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        基于甘松HPLC指紋圖譜的模式識(shí)別研究及綜合主成分評(píng)價(jià)模型*

        2022-11-07 04:23:26楊祎辰王二歡王繼強(qiáng)田國(guó)慶唐茜琳郭方森王雪健馬存德
        中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2022年7期
        關(guān)鍵詞:評(píng)價(jià)

        楊祎辰,王二歡,王繼強(qiáng),田國(guó)慶,唐茜琳,張 淼,郭方森,王雪健,馬存德

        (1.陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院中藥研究院,陜西 咸陽(yáng) 712046;2.陜西步長(zhǎng)制藥有限公司,陜西 西安 710075;3.山東步長(zhǎng)制藥股份有限公司,山東 菏澤 274000)

        甘松,別名香松、甘松香,始載于唐·陳藏器的《本草拾遺》[1]。明·李時(shí)珍稱(chēng)其“產(chǎn)于川西松洲,味甘”,故而得名[2]。甘松外用祛濕消腫,內(nèi)服則有理氣止痛、開(kāi)郁醒脾之功效[3]?,F(xiàn)代藥理臨床研究表明,甘松具有抗心律失常、抗心肌缺血、調(diào)節(jié)血壓等作用。Flora of China指出甘松屬共2種,分布于喜馬拉雅山區(qū),我國(guó)產(chǎn)1種,即Nardostachys jatamansi(D.Don)DC.[4],沿用至今。由于甘松適宜的生長(zhǎng)環(huán)境嚴(yán)苛,人工栽培技術(shù)發(fā)展滯后,多年以來(lái)市場(chǎng)流通供給完全依賴(lài)野生采挖。因此,甘松的野生資源破壞嚴(yán)重,瀕臨滅絕。國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)多種瀕危藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)及資源高效利用進(jìn)行了相關(guān)研究,但甘松卻少見(jiàn)報(bào)道,其研究主要集中在提取分離、臨床醫(yī)學(xué)及藥理藥效學(xué)等方向,涉及質(zhì)量評(píng)價(jià)相關(guān)的研究較少[5]。僅有李瑩等[6]、劉國(guó)林等[7]及買(mǎi)吾蘭江等[8]對(duì)甘松的質(zhì)量評(píng)價(jià)及特征圖譜進(jìn)行了不同程度的研究,但樣本數(shù)量少、采集地點(diǎn)單一,且未建立共有模式,亦未能提出有效的質(zhì)量評(píng)價(jià)方法,已不能有效反映當(dāng)前主產(chǎn)區(qū)甘松藥材的整體質(zhì)量,亟待深入開(kāi)展相關(guān)研究。此外,基于指紋圖譜的綜合主成分分析評(píng)價(jià),已作為當(dāng)前中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)手段之一,廣泛應(yīng)用于丹參[9]、三棱[10]、秦皮[11]等多味大宗中藥材,其評(píng)價(jià)結(jié)果具有客觀、準(zhǔn)確、適用范圍廣等特點(diǎn),可彌補(bǔ)甘松藥材現(xiàn)代化質(zhì)量評(píng)價(jià)手段的空白?;谏鲜霈F(xiàn)狀,本研究以不同產(chǎn)地收集的甘松藥材作為研究對(duì)象,通過(guò)HPLC法建立甘松藥材指紋圖譜,并運(yùn)用主成分分析和系統(tǒng)聚類(lèi)分析,對(duì)所有樣品的圖譜進(jìn)行分析并篩選,建立甘松藥材指紋圖譜;并對(duì)其共有模式進(jìn)行研究,構(gòu)建甘松藥材的綜合主成分評(píng)價(jià)模型,為甘松藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供方法及參考依據(jù),以期規(guī)范當(dāng)前甘松藥材的市場(chǎng)流通及產(chǎn)地采收加工現(xiàn)狀,保障優(yōu)質(zhì)的甘松藥材能夠應(yīng)用于中醫(yī)藥臨床。

        1 儀器與試藥

        1.1 試藥筆者于2021年6—7月,前往四川、甘肅及青海3省,共采集27個(gè)批次甘松藥材樣品。經(jīng)陜西步長(zhǎng)制藥有限公司副主任藥師馬存德鑒定,均為敗醬科甘松屬甘松Nardostachys jatamansi(D.Don)DC.。樣品采集信息表見(jiàn)表1。

