■雷元培 周建川 鄭文革 趙麗紅 計 成*

（1.河南億萬中元生物技術有限公司，河南鄭州 451191；2.鐵騎力士食品有限責任公司，四川成都 610000；3.中國農業(yè)大學動物科學技術學院，動物營養(yǎng)學國家重點實驗室，北京 100193)

霉菌毒素是由多種真菌產生的具有毒性的次級代謝產物，具有高效性、穩(wěn)定性、富集性、特異性、協(xié)同性、隱蔽性及地域性等[1]特點。由于霉菌的生存環(huán)境廣泛，任何農作物包括谷物、飼草等，在田間生長、收獲、運輸、儲藏及加工過程中皆可受到霉菌毒素的污染。因此，每年全球的糧食作物，包括食物因受霉菌毒素的影響遭受巨大的經濟損失。

目前已有300～400種霉菌毒素被發(fā)現(xiàn)，其中在各種食品與飼料中廣泛存在且危害較大的霉菌毒素有黃曲霉毒素（AF）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、嘔吐毒素（DON）、伏馬毒素、赭曲霉毒素、T-2 毒素、煙曲霉毒素等。AF是強致癌物之一，且黃曲霉毒素B1（AFB1）的毒性最大，致癌性最強[2]；ZEN具有類雌激素效應及合成代謝活性[3]，可引起動物的生殖障礙，在母豬上尤為明顯；DON 可在豬體內富集，低劑量可引發(fā)動物萎靡不振和嘔吐，高劑量可導致動物消化道壞死甚至死亡[4]。動物采食了受到一種或多種霉菌毒素污染的飼料或原料后，不僅導致健康受損、生產性能下降等，而且霉菌毒素可在肉、蛋、奶等畜產品中富集，通過食物鏈作用，危害人類健康。

不同的霉菌生長所需的環(huán)境不同，因此，不同谷物在不同天氣、溫度、濕度等條件下受霉菌毒素污染情況不同。此外，一種霉菌在不同環(huán)境中可以產生多種不同霉菌毒素，多種霉菌也可產生相同的霉菌毒素。所以，不同地區(qū)、時間及天氣等環(huán)境下的原料及飼料受霉菌毒素污染的情況不同。為探究2019-2020 年我國飼料原料及飼料中霉菌毒素污染情況，本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對從全國各地采集到的飼料及飼料原料中AFB1、ZEN、DON進行了抽樣檢測分析，以供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

高效液相色譜儀（SHIMADZU LC-20AT，日本津島）；熒光檢測器（SHIMADZU RF-20A，日本津島）；色譜柱為Agilent C18 色譜柱，5 μm×4.6 mm×150 mm（日本津島）；色譜工作站（島津高效液相色譜LC工作站）；AFB1、ZEN 和DON 免疫親和柱，由德國Aokin 公司生產，具體操作步驟參考德國Aokin 公司霉菌毒素檢測的標準操作程序。AFB1、ZEN 和DON 標準溶液購自美國Supelco。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品采集

采樣時間：2019年1月-2020年12月。

采樣地點：遼寧、吉林、北京、天津、湖北、湖南、河南、河北、山東、浙江、安徽、江蘇、四川、福建、廣東、廣西等區(qū)域飼料原料和全價料。

樣品采集按照“飼料采樣GB/T 14699.1—2005”[5]進行，每份樣品不少于500 g。樣品粉碎后放置于-20 ℃冰箱中保存待測。樣品種類和數(shù)量見表1。

表1 2019-2020年采集的樣品種類及數(shù)量（個）

1.2.2 試樣的制備與提取

試樣制備與提取的具體操作步驟參考德國Aokin公司免疫親和柱的標準操作程序執(zhí)行。

1.2.3 毒素的檢測

使用免疫親和柱-高相液相色譜法對樣品中的AFB1、ZEN和DON進行檢測。

AF、ZEN、DON 檢測方法分別參照GB/T 30955—2014《飼料中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的測定 免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》[6]、GB/T 28716—2012《飼料中玉米赤霉烯酮的測定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》[7]、GB/T 30956—2014《飼料中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的測定免疫親和柱凈化—高效液相色譜法》[8]中的測定方法，并根據(jù)試驗情況進行適當調整。

