文/許昊川 葛明峰 徐開崇 夏武強 王雯瓊 徐勝威
為了解寧波市南美白對蝦苗種病原攜帶情況,于2021年在寧波市象山、寧海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等區(qū)縣主要南美白對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)區(qū)采集522批次蝦苗樣品,以PCR方法檢測樣品攜帶蝦肝腸胞蟲(EHP)、急性肝胰腺壞死?。ˋHPND)、十足目虹彩病毒1(DIV1)和白斑綜合征病毒(WSSV)病原情況,結果表明近年來寧波市南美白對蝦苗種病原攜帶狀況日漸改善,并為下一步寧波市開展南美白對蝦疾病防控工作提供參考。
南美白對蝦作為一種生長迅速、廣泛耐鹽、適應性強的水產(chǎn)動物,自引入寧波市以來,在象山、寧海、慈溪、奉化、余姚、鄞州等地形成了一定養(yǎng)殖規(guī)模。目前寧波市南美白對蝦養(yǎng)殖面積超過10萬畝,每年產(chǎn)值超過10億元。
與此同時,養(yǎng)殖病害問題日漸嚴重,蝦肝腸胞蟲病、白斑綜合征、急性肝胰腺壞死病、十足目虹彩病毒病等疾病時有發(fā)生,導致養(yǎng)殖南美白對蝦大量死亡,給養(yǎng)殖戶造成巨大經(jīng)濟損失,對水產(chǎn)養(yǎng)殖造成較大影響。
為了摸清寧波市南美白對蝦疾病情況,降低疾病發(fā)生概率,寧波市于2021年采集象山、寧海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等地蝦苗進行蝦肝腸胞蟲(EHP)、急性肝胰腺壞死病(AHPND)、十足目虹彩病毒1(DIV1)和白斑綜合征病毒(WSSV)等病原檢測,統(tǒng)計寧波市南美白對蝦蝦苗病原攜帶率,以期為寧波市南美白對蝦疾病防控工作提供參考。
2021年從象山、寧海、奉化、余姚、慈溪、鄞州等地養(yǎng)殖區(qū)和南美白對蝦苗種標粗場采集樣品,共計522批次,每批次樣品不少于400尾。樣品置于充氧袋中或無水乙醇中固定后送至實驗室,24h內(nèi)進行檢測。具體采樣信息見表1。
表1 樣品采集時間及數(shù)量信息(單位:批次)
1.樣品處理
樣品送達實驗室后,瀝干水分并以超純水沖洗,隨機取150尾左右蝦苗混合后研磨均質(zhì)待用,剩余蝦樣作為備份于-80℃保存。
2.DNA提取
利用DNA提取試劑盒提取樣品總DNA,于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
3.病原PCR檢測
采用套式PCR檢測,引物序列及目的條帶大小見表2。
表2 引物序列和產(chǎn)物片段大小
4.PCR擴增產(chǎn)物檢測
取5μL PCR擴增產(chǎn)物,于1.5%瓊脂糖凝膠中(含核酸染料)電泳檢測,并記錄檢測結果。
5.數(shù)據(jù)處理
使用Origin9.1軟件對采樣檢測數(shù)據(jù)進行數(shù)據(jù)分析及數(shù)據(jù)對比。其中陽性樣品指攜帶任意一種或多種檢測病原的蝦苗樣品,整體陽性數(shù)指來自同一區(qū)域的陽性樣品總數(shù)。整體陽性率=整體陽性數(shù)/樣品總數(shù)×100%。
檢測病原包括WSSV、DIV1、EHP、AHPND,522批次南美白對蝦蝦苗中共計檢出21批次攜帶病原,整體陽性率為4.02%。其中,EHP陽性15批次,陽性率2.87%;AHPND陽性4批次,陽性率0.77%;DIV1陽性2批次,陽性率0.38%;WSSV未檢出。具體各月份病原檢出情況見表3。
表3 2021年度南美白對蝦苗種病原陽性樣品月度分布情況(單位:批次)
由圖1可知,2016年以來,寧波市南美白對蝦苗種病原攜帶率持續(xù)下降。2021年監(jiān)測的522批次蝦苗中,共計檢出21批次攜帶病原,整體陽性率為4.02%,顯著低于2020年15.30%的整體陽性率。WSSV實現(xiàn)清零,DIV1和AHPND檢出率低于1%,EHP陽性檢出率為2020年的32%。這說明寧波市南美白對蝦苗種疾病防控工作取得了良好效果。
圖1 近五年寧波市蝦苗病原監(jiān)測陽性率情況
從病原檢出時間來看,AHPND、DIV1均只在某一個月檢出,說明不同月份該類病原出現(xiàn)有一定的偏向性;EHP在3、4、6、7、8月間均有檢出,且6月檢出陽性率最高,EHP檢出的普遍性說明寧波市蝦苗EHP攜帶風險仍較高,且6月份育苗條件可能更適合EHP繁衍。這一結果與2020年檢測結果相吻合,這表明6月是南美白對蝦感染EHP的高峰期,須提高警惕。
從多年的監(jiān)測數(shù)據(jù)來看,在苗種階段,EHP為寧波市近幾年南美白對蝦陽性檢出率最高的病原。EHP已成為制約寧波市南美白對蝦養(yǎng)殖發(fā)展最重要和最為高發(fā)的疾病之一。
寧波市歷年對蝦苗種病原監(jiān)測分析結果表明:6月份為南美白對蝦蝦苗EHP檢出率最高的時段,而8月份為南美白對蝦養(yǎng)成期對蝦EHP檢出率最高期。這一數(shù)據(jù)提示本地養(yǎng)殖條件下,被EHP感染的蝦苗在養(yǎng)殖40天左右可能出現(xiàn)明顯癥狀,需要養(yǎng)殖戶密切觀察。
目前EHP仍無有效治療措施,EHP在環(huán)境中的傳播機制尚不明確,但已有證據(jù)表明EHP可以在環(huán)境中經(jīng)由養(yǎng)殖餌料、水體實現(xiàn)水平傳播,還可由親蝦傳染至子代實現(xiàn)垂直傳播,傳染能力較強?;鶎羽B(yǎng)殖戶應重視每年養(yǎng)殖前的消毒工作,減少其環(huán)境傳播的風險。養(yǎng)殖過程中,也應盡量做到養(yǎng)殖工具專池專用,降低養(yǎng)殖塘口之間的疾病傳播概率。在購苗、選苗時應加強苗種病原檢測,放養(yǎng)SPF苗種,在源頭上把關病原的輸入性傳播。