        表1 甘松藥材樣品采集信息

        1.2 主要儀器與試劑LC-2030 Plus型液相色譜儀(日本SHIMADZU公司);TU-1810型紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司);TE124S型分析天平(德國(guó)Sartorius公司);QUINTIX224-1CN型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司);HC-3018R型高速冷凍離心機(jī)(安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司);DHG-9050B型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上?,槴\實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);KQ-800KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);TQ-300型高速多功能粉碎機(jī)(上海市天祺盛世科技有限公司)。

        甘松新酮對(duì)照品(批號(hào):AF21021603)、綠原酸對(duì)照品(批號(hào):AF21012553)購(gòu)于成都埃法生物科技有限公司;乙腈、甲醇為色譜純,購(gòu)于美國(guó)BCR試劑公司;水為娃哈哈純凈水,其它試劑均為分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件色譜柱:Diamonsil Plus 5 μm C18-A,250 mm×4.6 mm;流動(dòng)相:A-(乙腈),B-(0.2%磷酸水溶液);柱溫:30℃;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL;檢測(cè)波長(zhǎng):275 nm。洗脫條件見(jiàn)表2。各主成分與鄰峰之間分離度均大于1.5,分離度良好,所測(cè)定的各成分理論塔板數(shù)均不低于5 000。

        表2 洗脫條件

        2.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取甘松新酮對(duì)照品適量,加甲醇制成每1 mL中含0.250 0 mg的溶液;精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品適量,加甲醇制成每1 mL中含1.000 1 mg的溶液,即得。

        2.3 供試品溶液的制備精密稱(chēng)取甘松藥材粉末(過(guò)40目篩)0.5 g,置具塞錐形瓶中,準(zhǔn)確加入甲醇20 mL,密塞,稱(chēng)定重量,超聲處理(功率800 W,頻率40 kHz)15 min,放冷,再稱(chēng)質(zhì)量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

        2.4 方法學(xué)考察

        2.4.1 線性關(guān)系考察 用甲醇稀釋對(duì)照品溶液,分別為原濃度的1、1/2、1/4、1/8、1/16、1/32倍,搖勻,經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾,超聲除氣,備用。在“2.1”項(xiàng)條件下,以液相色譜峰面積(Y)對(duì)兩種成分濃度(mg/L,X),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,分別建立甘松新酮和綠原酸的線性回歸方程:Y=31.380X+11.806,R2=0.999 9;Y=37.373X+36.920,R2=0.999 9。表明甘松新酮在7.8~250.0 mg/L濃度范圍內(nèi)、綠原酸在31.2~1 000.0 mg/L濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

        2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液(編號(hào):S26),在“2.1”項(xiàng)條件下,連續(xù)進(jìn)樣6次。甘松新酮含量分別為1.35%、1.35%、1.32%、1.28%、1.33%、1.43%,平均值為1.34%,RSD為3.74%,綠原酸含量分別為0.15%、0.14%、0.13%、0.14%、0.14%、0.15%,平均值為0.14%,RSD為4.65%。表明儀器精密度良好。

        2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液(編號(hào):S~26),分別于0、2、4、8、12、24 h在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定。甘松新酮含量分別為1.36%、1.32%、1.32%、1.30%、1.30%、1.30%,平均值為1.32%,RSD為1.64%;綠原酸含量分別為0.15%、0.13%、0.14%、0.14%、0.14%、0.14%、0.13%,平均值為0.14%,RSD為4.79%。表明溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取同一樣品(編號(hào):S26)6份,按“2.1”項(xiàng)方法制備,在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定。甘松新酮含量分別為1.33%、1.32%、1.33%、1.35%、1.32%、1.30%,平均值為1.32%,RSD為1.09%;綠原酸含量分別為0.13%、0.13%、0.13%、0.14%、0.13%、0.13%,平均值為0.13%,RSD為2.71%。表明方法的重復(fù)性良好。

        2.4.5 含量測(cè)定 分別取27批次不同產(chǎn)地的甘松藥材,按“2.3”項(xiàng)方法制備,在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定甘松新酮和綠原酸的含量。