AFB1檢測條件確定為：流動相為甲醇∶水（45∶55）；流速為1 mL/min；進樣量為20 μL；柱溫35 ℃；外標法定量；檢測波長：λex=360 nm、λem=440 nm；出峰時間28 min。

ZEN檢測條件確定為：流動相為乙腈∶水∶甲醇（46∶46∶8）；流速為1 mL/min；進樣量為20 μL；柱溫35 ℃；外標法定量；檢測波長：218 nm，λem=440 nm；出峰時間16 min。

DON 檢測條件確定為：流動相為乙腈∶水（1∶9）；流速為1 mL/min；進樣量為20 μL；柱溫35 ℃；外標法定量；檢測波長：218 nm；出峰時間12 min。

1.2.4 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel軟件進行處理分析。按照飼料樣品中AFB1、ZEN 和DON 含量高于檢出限作為檢出，本研究中陽性樣品設定檢出限值如下：AFB1 0.5 μg/kg、ZEN 1 μg/kg 和DON 10 μg/kg。飼料和原料中AFB1、ZEN 和DON 超標限量參照我國國家標準《飼料衛(wèi)生標準》（GB 13078—2017）[9]執(zhí)行。

2 結果與分析

2.1 2019-2020 年飼料及飼料原料中霉菌毒素污染總體情況（見圖1、圖2）

圖1 2019年飼料及飼料原料中霉菌毒素污染組成

圖2 2020年飼料及飼料原料中霉菌毒素污染組成

2019 年對全國各地采集的1 202 份樣品進行了3 606 次檢測，其中3 050 次檢測結果呈陽性，陽性率為84.58%。在1 202 份樣品中，3 種霉菌毒素均未檢出的樣品占比0.67%（8份），僅1種霉菌毒素陽性檢出率為9.57%（115 份），2 種霉菌毒素陽性檢出率為25.12%（302 份），3 種霉菌毒素陽性檢出率為64.64%（777份）（見圖1）。

2020年共采集樣品1 416份，共檢測4 248項次，其中4 070 項次檢測結果呈陽性，陽性率為95.81%。在1 416 份樣品中，3 種霉菌毒素均未檢出的樣品僅占比0.56%（8 份），1 種霉菌毒素陽性檢出率為4.73%（67份）；2種霉菌毒素陽性檢出率為7.27%（103份）；3種霉菌毒素陽性檢出率高達87.43%（1 238份）（見圖2）。

2.2 2019-2020年飼料及飼料原料中AFB1污染情況（見表2、圖3）

2019—2020 年抽檢的全國配合飼料及飼料原料中AFB1檢測結果見表2。由表2可知2019年玉米、玉米副產物、小麥及麩皮、雜粕及全價配合飼料中AFB1的檢出率分別為97.93%、94.91%、94.88%、92.12%、98.77%，超標率分別為14.88%、19.44%、3.98%、0、7.69%；2020 年的檢出率分別為97.04%、90.83%、87.05%、94.88%、100.00%，超標率分別為9.63%、0.92%、1.55%、3.72%、7.27%。2019年玉米、玉米副產物中AFB1的超標率較高，小麥及麩皮、雜粕中超標率較低，2020年玉米中AFB1超標率最高，玉米副產物、小麥及麩皮中超標率較低。

表2 2019-2020年飼料原料及全價配合飼料中霉菌毒素檢測結果

由圖3 可以看出，2019 年和2020 年玉米、玉米副產物中AFB1平均值均較高，分別為17.6、30.89 μg/kg和13.54、11.02 μg/kg，表明玉米及玉米副產物較易受AFB1 污染。2019 年各類飼料和原料中AFB1 平均含量均高于2020年，表明2019年飼料及原料受AFB1污染程度高于2020年。

