信號(hào)通路、IL17等與核心藥物的作用機(jī)制中密切相關(guān)。其中AGE-RAG軸的活化可參與到多項(xiàng)下游信號(hào)通路的激活，如參與糖尿病腎病的氧化應(yīng)激、炎癥及纖維化的過(guò)程[33-34]。核心藥物可能通過(guò)抑制AGE-RAGE軸的活化，從而調(diào)節(jié)糖尿病腎病的進(jìn)程，發(fā)揮其減輕水腫的作用。已有研究[35]證實(shí)在BCRL患者的循環(huán)DNA中發(fā)現(xiàn)了促炎性細(xì)胞因子（如IL1、IL2、IL8、IL17、NFKB2）和抗炎細(xì)胞因子（如IL4、IL10、IL13）的變化，中藥可能通過(guò)調(diào)節(jié)炎癥因子的表達(dá)治療疾病。因此，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析結(jié)果對(duì)之前的發(fā)現(xiàn)進(jìn)行了補(bǔ)充和驗(yàn)證，為后續(xù)探討乳腺癌相關(guān)淋巴水腫的分子機(jī)制提供借鑒。

3.7 分子對(duì)接分析本研究篩選的藥物有效成分及基因靶點(diǎn)均成功對(duì)接，且結(jié)合能均＜-5.0 kcal/mol。其中山奈酚、槲皮素和ESR1的結(jié)合能均＜-7.0 kcal/mol，具有強(qiáng)烈的結(jié)合活性。

4 總 結(jié)

本研究通過(guò)古今云醫(yī)案平臺(tái)進(jìn)行數(shù)據(jù)管理和分析，并應(yīng)用數(shù)據(jù)挖掘相關(guān)技術(shù)及網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析篩選已有文獻(xiàn)中證實(shí)有確切療效的中藥外治方中的核心藥物，并進(jìn)行了可能機(jī)制的探討，為臨床上治療乳腺癌相關(guān)淋巴水腫外治方的選擇提供了借鑒，也為后續(xù)的機(jī)制探討奠定了基礎(chǔ)。