        2.4.6 加樣回收率試驗(yàn) 取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的同一樣品(編號(hào):S26)0.5 g,精密稱(chēng)定,平行樣9份,分別加入供試品中待測(cè)成分含量50%、100%、150%的甘松新酮、綠原酸對(duì)照品各3份,混勻;按“2.3”項(xiàng)方法制備,在“2.1”項(xiàng)條件下測(cè)定,分別計(jì)算甘松新酮和綠原酸的加樣回收率。結(jié)果顯示,甘松新酮、綠原酸的平均回收率分別為97.67%和98.81%,RSD分別為1.46%和2.75%。(見(jiàn)表3)

        表3 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=3)

        2.5 樣品測(cè)定綠原酸和甘松新酮為甘松的次生代謝產(chǎn)物,應(yīng)用于甘松質(zhì)量評(píng)價(jià)[12-14]。其中,甘松新酮為現(xiàn)行版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定的甘松藥材指標(biāo)性成分。如圖1所示,27批次甘松藥材的綠原酸含量在0.10%~0.83%范圍內(nèi),其中S15(甘南州瑪曲縣阿萬(wàn)倉(cāng)鎮(zhèn)娘瑪寺)最高,為0.83%,較最低的S18(果洛州久治縣智合日散木)高出730.00%;而甘松新酮含量在0.40%~8.73%范圍內(nèi),其中S25(阿壩州紅原縣邛溪鎮(zhèn)-仿野生栽培)最高,為8.73%,較最低的S16(甘南州瑪曲縣阿萬(wàn)倉(cāng)鎮(zhèn)尼瑪隆)高出2082.50%??梢?jiàn),各產(chǎn)地甘松藥材的綠原酸和甘松新酮含量差異較大,主要原因考慮如下:(1)甘松屬于高原植物,生長(zhǎng)條件苛刻,高原地區(qū)海拔跨度大、氣候各異,不同的生長(zhǎng)環(huán)境影響植物的次生代謝;(2)甘松為多年生草本植物,本研究收集的樣品生長(zhǎng)年限未知,導(dǎo)致主要活性成分含量差異較大;(3)甘松樣品根莖葉花比例不均一,同種藥材的不同部位有效成分含量亦存在一定的差異?,F(xiàn)行規(guī)定,本品按干燥品計(jì)算,含甘松新酮(C15H22O3)不得少于0.10%。本研究收集的27個(gè)不同批次甘松藥材均高于此一標(biāo)準(zhǔn)。

        圖1 不同產(chǎn)地甘松藥材主要活性成分含量

        2.6 指紋圖譜的建立與化學(xué)模式識(shí)別分析

        2.6.1 甘松藥材樣品指紋圖譜及相似度評(píng)價(jià) 通過(guò)將27批次不同產(chǎn)地的甘松藥材樣品指紋圖譜數(shù)據(jù)導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件》(2012版)軟件,并對(duì)其進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)分析。以編號(hào)為S26的樣品圖譜作為參照?qǐng)D譜,篩選出17個(gè)主要特征峰,構(gòu)建甘松藥材的指紋圖譜,并對(duì)2、13號(hào)峰進(jìn)行指認(rèn),分別為綠原酸和甘松新酮。后經(jīng)多點(diǎn)校正,得到27批次甘松樣品圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度計(jì)算結(jié)果在0.754~0.996之間。其中,S7、S16、S25樣品的相似度分別為0.881、0.754、0.896,而其它批次樣品的相似度均大于0.900。(見(jiàn)圖2)