圖3 2019-2020年各類樣品中AFB1平均含量比較

2.3 2019-2020 年飼料及飼料原料中ZEN 污染情況（見表2、圖4）

圖4 2019-2020年各類樣品中ZEN平均含量比較

從表2可以看出，2019年玉米、玉米副產物、小麥及麩皮、雜粕和全價配合飼料中ZEN的檢出率分別為90.08%、100.00%、91.62%、84.84%、100.00%，超標率分別為6.94%、17.36%、7.48%、0、6.77%；2020 年的檢出率分別為95.31%、100.00%、87.05%、82.79%、100.00%，超標率分別為7.90%、9.63%、17.10%、0、5.45%。2019年玉米副產物ZEN超標率最高，其中主要以DDGS 為主，2020 年玉米副產物、小麥及麩皮中ZEN 超標率較高，且2019 年和2020 年雜粕的超標率均為0，表明雜粕最不易受ZEN污染。

由圖4 可知，2019 年和2020 年玉米副產物、小麥及麩皮中ZEN 平均含量均較高，分別為233.7、180.53 μg/kg 和739.51、280.08 μg/kg，且雜粕中ZEN 平均含量為最低。且由整體結果可以看出，除2020 年個別玉米副產物ZEN 含量較高，2019 年和2020 年飼料及原料中ZEN 污染均較輕，原料質量相對較好，但相比于2019年，2020年原料中ZEN污染略為嚴重。

2.4 2019-2020 年飼料及飼料原料中DON 污染情況（見表2、圖5）

圖5 2019年-2020年各類樣品中DON平均含量比較

由表2可知，2019年玉米、玉米副產物、小麥及麩皮、雜粕和全價配合飼料中DON 檢出率分別為98.35%、100.00%、100.00%、92.72%、98.15%，超標率分別為0、4.63%、11.02%、0、3.38%，2020 年檢出率分別為99.51%、100.00%、100.00%、87.44%、100.00%，超標率分別為8.64%、6.88%、5.18%、0、9.09%。2019 年小麥及麩皮中DON 超標率最高，污染較為嚴重，而2020 年玉米和全價配合飼料中DON 超標率略高，其中玉米以東北玉米中DON含量較高。

由圖5 可以看出，2019 年和2020 年玉米副產物、小麥及麩皮中DON 平均含量較高，分別為1 161.09、1 056.45 μg/kg 和1 160.47、1 205.13 μg/kg，表明小麥及麩皮較易受DON 污染，玉米副產物次之。相比于2019 年，2020 年玉米副產物、小麥及麩皮和雜粕中DON 平均含量相對穩(wěn)定，但玉米和全價配合飼料中DON 含量與2019 年相比明顯升高，需重點關注玉米和全價配合飼料中DON含量。

3 討論

本研究檢測結果顯示，2019 年和2020 年檢測的飼料及飼料原料樣品中，3 種霉菌毒素菌均陰性檢出樣品分別占比0.67%、0.56%，同時檢測出2 種或3 種霉菌毒素的樣品分別占比89.76%、94.71%，表明2019-2020年我國飼料及飼料原料普遍受霉菌毒素污染，且大部分樣品中同時含有多種霉菌毒素。杜妮[10]研究報道在我國部分地區(qū)抽檢的飼料及飼料原料中，AFB1、ZEN、DON、FB1 和T-2 毒素都呈現(xiàn)高陽性率，且同時檢測到3 種及以上霉菌毒素的樣品占比93.63%，表明我國飼料及飼料原料中霉菌毒素污染范圍較廣，且大多數(shù)樣品同時受多種霉菌毒素污染，與本研究檢測結果一致。Rui等[11]在中國飼料及飼料原料中霉菌毒素單一及合并存在研究中報道，超過75%的檢測樣品同時被2～3種霉菌毒素污染，與本研究結果一致。