        圖2 27批次甘松藥材指紋圖譜

        2.6.2 聚類(lèi)分析 通過(guò)將17個(gè)共有峰峰面積作為變量,運(yùn)用SPSS 23.0軟件,采用組間聯(lián)接法,以平方歐式距離27批次甘松藥材樣品進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)分析,結(jié)果見(jiàn)圖3。當(dāng)組間距離大于10時(shí),27批次樣品聚為2類(lèi),其中S25(仿野生栽培品)、S27(大田栽培品)為一類(lèi),剩余批次為一大類(lèi)。當(dāng)組間距離為5~10區(qū)間,最多可分為5類(lèi)。其中,S4、S25、S27分別單獨(dú)為一類(lèi);甘南州的2批(S7、S16)及S24(仿野生栽培品)為一類(lèi);剩余批次為一大類(lèi),聚類(lèi)特征較為模糊。當(dāng)組間距離為0~5區(qū)間,該大類(lèi)中的甘南州的3批(S11、S13、S15)、果洛州的S18及阿壩州的(S20、S23)為一類(lèi);S5、S8、S9、S17、S26為一類(lèi);甘南州的5批(S1、S6、S10、S12、S14)及阿壩州的2批(S19、S21)為一類(lèi);甘南州的2批(S2、S3)為一類(lèi);阿壩州的2批(S7、S247)為一類(lèi);S22單獨(dú)為一類(lèi);同時(shí),S4、S16、S25、S27分別單獨(dú)為一類(lèi)。綜上,甘松野生品及栽培品差異明顯,而不同產(chǎn)地的甘松亦存在一定的差異。因此,可用聚類(lèi)分析的方法對(duì)藥材樣品進(jìn)行分類(lèi)評(píng)價(jià),其結(jié)果與相似度評(píng)價(jià)結(jié)果基本保持一致。

        圖3 27批次甘松藥材的聚類(lèi)分析

        2.6.3 主成分分析(PCA)通過(guò)將27批次甘松藥材樣品的17個(gè)共有峰峰面積作為變量,采用SPSS 23.0軟件將原始數(shù)據(jù)矩陣經(jīng)z-score標(biāo)準(zhǔn)化處理后。通過(guò)降維因子分析中的KMO檢驗(yàn)和Barlett球形度檢驗(yàn),結(jié)果顯示:其中KMO取樣適切性量數(shù)為0.728,適合進(jìn)行主成分分析;Bartlett球形度檢驗(yàn)近似卡方為679.697,自由度為136,P=0.000<0.001,顯示該例變量可以為主成分分析提供合理基礎(chǔ)。同時(shí),經(jīng)主成分分析及權(quán)重計(jì)算后,前3個(gè)主成分特征值均大于1,累積貢獻(xiàn)率達(dá)83.314(見(jiàn)表4);而因子分析碎石圖(見(jiàn)圖4)亦可看出,在第3個(gè)主成分特征值處出現(xiàn)拐點(diǎn),后逐漸趨于平緩?;谏鲜龇治鼋Y(jié)果,故提取前3個(gè)成分為主成分。基于該條件,以產(chǎn)地作為Group,批次作為Observations,運(yùn)用OriginPro 2021軟件對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化處理后的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行主成分分析,并繪制Score Plot圖(見(jiàn)圖5)??梢钥闯?,除S4、S16、S25、S27外,其余批次藥材距離較近且均分別處于兩個(gè)置信橢圓范圍內(nèi),與系統(tǒng)聚類(lèi)分析結(jié)果基本一致。

        圖4 碎石圖

        表4 27批甘松共有峰特征值與貢獻(xiàn)率

        圖5 Score Plot圖

        2.6.4 綜合主成分評(píng)價(jià)模型 由甘松主成分因子負(fù)荷矩陣(見(jiàn)表5)可知,主成分1主要解釋了F4~F5、F8~F17共13個(gè)色譜峰的信息,其中,F(xiàn)5及F8~F17在主成分1中的正相負(fù)荷值均大于0.6,即峰面積增加,第1主成分權(quán)重亦增大;主成分2主要解釋了F1~F3、F6共4個(gè)色譜峰的信息,僅有F7在主成分3中的正相負(fù)荷值大于0.6。此外,F(xiàn)7~F12、F16共7個(gè)色譜峰在全部主成分中負(fù)荷值均為正相。通過(guò)綜合主成分分析,將甘松17個(gè)共有峰在各主成分中的因子負(fù)荷值轉(zhuǎn)換為對(duì)應(yīng)的線性組合系數(shù)(見(jiàn)表5),進(jìn)而得到主成分1、2、3的評(píng)分線性方程Y1、Y2、Y3,再與3個(gè)主成分的方差貢獻(xiàn)率加權(quán)后即得到甘松藥材綜合質(zhì)量評(píng)價(jià)模型F。將z-score標(biāo)準(zhǔn)化處理后的27批次甘松藥材樣品的17個(gè)共有峰峰面積數(shù)值依次代入上述方程及評(píng)價(jià)模型后,結(jié)果即為甘松藥材綜合主成分F值。對(duì)F值進(jìn)行排序,其結(jié)果亦是對(duì)甘松質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)的結(jié)果。(見(jiàn)表6)