飼料及原料中AFB1 檢測結果表明，2019-2020年玉米中AFB1 的檢出率和超標率均較高，可能因為玉米中含有豐富的營養(yǎng)成分，為微生物代謝提供良好的條件，使霉菌容易生長并產生毒素[12]。本研究中2019-2020 年全價配合飼料中AFB1 檢出率均較高，表明全價配合飼料受AFB1 污染較為普遍，與雷元培等[13]在2018 年飼料及飼料原料中霉菌毒素污染調查結果一致。黃志偉等[14]在分析17 種植物性飼料原料中伏馬毒素（B1+B2）、赭曲霉毒素A、T-2 毒素、AFB1 污染中報道，花生粕中AFB1 檢出率和超標率均為100.00%，表明花生粕易受AFB1 污染，與本研究中2019-2020 雜粕中AFB1 檢出率均接近90%結果相似，但本檢測結果中雜粕中AFB1 超標率均較低，可能與雜粕種類及地區(qū)、天氣等外界因素不同有關。

本研究抽檢的飼料及飼料原料中，2019 年和2020 年玉米副產物中ZEN 的檢出率均為100.00%，超標率分別為17.36%、9.63%，表明玉米副產物受ZEN 污染較為嚴重。周建川等[15]、劉鳳芝等[16]在飼料及飼料原料中霉菌毒素污染調查中均表明玉米副產物受ZEN 污染最嚴重，與本研究結果相似。本研究中2019-2020 年玉米副產物中ZEN 平均值分別為233.70、739.51 μg/kg，且主要以DDGS 為主。黃俊恒等[17]在2018 年19 省市飼料及飼料原料霉菌毒素污染分析中表明，DDGS 受ZEN 中度以上污染的樣品比例均高于其他種類樣品，與本研究結果一致，可能是因為毒素在DDGS 加工過程中得到了富集。

飼料及原料中DON 檢測結果表明，2019 年小麥及麩皮中DON 檢出率為100.00%，超標率為11.02%，說明2019年小麥及麩皮受DON污染最為嚴重。王娟等[1]在2019年飼料原料污染調查中表明，麩皮和次粉中DON 整體污染情況較其他原料嚴重，與本調查結果一致。DON污染受溫濕度影響比較大，特別是收獲期間的溫濕度嚴重影響玉米DON 的含量和超標率，故玉米中DON 的污染情況受玉米生長期和收獲期的天氣因素影響[18]。本檢測結果顯示，2020 年玉米和全價配合飼料中DON 檢出率和超標率較高，且東北玉米中DON 含量較高，可能與2019 年東北地區(qū)強降雨量有關。

本研究檢測結果顯示，2019-2020 年全價配合飼料中AFB1、ZEN、DON 的檢出率均很高，表明全價配合飼料受霉菌毒素污染最為普遍。王國強[19]在2019年我國部分地區(qū)飼料及原料霉菌毒素污染調查中表明，與飼料原料相比，飼料中霉菌毒素均呈現(xiàn)較高陽性率，與本研究結果一致，可能因為飼料是由多種原料加工而成，且其在加工、運輸?shù)拳h(huán)節(jié)均可能會受到霉菌毒素侵染，因此飼料中霉菌毒素污染較單一原料更為普遍。目前，飼料及飼料原料普遍受多種霉菌毒素污染，且不同霉菌毒素之間存在協(xié)同效應，使得霉菌毒素的污染防控更為重要。一方面應從原糧的各個環(huán)節(jié)預防霉菌毒素的侵染，另一方面，要對已受霉菌毒素污染的飼料及原料選擇合適的脫毒方法進行脫毒處理。

4 結論

2019-2020 年玉米、玉米副產物、小麥及麩皮、雜粕及全價配合飼料普遍受霉菌毒素污染，且大多數(shù)飼料及原料同時受多種霉菌毒素污染。玉米及其副產物受AFB1 污染較為普遍，玉米副產物受ZEN 污染較為嚴重，小麥及麩皮受DON 污染較為嚴重。與2019年相比，2020年各類飼料及原料中AFB1平均含量呈下降趨勢，但各類原料中ZEN 污染略為普遍，且2020年玉米（尤其是東北玉米）及全價配合飼料中DON含量明顯高于2019年，應重點關注。