        表5 主成分分析因子負(fù)荷矩陣及線性組合系數(shù)

        表6 綜合主成分評(píng)價(jià)結(jié)果

        計(jì)算公式如下:

        綜上可知,主成分因子得分值計(jì)算公式為Yi=∑Xj·λj,而綜合主成分評(píng)價(jià)模型F=∑Yi;式中,Xj為標(biāo)準(zhǔn)化后的峰面積值,λj為線性組合系數(shù)。

        2.6.5 甘松藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的建立 基于相似度評(píng)價(jià),參考主成分分析及系統(tǒng)聚類(lèi)分析結(jié)果,將S4、S16、S25、S27批次剔除,取剩余23批次甘松樣品建立甘松藥材的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。將23批次甘松樣品指紋圖譜數(shù)據(jù)重新導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》(2012版)軟件,對(duì)其進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)(見(jiàn)表7);并繼續(xù)設(shè)定S26為參照?qǐng)D譜,經(jīng)多點(diǎn)校正、匹配,R為生成的對(duì)照指紋圖譜(見(jiàn)圖6)。結(jié)果顯示,剩余23批次甘松樣品與對(duì)照?qǐng)D譜比較的相似度均在0.915以上,這可為甘松藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

        圖6 甘松藥材標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜

        表7 23批次甘松樣品的相似度評(píng)價(jià)

        3 討 論

        3.1 供試品的制備方法參照2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》甘松新酮“含量測(cè)定”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法[3],在超聲處理(功率50 W,頻率45 kHz)15 min條件下,開(kāi)展重復(fù)性試驗(yàn)時(shí),RSD較大??紤]為超聲提取不充分,故采用超聲處理(功率800 W,頻率40 KHz)15 min,結(jié)果較好。此外,2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》規(guī)定甘松的入藥部位為根及根莖,而本研究所采集的甘松樣品均為全草。原因在于甘松資源均依賴(lài)于野生,且資源量匱乏,實(shí)際流通品均為全草。因此,結(jié)合市場(chǎng)及產(chǎn)地流通調(diào)研情況及文獻(xiàn)報(bào)道,本研究中各批次樣品檢測(cè)部位均為甘松全草。

        3.2 色譜條件的選擇為了保證建立的甘松指紋圖譜能夠體現(xiàn)更多的化學(xué)成分,且篩選的2種有效成分具有較好的分離度,使得該方法適宜于定量分析。故分別對(duì)綠原酸和甘松新酮對(duì)照品溶液在紫外190~400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,發(fā)現(xiàn)其最大吸收波長(zhǎng)差異較大。綜合考慮,選擇在275 nm波長(zhǎng)條件下對(duì)2種成分進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果較好。此外,配置2種成分的混合對(duì)照品溶液考察洗脫體系,結(jié)果發(fā)現(xiàn)以乙腈-0.2%磷酸水溶液作為流動(dòng)相,對(duì)混合對(duì)照品的分離度較好,基線穩(wěn)定,色譜峰理論塔板數(shù)高,同時(shí)也適用于供試品溶液。

        買(mǎi)吾蘭江等[8]建立的甘松藥材HPLC指紋圖譜方法需60 min,且30 min后已無(wú)共有特征峰出現(xiàn),僅標(biāo)注4個(gè)共有峰;而李瑩等[5]以10批藥材,建立的甘松HPLC指紋圖譜方法則需65 min,但色譜峰分離度一般。本研究構(gòu)建的HPLC指紋圖譜,分析時(shí)間短(40 min),減少了溶劑用量,降低了分析及人工成本,同時(shí)各色譜峰分離效果良好。

        3.3 分析方法評(píng)價(jià)23批次藥材與對(duì)照指紋圖譜相似度均在0.915以上,表明不同產(chǎn)地的甘松藥材質(zhì)量較穩(wěn)定。主成分分析結(jié)果與聚類(lèi)分析結(jié)果基本一致,大多數(shù)甘松野生品聚為一類(lèi),而甘松栽培品聚為一類(lèi),但其中亦有個(gè)別產(chǎn)地的甘松野生品與栽培品未能有效聚類(lèi)??紤]由于部分產(chǎn)地的栽培甘松采用仿野生栽培模式,因此質(zhì)量與野生品較為接近。此外,由于甘松屬多年生草本,而此生代謝產(chǎn)物的積累往往與植物的生長(zhǎng)年限相關(guān),野生甘松生長(zhǎng)年限等信息的不明確,亦會(huì)影響聚類(lèi)分析的結(jié)果。因此,尚需開(kāi)展不同采收期栽培甘松或不同生長(zhǎng)年限的野生甘松質(zhì)量評(píng)價(jià)研究。綜上,建立的分析方法基本可行,亦可為甘松的來(lái)源及產(chǎn)地識(shí)別提供支持。

        3.4 綜合主成分評(píng)價(jià)模型指紋圖譜是中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)、控制的主要手段之一,其可通過(guò)相似度評(píng)價(jià)體現(xiàn)不同批次藥材的差異;但當(dāng)樣本量過(guò)大且相似度較為接近時(shí),單一的指紋圖譜便不能有效、準(zhǔn)確地判斷藥材質(zhì)量的優(yōu)劣,往往需要結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)價(jià)[15-17]。而綜合主成分評(píng)價(jià)法是在主成分分析的基礎(chǔ)上,在不損失或盡量少損失原樣本內(nèi)在指標(biāo)信息的前提下,將數(shù)個(gè)具有一定相關(guān)性的指標(biāo)通過(guò)加權(quán)計(jì)算,轉(zhuǎn)換成一個(gè)綜合指標(biāo)F值,以此來(lái)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)、考量,并據(jù)此對(duì)不同樣本進(jìn)行優(yōu)劣排序。本研究建立的綜合主成分評(píng)價(jià)模型結(jié)果表明,S27、S25的F值最高,分別為隴南大田栽培品及阿壩仿野生栽培品,而系統(tǒng)聚類(lèi)分析中當(dāng)組間距離大于10時(shí),S27、S25亦聚為一類(lèi),其它批次為一大類(lèi),二者結(jié)果保持一致;S2、S3的F值最低,均為甘南合作的野生品,而系統(tǒng)聚類(lèi)分析中當(dāng)組間距離小于3時(shí),S2、S3聚為一類(lèi),故綜合主成分評(píng)價(jià)模型得到了系統(tǒng)聚類(lèi)分析的驗(yàn)證。因此,基于甘松藥材HPLC指紋圖譜構(gòu)建的綜合主成分評(píng)價(jià)模型較好,具有一定參考價(jià)值。

        4 小 結(jié)

        本研究通過(guò)HPLC法建立了不同產(chǎn)地甘松藥材的指紋圖譜,通過(guò)主成分分析及系統(tǒng)聚類(lèi)分析兩種統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)色譜數(shù)據(jù)進(jìn)行模式識(shí)別初探?;诜治鼋Y(jié)果,剔除了個(gè)別樣品,確定入選的樣品批次,最終得到了較為標(biāo)準(zhǔn)的甘松藥材對(duì)照指紋圖譜,為甘松藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究奠定了基礎(chǔ)。此外,首次建立了基于指紋圖譜的甘松藥材綜合主成分評(píng)價(jià)模型。其評(píng)價(jià)結(jié)果與系統(tǒng)聚類(lèi)基本保持一致,并能夠較好地體現(xiàn)相似度評(píng)價(jià),其F值的優(yōu)劣排序具有一定的客觀性,可作為未來(lái)甘松藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)的手段。同時(shí),研究結(jié)果亦表明不同產(chǎn)地的野生甘松藥材、野生與栽培甘松藥材的質(zhì)量均具有明顯的差異。因此,基于本研究取得的成果,亟待進(jìn)一步開(kāi)展甘松野生與栽培品主要活性成分及不同產(chǎn)地甘松的主要活性成分含量研究,為甘松的產(chǎn)地與品質(zhì)的相關(guān)性及甘松藥材的道地性提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐[18-21]。但本研究亦有不足之處,由于全部27批次甘松樣品生長(zhǎng)年限等信息不明確,導(dǎo)致主要活性成分含量測(cè)定差異較大,未能得到與產(chǎn)地的相互關(guān)聯(lián)性分析,具有一定的局限性,還需進(jìn)一步優(yōu)化樣品采集方式,深入開(kāi)展相關(guān)研究。

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